荧光实时定量PCR方法检测猪链球菌2型

以猪链球菌2型的荚膜多糖抗原编码基因cps2J为靶基因设计引物,利用SYBR GreenⅠ能特异地与双链DNA结合发出荧光的特性,以ABI7000为平台,建立荧光实时定量PCR检测猪链球菌2型的方法。该方法检测猪链球菌2型参考株和猪链球菌2型国内分离株都呈阳性,具有良好的特异性。整个检测过程于2h内完成,检测限度为24CFU,标准曲线的相关系数为0.997。对5份采集于猪链球菌2型病猪的病料进行检测,结果表明肝脏和脾脏最适于检测。     

人结核分枝杆菌热休克蛋白70基因启动子的序列分析

卡介苗（ｂａｃｉｌｕｓｃａｌｍｅｔｅ－ｇｕｅｒｉｎ,ＢＣＧ）是一种应用广泛的活的减毒性结核菌苗,具有低毒性、免疫力持久、对热稳定等特性［１］。目前国内外学者正致力于运用基因重组技术,将ＢＣＧ发展成一种新型重组活载体疫苗［２,３］。本研究克隆了人结核分...     

猪链球菌2型对家兔的试验感染及其病理学观察

利用猪链球菌2型四川分离强毒菌株458#,通过腹腔注射接种日本大耳白家兔,观察其临床症状和病理学变化。结果表明,猪链球菌2型强毒株458#可引起家兔发病或死亡,并能从发病家兔的组织样品中分离到所接种毒株。感染家兔的特征性组织病理学变化表现为典型的弥漫性血管内凝血和微血栓形成。猪链球菌2型感染家兔动物模型的建立,对于评价猪链球菌2型的毒力,探索其发病机制具有重要的意义。     

东北虎出血性腹泻病原分离与鉴定

东北虎为国家一级保护野生动物,我国境内野生东北虎数量现不足20只.人工繁育对东北虎的研究及种群维持具有重要意义.2006年2月,某野生动物园养殖的东北虎暴发出血性腹泻,表现为食欲下降,呼吸急促,体温升高,卧地不动,对外界刺激不敏感,腹泻,排血便或焦油样稀便等症状,病程长短不一,预后不良.部分病虎经抗生素静脉注射、口服和灌肠等治疗无效死亡.1只成年雌虎治疗两周后出现后肢抽动的神经症状.病死虎剖检胃内充满血液,有溃疡灶.肠壁增厚,有多量血性黏液,结肠黏膜脱落,呈纤维素性坏死性肠炎.肾呈暗棕色,被膜易剥离,皮质、髓质界限不清.肝脏充血、肿大.其他脏器变化不明显.采集病料进行病原分离,分离到两种病原菌,分别为魏氏梭菌和弗氏柠檬酸杆菌,经鉴定对实验动物均具有致病性.报告如下.     

微孔塑板四唑氮蓝试验对鼻疽马免疫状态的探测

为了寻求适用于马体的四唑氮蓝(NBT)试验方法,进而探测该试验与鼻疽马免疫状态的关系。本实验进行了NBT定性方法的比较和试验条件的筛选,并通过对健马62匹和各种类型鼻疽马88匹的测定以及对7匹鼻疽菌接种马长达9个月的定期检测,初步获得了鼻疽马免疫状态的检测指标,对鼻疽免疫机理的研究提供了新的手段。     

EHEG O157△ler/stx(pBR322∷stx 1/2B∷eae)的构建与生物学特性分析

为了获得安全性好,对出血性大肠杆菌具有良好免疫保护作用的疫苗株,本实验以构建的O157△ler/stx基因缺失突变株为载体,将决定特异性粘附的eae全基因插入到质粒pBR322∷stx1/2B中,构建了基因工程菌O157△ler/stx(pBR322∷stx1/2B∷eae),对该基因工程菌进行生物学特性分析,实验结果表明,该菌正常培养可表达eae;具有粘附HEp-2细胞的特性;该菌培养上清对Vero细胞没有毒性作用;给小鼠口服接种该工程菌后可在肠道中定居至少10 d;14日龄小鼠口服活菌量为5×109CFU/只,小鼠生长正常,没有出现任何临床症状;该菌通过口服免疫小鼠可以诱导肠道粘膜免疫应答和体液免疫应答.这些结果表明,该工程菌安全性好,免疫原性强,是有价值的预防EHEC O157感染的基因工程疫苗候选株.     

大肠杆菌耐热性肠毒素ST1—K99／LacZ基因重组的研究

将构建的ｐＢＳＴ２～６工程菌质粒用限制性内切酶ＢａｍＨＩ／ＢｇｌⅡ酶切，经琼脂糖凝胶电泳和电洗脱，回收１４７ｂｐ的目的ＳＴ１基因。随之将该基因分别重组到能有效表达Ｋ９９菌毛抗原和ＬａｃＺ酶的ｐＧＫ９９之Ｋ９９基因ＢｇｌⅡ位点和ｐＵＣ１８的ＢａｍＨＩ位点中。通过ＳＴ１基因探针菌落原位杂交、特定酶切分析及ＤＮＡ序列分析，筛选并鉴定出了理想重组子，从而构建出了能分别表达ＳＴ１融合基因产物的工程菌株ｐＳＫ２１９和ｐＸＳＴ１。     

PCR在ST_1基因扩增及其基因探针制备上的应用

本研究旨在将ST_1基因插入到能表达K_(99)抗原的质粒载体适当位点中,构建成能表达ST_1—K_(99)两种抗原的工程菌苗.我们应用PCR成功地扩增了该基因,并进行了ST_1基因探针的制备,为下一步基因重组和重组子筛选提供了有利条件,还为ETEC流行病学调查提供了新方法.