间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚尿囊液经差速离心后，再经蔗糖密度梯度离心，提纯ＡＩＶ，纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融，即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原，用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔，制备兔抗鸡ＩｇＧ，用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ。确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗体的最适工作条件，即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ，每孔１００μｌ，４℃冰箱过夜；用含０．５％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的磷酸盐缓冲液，３７℃封闭６０分钟；待检血清最佳稀释度为１８０～１６４０，作用６０分钟；酶标抗体作１２０００稀释，作用６０分钟。根据对５２份ＳＰＦ鸡血清的检测结果制定了判定标准。