绵羊肺炎霉形体单克隆抗体的研制初步应用

用绵羊肺炎霉素形体抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，融合其脾细胞和ＳＰ２／Ｏ骨髓瘤细胞，筛选出６株分泌抗ＭＯ的单克隆抗体杂交瘤细胞系。用间接ＥＬＩＳＡ法对３株ＭｃＡｂ特异性分析，该ＭｃＡｂ只特异地与ＭＯ抗原发反应，而不与猪肺炎霉素形体、山羊无乳症霉形体抗原发生反应。     

分泌抗兔出血症病毒单抗杂交瘤细胞株的建立

以纯化的兔出血症病毒免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，应用杂交瘤技术获得了分泌抗ＲＨＤＶ单抗杂交瘤细胞１７株，其中有３株杂交瘤细胞分泌单抗的ＥＬＩＳＡ效价为１：４０９６００，１：４０９６；５株单抗具有血凝抑制活性。兔抗ＲＨＤＶ高兔血清对１７株ＭｃＡｂ的ＥＬＩＳＡ抑株为ＩｇＧ２ｂ。各株ＭｃＡｂ与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应，也无沉淀反应特性。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与中和效应

用提取的 Ａ 型产气荚膜梭菌 α毒素包涵体免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠后， 取小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 骨髓瘤细胞进行融合和克隆化，经间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 筛选，共获得 １ Ａ８、１ Ｃ３、１ Ｄ５、１ Ｄ８、１ Ｆ１、１ Ｈ１ 和 ２ Ｅ３ ７ 株稳定分泌单克隆抗体（ Ｍ ｃ Ａｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，７ 株 Ｍ ｃ Ａｂ 的 Ｉｇ 亚类有 Ｉｇ Ｇ１（１ Ｄ８）、 Ｉｇ Ｇ３（１ Ａ８、１ Ｃ３ 和 ２ Ｅ３）和 Ｉｇ Ｍ（１ Ｄ５、１ Ｆ１ 和 １ Ｈ１）。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为 １∶５１２～１∶１ ０２４ 和 １∶１０６ ～１∶１０８ 。尤为重要的是，２ Ｅ３ 杂交瘤细胞株分泌的 Ｍ ｃ Ａｂ 不仅能够中和 α毒素的磷脂酶 Ｃ活性和溶血活性，而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用。     

抗奶牛衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将奶牛衣原体抗原免疫的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／ Ｏ 细胞在聚乙二醇作用下融合, 用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验筛选, 以有限稀释法克隆３ 次, 得到６ 株分泌抗奶牛衣原体单克隆抗体（ Ｍｃ Ａｂ） , 选择抗体分泌较高的 Ｇ２ 、 Ｆ２３ 、 Ａ 株进行详细的研究, 结果表明, 其核内染色体数为９０３５ 、９２１４ 、９４４２ ; 抗体属性为 Ｉｇ Ｇ２ａ 、 Ｉｇ Ｇ１ 、 Ｉｇ Ｍ, 用交叉 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法对３ 株 Ｍｃ Ａｂ 作特异性分析, 该 Ｍｃ Ａｂ 只与奶牛衣原体抗原, 猪衣原体抗原、羊衣原体抗原发生反应,而不与沙眼衣原体抗原、伪狂犬病抗原、布鲁氏杆菌抗原发生反应。     

分泌抗赭曲霉素A单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用赭曲霉素Ａ（ＯＡ）－ＢＳＡ合成抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ｓｐ２／０细胞融合，通过克隆和ＥＬＩＳＡ法筛选，建立三株泌抗ＯＡ单克隆抗体杂交瘤细胞株（３Ｃ１２，１Ｄ１２和２Ｇ７）。用间接ＥＬＩＳＡ法测定，细胞上清液抗体效价为１２８＾×（３Ｃ１２）和６４＾×（１Ｄ１２和２Ｇ７）腹水抗体效价为１０＾－７（３Ｃ１２，１Ｄ１２）和１０＾－６（２Ｇ７）。三株单抗（ＭｃＡｂ）均属ＩｇＧ类，分泌抗体     

抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用绵羊肺炎支原体抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下进行融合，产生杂交瘤细胞、用间接ＥＬＩＳＡ法对杂交瘤一长孔上清液进行检测，筛阳性交瘤细胞株。     

