SYBR Green Ⅰ实时定量PCR快速检测鸭瘟病毒的研究

根据GenBank中鸭瘟病毒(DPV)UL6和UL7基因的保守序列,设计了一对特异性引物,扩增位于UL6和UL7基因第891～991位长度为101bp片断。以DPV标准强毒株DNA为模板,建立了SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测鸭瘟病毒的方法,用该方法检测鸭瘟标准强毒、疫苗毒及野毒株均为阳性,检测其他受试的非鸭瘟病毒DNA均为阴性,对鸭瘟强毒和疫苗毒人工感染鸭胚尿囊液的检出率均为100%,对6个临床送检样本的检出率为6/6,与病毒分离鉴定结果一致;最小检出量为1.57×104拷贝/ul。     

鸭瘟病毒PCR快速检测方法的建立

根据Gen Bank公布的鸭瘟病毒UL30基因保守序列设计了一对引物,建立了检测鸭瘟病毒PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该PCR方法对鸭瘟病毒扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对鸭瘟病毒检测的灵敏性为1 pg总DNA量。以上结果表明该PCR方法特异性强、敏感性高、简便、快速,可用于鸭瘟的早期确诊和病毒鉴定。     

鸭瘟病毒PCR快速检测方法的建立及应用

根据Gen Bank公布的鸭瘟病毒UL30基因保守序列设计了1对引物,建立了检测鸭瘟病毒PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该PCR方法对DPV扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对鸭瘟病毒检测的灵敏性为1pg总DNA量。以上结果表明该PCR方法特异性强、敏感性高、简便和快速,可用于鸭瘟的早期确诊和病毒鉴定。     

鸭瘟病毒PCR检测方法的建立与优化

为了快速、准确诊断鸭瘟病毒,根据Gen Bank中登录的鸭瘟病毒基因(UL51)序列,设计合成1对特异性引物,以鸭瘟疫苗株病毒基因组DNA为模板进行PCR扩增;优化PCR扩增程序中的延伸时间、退火温度、循环次数,并对方法的敏感性和特异性进行验证。结果表明:PCR方法经优化后可扩增得到916 bp的目的条带,同预期相符;该方法的最低检出浓度为1.041μg/m L,对其他7种常见鸭易感性病原体的检测结果均为阴性。说明该诊断方法的特异性好、灵敏度高,同时操作快速、简单,可应用于实验室快速诊断鸭瘟病毒。     

实时荧光定量PCR快速检测鸭病毒性肠炎标准方法的建立

根据GenBank(登录号:EF417996)中鸭病毒性肠炎病毒U31基因的序列,设计了1对特异性引物及TaqMan探针,扩增片段长度为76 bp.以鸭病毒性肠炎弱毒疫苗株DNA为阳性标准品模板,建立了实时荧光定量PCR检测鸭病毒性肠炎病毒的方法.该方法能在鸭病毒性肠炎病毒DNA样本中检出荧光信号,定量范围为:2.1×109～2.1×100个拷贝数,最小检出量为2.1×100个拷贝;用该方法对人工感染试验的4只鸭组织器官、粪便、血液等样品重复测定3次,病毒模板DNA的检出率为100%,对鸭正常组织、巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门菌和鸭病毒性肝炎、鹅源禽流感H5毒株、新城疫、小鹅瘟病毒等DNA检测不出现特异性荧光信号.经过重复性和实际临床样本检验证实,该方法真实可靠,而且从核酸提取到报告检测结果耗时不超过4 h,不仅实现了对鸭病毒性肠炎的快速诊断,也实现了对该病毒DNA由定性到定量的检测.     