分泌抗肝片吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用纯化的肝片吸虫可溶抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与骨髓细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选和３次克隆化培养后获得３株分泌抗肝片吸虫单克隆抗体的杂交瘤细胞。３株杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体经ＥＬＩＳＡ检测均属ＩｇＧ１亚类，上述杂交瘤细胞经反复冻存、复苏和连续传代培养，证实其分泌抗体的性质稳定。     

分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定

从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定

以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）,通过蔗糖密度梯度离心将其纯化,获得较为完整的病毒颗粒。病毒ＥＬＩＳＡ效价为１∶３×１０５,蛋白含量为３．９６ｇ／Ｌ。将提纯的ＰＥＤＶ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合,融合率为９５．６％。用间接ＥＬＩＳＡ进行筛选,共检出３８个阳性孔,阳性率为２８．８％。对其中１５个阳性值较高的孔进行３次再克隆,阳性率达１００％,最后获得１５株稳定分泌特异性抗ＰＥＤＶ单抗（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ阻断试验与交叉试验证明,其分泌的抗体具有高度特异性。腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１∶１０３～１∶１０６和１∶１２８～１∶５１２。经鉴定,１５株ＭｃＡｂ的分子类型均为ＩｇＧ,均无免疫沉淀特性。杂交瘤细胞的染色体数目为９０～１１０,平均９５。尤为重要的是,这些杂交瘤细胞所分泌的抗体,有的对ＰＥＤＶ具有中和作用,能够阻断病毒对猪只的侵害作用。     

分泌抗IBDV独特型抗体细胞株的建立

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。     

产蛋下降综合征病毒单克隆抗体的制备

以粗提的ＥＤＳ－７６病毒（ＮＥ－４株）作为抗原，按常规方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，最后一次免疫后第３天取脾细胞与ＳＰ２／０细胞进行融合，采用间接ＥＬＩＳＡ和ＨＩ进行双重筛选，共检出２５个阳性孔，阳性率为１４．８８％。对其中的１１个阳性值较高的孔进行３次克隆，最后获得的１１株杂交瘤细胞，经长期体外培养和冻存后复苏仍能稳定地分泌抗体；ＥＬＩＳＡ阻断试验和与其他病毒的交叉试验证明，其分泌的抗体具有高度特异性。经鉴定，１１株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ，均无免疫沉淀特性，腹水和细胞培养上清的ＥＬＩＳＡ效价分别为１：３２００～１：５１２００和１：１２８～１：２０４８。杂交瘤细胞的染色体数目为８０～１１２，平均９２。尤为重要的是，１１株杂交瘤细胞中有４株分泌抗ＥＤＳ－７６病毒血凝素决定簇的中和单抗，细胞培养上清和腹水的ＨＩ价分别为２１０～２￣（１２）和２￣（２２）～２￣（２４），腹水的中和效价为１：１２８０～１：５１２０。     

抗鸡IgG重链单克隆抗体的制备与应用

以提纯鸡ＩｇＧ做抗原免疫Ｂａｌｌ／ｃ小鼠，取鼠细胞在ＰＥＧ１０００作用下与小鼠骨髓细胞（Ｓｐ２／ｏＡｇ１４）融合，采用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测上清抗体，阳性孔经有限稀法进行细胞克隆，共获得了７株分泌抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞（２Ｈ８、４Ｄ８、４Ｄ８、１Ｂ７、２Ａ７、２Ｂ３、１Ｇ１２、３Ｄ１２）将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体，ＥＬＩＳＡ效价可达１０＾     

蓝舌病病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

以纯化的蓝舌病病毒（ＢＴＶ）１１型ＶＰ７免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,动用淋巴细胞杂交瘤技术,借助间接ＥＬＩＳＡ筛选,获得了３株分泌抗ＢＴＶ１１ ＶＰ７的群特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株,命名为Ｃ１２Ｄ９、Ｂ４Ｆ３、Ｅ１Ａ７。这３株杂交瘤细胞株连续传代３个月再经液氮冻存６个月后复苏培养,仍能稳定分泌特异性ＭｃＡｂ。３株ＭｃＡｂ均具有ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性,其中Ｃ１２Ｄ９株上清液的ＥＬＩＳ     

鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的建立及其应用

应用鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）作免疫原建立了８株分泌抗ＩＬＴＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株。这８株ＭｃＡｂ均具有荧光抗体的特性，没有中和病毒的能力，分别属于ＩｇＧ２ａ，ＩｇＧ３和ＩｇＭ，应用异硫氰酸荧光素标记ＭｃＡｂ，建立了直接荧光抗体试验，用其检测ＩＬＴＶ抗原与分离病毒的符合率为９２．８％。     

抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得２株（２Ｂ６株，５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，其能诱生ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按１∶１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，免疫接种ＳＰＦ鸡和普通京白公鸡，然后用ＩＢＤＶ野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒，保护率分别为８／８、１４／１４，从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。     

分泌抗细粒棘球蚴原头蚴抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用感染包虫的绵羊肝包囊中的活原头蚴腹腔接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，８个月后取鼠脾细胞与Ｓｐ２／ｏ骨髓瘤细胞融合。经ＩＨＡ筛选，获得１４个阳性杂交瘤细胞株，对其中３株进行了克隆和进一步研究。结果表明，５Ｃ５与细颈囊尾蚴、脑包虫和肝片吸虫抗原均不发生交叉反应，腹水抗体的ＩＨＡ效价为１：２０４８，属ＩｇＧ２ｂ亚类：３Ｃ５和６Ｃ４与细颈囊尾蚴和脑包虫有轻度交叉反应，腹水抗体的ＩＨＡ效价为１：１２８，均属ＩｇＭ类。     

分泌抗猪伪狂犬病毒(鄂A株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将本室分离鉴定的猪伪狂犬病毒（Ｐｒｖ）鄂Ａ株纯化后免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与经８氮鸟嘌呤（８－ＡＧ）驯化的ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合。经间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）筛选,挑选强阳性孔进行亚克隆,获得５株能稳定分泌伪狂犬病毒单克隆抗体（Ｐｒｖ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株,分别命名为４１８、４８３、５７６、６０３、７４４。经体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳体地分泌ＭｃＡｂ。培养上清液及小鼠腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为２－５～２－７和１０－５～１０－１０。各株分泌的ＭｃＡｂ不与疱疹病毒科中的ＤＰＶ、ＩＬＴＶ、ＩＢＲＶ及ＰＰＶ发生交叉反应。阻断试验结果显示阻断率均大于５０％。其中６０３、７４４分泌的ＭｃＡｂ对用ＰＲＶ致敏的乳胶具有凝集特性。相加ＥＬＩＳＡ测定证实６０３、４８３、７４４特异性作用同一抗原位点或作用相关极为密切的抗原位点,另４种ＭｃＡｂ作用位点有部分相关性。     

分泌抗细粒棘球蚴原头节可溶性抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与以羊源细粒棘球蚴原头节可溶性抗原免疫的Ｂａｌｌ／ｃ鼠脾细胞融合，经克隆和筛选后获得８株分泌抗ＳＰＡ的杂交瘤细胞株，即３Ａ４，１ＩＣ２，２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３，３Ｅ６，３Ｆ１０和２Ｃ２。亚类鉴定为ＩｇＧ１（３Ａ４，３Ｅ６，１Ｃ２，３Ｆ１０和３Ｃ２），ＩｇＧ２ｂ（２Ｃ２），ＩｇＧ３（２Ｅ３），ＩｇＧ总（２Ｂ３）。免疫双扩散法显示２Ｃ２腹水及２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３培养上清粗提物与     

分泌抗猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将猪细小病毒（ＰＰＶ）免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０细胞在聚乙二醇作用下融合，用血凝抑制试验（ＨＩ）筛选，以有限稀释法克隆３次，得到５株分泌抗ＰＰＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ），选择抗体分泌较高的４Ｆ４、Ａ４或Ｅ８进行较详细的研究，结果表明，其核内染色体数为９３和８７，抗体属性为ＩｇＧ１，其中１株为Ｋ轻链，用交叉ＨＩ法对２株ＭｃＡｂ作特异性分析，该ＭｃＡｂ只特异地与ＰＰＶ发生反应，而不与日本乙