基于UL2基因B片段序列建立鸭瘟强毒检测方法的可行性分析

通过比较10株鸭瘟强毒与11株鸭瘟弱毒的UL2基因序列(包括GenBank中所有登录的鸭瘟病毒UL2基因序列),发现鸭瘟弱毒的UL2基因均缺失了528bp的B片段。基于UL2基因B片段序列设计引物,建立了理论上能特异检测鸭瘟强毒的荧光定量PCR和常规PCR检测方法(即对鸭瘟强毒的检测为阳性,对鸭瘟弱毒的检测为阴性),并对PCR产物进行了克隆和测序分析。结果显示,2种检测方法除了对鸭瘟强毒的检测为阳性外,对5株鸭瘟弱毒的检测也均为阳性,PCR产物的测序分析也说明扩增产物为UL2基因的B片段。结果表明,不能通过在UL2基因的B片段设计引物,来建立特异检测鸭瘟强毒的检测方法。     

基于重组酶介导扩增技术诊断鸭瘟方法的建立

以具有种属特异性的鸭瘟病毒gC基因为靶基因,设计引物和荧光标记探针,使用重组酶介导扩增方法(Recombinase aid amplification assay,RAA),39℃恒温扩增,建立了检测鸭瘟病毒的普通和荧光RAA方法。该方法具有良好特异性,仅对鸭瘟病毒检测结果为阳性,而与番鸭细小病毒、小鹅瘟病毒、禽传染性喉气管炎病毒、马立克氏病毒、鸭源沙门菌、鸭源大肠杆菌O157无交叉反应。普通和荧光RAA方法的灵敏度分别为100 copies/μL和10 copies/μL,对28份留存的鸭瘟阳性组织样本和84份疑似鸭瘟临床样品检测结果表明建立的方法与商业化PCR试剂盒的符合率为100%。结果表明,RAA方法实现常温扩增、操作简单、费用低廉、无需热循环过程,是一项具有广泛前景的方法。     

探针实时荧光定量PCR检测白藜芦醇体外抗鸭瘟病毒活性方法的建立及应用

建立以TaqMan荧光探针为特点的PCR,检测白藜芦醇体外抗鸭瘟病毒活性。本研究针对鸭瘟病毒UL30基因序列设计特异性引物和TaqMan荧光探针,建立鸭瘟病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,并验证方法的特异度、敏感度和稳定性及对临床样品进行检测;运用该方法检测白藜芦醇对鸭胚成纤维细胞接种鸭瘟病毒后细胞中病毒增殖情况的影响,用以评价该药物体外抗鸭瘟病毒效果。结果显示,该方法建立的定量标准曲线阈值循环数（Threshold cycle,Ct）与模板拷贝数呈良好线性关系（R2=0.997）,斜率为-3.328,扩增效率（E）为99.7%,具有良好的特异度、敏感度和稳定性并能对临床样本进行准确的检测。运用该方法检测白藜芦醇体外抗鸭瘟病毒结果显示：经白藜芦醇处理后,染毒细胞中病毒拷贝数为（7.71±0.37）×10^4,与病毒对照组比较（5.63±0.26）×10^6明显减少（P〈0.01）。结果表明,TaqMan探针实时荧光定量PCR方法建立并成功用于体外药物抗鸭瘟病毒的检测;白藜芦醇具有良好的体外抗鸭瘟病毒活性。     

鸭2型疱疹病毒的分子生物学依据

鸭2型疱疹病毒，是一种可侵害番鸭、半番鸭等不同品种鸭的疱疹病毒科新成员，经生物学特性测定、血清学试验及致病性试验表明该病毒不同于鸭瘟病毒。采用SDS-PAGE分析表明该病毒的结构蛋白带有14条，主要结构蛋白带有7条，其分子量分别为310、163、95、79、69、39、15KD，不同于鸭瘟病毒。依据鸭瘟病毒UL6基因的序列，设计了一对引物，经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳表明只有鸭瘟病毒核酸提取物可扩增出大约420bp的DNA片段，而鸭2型疱疹病毒核酸提取物、鸡传染性喉气管炎病毒核酸提取物和正常细胞培养物均未扩增出目的基因片段，可见鸭2型疱疹病毒与鸭瘟病毒在DNA分子水平上也存在差异。本研究揭示了该病毒与鸭瘟病毒在结构蛋白和核酸水平上的差异，进一步表明该病毒不同于鸭瘟病毒，为该病毒的确切分类提供了分子生物学依据。     

PCR用于鸭瘟病毒诊断的研究

根据鸭瘟病毒UL6和UL7基因序列,设计合成了一对引物,以2株疫苗株、1株强毒株和1株山东分离株DNA为模板,进行PCR扩增,得到预期690bp的目的片段.将扩增的目的片段克隆到pMD18-T载体,经Amp平板筛选,HindⅢ、BamHⅠ双酶切鉴定,获得阳性重组质粒.对重组质粒进行序列测定,与参考序列比较,山东分离株与参考序列的同源性为99.7%,其余3株DPV与参考序列的同源性均为100%.应用PCR可检测人工感染和自然感染鸭瘟的组织中的鸭瘟病毒,表明PCR检测鸭瘟病毒具有很高的特异性、敏感性,该法能够用于鸭瘟急性及亚临床感染的检测与诊断.     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

两种绿头鸭肌肉营养成分分析及评价

本试验旨在研究两种绿头鸭（白羽绿头鸭和绿头鸭）肌肉营养组成和价值,为绿头鸭肉产品的开发利用提供基础数据和理论依据。选择白羽绿头鸭和绿头鸭60只（每个品种各30只,公母各半）,依照国家标准测定胸肌粗蛋白质、粗脂肪、胆固醇含量及氨基酸、脂肪酸、微量元素和维生素的组成和含量,并对胸肌进行氨基酸评价及脂肪酸营养价值评价。结果显示,白羽绿头鸭肌肉粗蛋白质含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;两种绿头鸭肌肉中均检测到17种含量大于0.01%的氨基酸,其中白羽绿头鸭肌肉苏氨酸、组氨酸、丝氨酸和脯氨酸含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,赖氨酸、谷氨酸和精氨酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到13种含量均大于0.01%的脂肪酸,其中白羽绿头鸭硬脂酸和油酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到9种矿物质元素（钠、镁、钾、钙、锰、铁、铜、锌和硒）,两种绿头鸭差异不显著（P>0.05）;检测到8种维生素,白羽绿头鸭肌肉维生素B₁含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,维生素D和维生素E含量显著低于绿头鸭（P<0.05）。两种绿头鸭肌肉氨基酸比例接近世卫组织推荐的理想模式,富含人体所需的矿物质元素和维生素,具有广阔的开发利用前景。     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

Analysis and Evaluation of Nutrient Composition of Muscles of Two Kinds of Mallard

This experiment was aimed to study the nutritional content and value of the muscles of two mallards (White feather mallard and mallard),and provide basic data and theoretical basis for the development and utilization of mallard meat products.60 White feathered mallards and mallards (30 for each breed,half of male and female) were chosen,and the composition and content of pectoral muscle crude protein,crude fat,cholesterol,amino acids,fatty acids,trace elements and vitamins were determined according to national standards and the nutritional values of muscle were evaluated.The results showed that the content of crude protein in muscle of White feather mallard was significantly lower than that of mallard (P<0.05).17 kinds of amino acids with contents higher than 0.01% were detected in the muscles of the two kinds of mallards,among which the contents of threonine,histidine,serine and proline in the muscles of the White feather mallard were significantly higher than those of mallard (P<0.05).The contents of lysine,glutamate and arginine were significantly lower than those of mallard (P<0.05).13 kinds of fatty acids with contents higher than 0.01% were detected,and the contents of stearic acid and oleic acid were significantly lower than those of the mallard.9 mineral elements (sodium,magnesium,potassium,calcium,manganese,iron,copper,zinc and selenium) in two kinds of mallards were detected,and there was no significant difference between the two kinds of mallards (P>0.05).8 kinds of vitamins were detected,and the content of vitamin B₁ in muscle of White feather mallard was significantly higher than that of mallard (P<0.05),but the contents of vitamin D and vitamin E were significantly lower than that of mallard (P<0.05).The ratio of amino acids in muscle of two kinds of mallards was close to the ideal model recommended by WHO,which was rich in mineral elements and vitamins for human body,and had a broad prospect of development and utilization.     

三种圈养雉类的行为比较研究

2008年7月23日～8月5日和8月7～13日,采用目标动物取样法分别研究了4只蓝鹇(2♂2♀)、3只白鹇(1♂2♀)和5只白腹锦鸡(2♂3♀)的各种行为的发生频率进行了研究。结果发现3种雉类的各种行为类型都相似,但不同雉类间各种行为发生频次有差异。白腹锦鸡、蓝鹇和白鹇的休息行为分别在8:00、9:00和10:00达到日高峰,分别为12.05次/h、28.39次/h和14次/h。蓝鹇、白鹇、白腹锦鸡运动相关行为分别在7:00、8:00、9:00出现峰值,为19.29次/h、21.76次/h、24.90次/h;10:00蓝鹇、白鹇、白腹锦鸡的运动相关行为发生频次都出现了白昼的第一个谷值,分别为6.71次/h、9.29次/h、15.19次/h。蓝鹇、白鹇、白腹锦鸡的梳理行为9:00出现谷值分别为7.64次/h、8.05次/h、11.67次/h,10:00出现峰值分别为17.25次/h、21.19次/h、21.0次/h。3种雉鸡的采食行为的日节律相似。     

不同类型黑麦草营养价值评估

文章旨在通过体内外试验评估不同类型黑麦草的营养价值。试验选择平均体重为（66.87±2.34）kg的绵羊12头,随机分成3组,每组4个重复,每个重复1头。3组绵羊分别饲喂新鲜、青贮和晒干黑麦草。经过14?d的饲养试验后收集粪便和牧草样品进行后续分析。结果：晒干黑麦草的干物质、有机物和无氮浸出物含量均表现最高（P＜0.05）。新鲜黑麦草粗蛋白质和半纤维素含量较青贮黑麦草分别显著提高42.10%和10.82%（P＜0.05）。青贮黑麦草粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量显著高于其他两种类型的黑麦草（P＜0.05）。新鲜、青贮和晒干黑麦草的粗蛋白质、粗脂肪和粗纤维表观消化率无显著差异（P＞0.05）。晒干黑麦草干物质表观消化率较新鲜和青贮黑麦草显著提高6.34%和6.21%（P＜0.05）,同时晒干黑麦草有机物表观消化率较新鲜黑麦草显著提高6.65%（P＜0.05）,无氮浸出物表观消化率较青贮黑麦草显著提高15.44%（P＜0.05）。当体外代谢能值以MJ/kg有机物表示时,新鲜和青贮黑麦草代谢能值较晒干黑麦草分别显著提高21.34%和22.41%（P＜0.05）,而当体外代谢能值以MJ/kg干物质表示时,新鲜黑麦草能值最高,青贮黑麦草能值次之,晒干黑麦草能值最低（P＜0.05）。结论：新鲜、晒干和青贮黑麦草在不同营养成分上各有优势,但3种牧草主要营养物质的表观消化率和代谢能值无显著差异。因此,无论是新鲜、晒干还是青贮黑麦草都可以作为反刍动物粗饲料的良好来源。 [关键词]黑麦草;青贮;营养价值;消化     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

Comparison of four techniques of arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint of the horse

Reasons for performing study: Clinical experiences indicate that centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint is often unsuccessful. Objective: To determine the accuracy of 2 published and 2 unpublished techniques of centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint. Hypothesis: It was hypothesised that a drug can be administered into the lateral compartment of the femorotibial joint via a diverticulum of this joint that surrounds the medial aspect of the long digital extensor tendon and that this technique is more accurate than described techniques of centesis of this compartment. Methods: Twenty‐four stifles of 12 horses were divided equally into 4 groups and a radiocontrast medium injected into the lateral compartment of the femorotibial joint of each group using a hypodermic needle inserted: 1) caudal to the lateral patellar ligament and proximal to the tibial plateau, 2) caudal to the long digital extensor tendon and proximal to the tibial plateau, 3) between the long digital extensor tendon and bone of the extensor groove of the tibia or 4) directly through the long digital extensor tendon until it contacted bone. Twelve veterinary students who had no experience using any of these techniques performed the injections. Accuracy of each technique was determined by examining radiographs obtained after injecting the contrast medium. Results: The most successful technique for arthrocentesis was by inserting a needle through the long digital extensor tendon. This approach was successful in all attempted cases, whilst other techniques had lower rates of success. Conclusions: The lateral compartment of the femorotibial joint can be accessed accurately by inserting a needle through the long digital extensor tendon as it lies within the extensor groove. Other techniques may not be as accurate for clinicians inexperienced in arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint.