实时定量PCR技术在动物疫病研究中的应用

实时定量PCR（real-time quantitative PCR）是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。实时定量PCR继承了PCR技术灵敏、快速、特异的优点，同时又克服了PCR技术中存在的假阳性率高、易污染、EB染料对实验人员的危险以及不能进行准确定量等缺点。实时定量PCR实现了PCR从定性或半定量到准确定量的飞跃，目前，已经成为分子生物学和医学研究等领域的重要工具。本文就实时定量PCR技术及其在动物研究领域中的应用作一综述。     

PCR和基因剔除技术在动物营养研究中的应用

分子生物学技术的迅速发展为营养科学探索必需营养缺陷的分子基础提供了强有力的实验工具.本文旨在对几种PCR技术和基因剔除技术的原理及其在营养研究中的应用作一综述.     

PCR-SSCP技术在动物育种中的研究进展

PCR—SSCP技术是新近发展起来的一种分子生物学分析方法，由于其广泛和潜在的应用价值，已被广泛应用于医学和其他生命科学的研究中。本文介绍了PCR—SSCP技术的发展、特点及其在动物遗传育种研究中的应用和发展前景。     

定量PCR技术研究进展

定量PCR是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术。自1985年Saiki等首次描述聚合酶链反应(Poly-merase chain reaction,PCR)技术以来,因其展现了前所未有的敏感性和特异性,受到了人们的高度重视。如今各种各样以PCR为基础的DNA序列的扩增和控制方法得到了迅猛发展,几乎已应用于基础研究的各个领域。但在许多情况下,研究者们已不再满足于得知某一特异DNA序列的存在与否,他们更着眼于对其进行精确的核酸定量。因而,借助PCR对基因快速、敏感、特异而准确的定量成为目前分子生物学技术研究的热点之一。1定量PCR(quantitative P…     

荧光定量PCR检测方法在猪瘟诊断上的应用研究进展

实时荧光定量PCR技术是结合PCR技术、光谱技术和计算机技术发展起来的一种新型分子生物学定量检测技术,其融合了PCR技术的高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量的特点,不仅实现了对核酸模板的定量,而且具有特异性强、灵敏度高、重复性好、准确性强、自动化程度高、速度快、全封闭反应、无污染等优点,在猪瘟疫苗的定量检测、猪瘟病毒的诊断以及猪瘟强、弱毒鉴别诊断中得到广泛应用,显示出良好的应用前景。本文就荧光定量PCR技术及其在猪瘟诊断上的应用概况作一综述,以期为我国猪瘟的综合防控提供参考。     

猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法研究进展

实时荧光定量PCR技术是结合PCR技术、光谱技术和计算机技术发展起来的一种新型分子生物学定量检测技术,其融合了PCR技术的高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量的特点,它不仅实现了对核酸模板的定量,而且具有特异性强、灵敏度高、重复性好、准确性高、自动化程度高、速度快、全封闭反应、无污染等优点,在猪瘟疫苗的定量检测、猪瘟的诊断以及猪瘟病毒强、弱毒株鉴别诊断中得到了广泛应用,显示出了良好的应用前景。论文就荧光定量PCR技术及其在猪瘟诊断上的应用做一简要综述,为我国猪瘟的综合防控提供参考。     

核酸定量方法研究进展

核酸是一切生物都含有的存在于细胞核的重要成分,是生命现象中不可缺少的生物大分子,也是生物遗传信息的载体,它控制着蛋白质的合成和有机体细胞的机能,在生物的生长、发育、繁殖、遗传和变异等生命活动中占有极其重要的地位。随着分子生物学的广泛应用,核酸的研究已由定性跨越到定量阶段,在核酸的定量研究过程中,方法学上经历了传统的杂交印迹法、分光光度法、电化学法、基于PCR技术的各种定量方法及毛细管电泳法等定量与半定量方法,文章就以上方法进行综述,着重阐述近年来发展最迅速、应用最广泛的PCR技术。     

实时定量PCR技术在瘤胃微生物定量分析中的研究应用

随着对瘤胃微生物研究的逐步深入,一些以分子生物学技术为基础的定量分析方法对瘤胃微生物的研究方兴未艾。本文简要介绍了实时定量PCR技术的原理、操作程序以及该技术在反刍动物瘤胃微生物定量分析中的应用现状、取得的成果和前景展望。     

荧光定量PCR技术在疾病检测上的应用

实时荧光定量PCR技术融汇了传统PCR技术灵敏、快速、特异的特点以及光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点,以直接探测PCR过程中荧光信号的变化获得定量的结果。因其具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点,成为当前疫病检测广泛采用的分子生物学诊断技术。本文就实时荧光定量PCR技术在疾病检测上的应用作一综述。     

数字PCR技术及对动物疫病检测应用

数字PCR是近年发展起来的一种核酸绝对定量的检测技术,与传统的PCR和荧光PCR技术相比,数字PCR具有较好灵敏度、准确度和重复性,可实现绝对定量分析,为动物疫病的早期诊断和病原的定量检测提供了一个新平台。本文介绍了数字PCR的技术原理,并对该技术在动物疫病检测领域的中应用进行综述。随着数字PCR技术的发展,相关动物疫病配套检测试剂的研发,数字PCR技术将在动物疫病中得到广泛应用。     

应用实时荧光定量PCR测定牛体细胞端粒长度

本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative PCR,Q-PCR）测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长度相对T/S为1.16±0.24,Southern印迹法测量端粒平均TRF值为16.99 kb±0.85 kb,两种方法获得的结果相关性分析R2=0.5612(P＜0.01),因此实时荧光定量PCR是一种测定牛基因组端粒长度的可靠的方法。     

口蹄疫诊断技术的研究进展

口蹄疫是一种重要的人畜共患传染病,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失,阻碍畜牧业、畜产品加工业的发展,并危害人体健康。各国都采取了多种措施控制该病的发生。而防制口蹄疫的重要环节是要作出及时、准确的诊断。作者对口蹄疫诊断技术研究进展,包括ELISA诊断技术研究以及分子生物学诊断技术研究进展进行了综述,并对口蹄疫诊断技术进行了展望。     

A validation of 10 feline reference genes for gene expression measurements in snap-frozen tissues

For a proper determination of relative mRNA expression levels with real-time quantitative PCR (Q-PCR) internal standards, such as the expression of reference genes, are of utmost importance. For cats, in contrast to dogs, no validation of reference genes has been published. Our goal was to evaluate frequently used reference genes for the analysis of relative mRNA levels from feline tissues in a SYBR Green-based Q-PCR protocol. First, primers were optimized on mRNA-derived cDNA from liver and kidney tissues of randomly chosen (healthy and diseased) cats. Then, the expression variation and stability of each reference gene within a specific tissue was determined. Dental roots and crowns, heart (left ventricle), renal, liver, lung, and mammary gland tissues from 3 to 11 cats of different breeds, sexes, ages, and disease status were included in this study. Averaging relative stabilities over these six tissues revealed the usefulness of each tested gene as reference gene. In order to compensate for the expression variation of a reference gene within a specific tissue, as much as six reference genes (e.g. RPL17, RPL30, RPS7, YWHAZ, and HPRT) were required to obtain highly reliable data in cat tissues. The optimal set of reference genes depended on the tissue analyzed and should, ideally, be selected and evaluated at the start of each experimental condition. A comparison with a similar evaluation in dogs revealed three issues: (i) most ribosomal genes are suitable in both species; (ii) good non-ribosomal reference genes differ; (iii) more feline than canine reference genes are required for proper analysis.     

PCR及相关技术在鸡球虫种株鉴别方面的应用

鸡球虫病是危害养禽业的重大疫病之一,其病原属于艾美耳属(Eimeria)的球虫,世界上公认有7种。过去,其病原的鉴别一直是研究的难点。近年来,由于分子生物学技术,尤其是PCR及其相关技术的迅猛发展及在寄生虫分类中的应用,鸡球虫种、株鉴别方法也由以形态特征和生活史等为标准的传统分类学进入了以核酸为材料的现代分子分类学时代。文章对PCR及其相关技术在鸡球虫种、株鉴别方面的应用做了较为全面的阐述,并分析了其优缺点。     

瘤胃微生物定量方法的研究进展

当前人们对瘤胃中微生物的认识只有10%～20%,不断改进研究技术和手段,才能大大推动瘤胃微生态领域的研究。作者阐述了瘤胃微生物传统定量方法（滚管计数法和最大或然数法）和分子生物学定量方法,如探针杂交技术、荧光原位杂交、DGGE、定量PCR和流式细胞计量术（flow cytometry )等的应用状况及其各自的优缺点。     

利用Real-time PCR对外周血白细胞中EIAV前病毒及血浆中病毒RNA含量的测定

利用Real-time PCR和Real-time RT-PCR方法对马传染性贫血病(EIA)驴白细胞弱毒疫苗(DLA-EIAV)、DLA-EIAV感染性分子克隆衍生毒(vOK8226)、强弱毒嵌合病毒(vOKVltr)以及EIA强毒接种马后不同时期外周血白细胞中前病毒含量及血浆中病毒含量进行了监测,结果发现直接攻击强毒的2匹马及1匹接种vOK8226后再用强毒攻击的马血浆中病毒含量快速升高,伴随着明显的临床反应,最后均以死亡结束.其它免疫接种马在攻击强毒后均获得保护,没有发病,马血浆中有低水平病毒存在,攻毒后3个月血浆中检测不到病毒,说明感染马体内病毒的大量增殖与疾病的进程有着直接的关系.而外周血白细胞中前病毒的含量在各试验马各时期均能检测到,说明EIAV以前病毒的形式潜伏在感染马体内,疫苗的免疫只能控制发病,而不能清除感染的病毒.     

基于转录组测序的牧草分子标记开发研究进展

转录组测序是一种获得生物组织或细胞几乎所有转录本的高通量测序技术,测序所得的基因编码序列可用于研究植物在不同条件下的基因表达、调控方式及后续的功能基因发掘与遗传进化分析。随着分子标记技术的快速发展,转录组测序数据也可作为标记开发的重要来源,为牧草开展种质资源遗传多样性评价、遗传变异分析、居群结构研究和育种提供有效工具。本文综述了基于转录组测序的牧草分子标记如EST-SSR和SNP的开发及应用现状,以期为牧草分子标记开发提供重要参考。     

The Research Progress of Molecular Technology for Dairy Cattle Breeding

Molecular breeding technology is direct selection at the DNA level by randomly distributed molecular markers throughout the genome polymorphism comparison,it is helpful to carry out more comprehensive study of polymorphism on investigated subjects,meanwhile,more information can be got,and the accuracy of selection will be higher,thereby,the milk production efficiency and economic benefits can be improved.From the perspective of the dairy cattle molecular breeding technology,the author expounds the research challenges,problems and research progress on several aspects,such as localization of QTL,MAS,transgenic breeding and GWAS,points out that molecular breeding techniques have a very important role in dairy cattle breeding and improvement process.Further research and application of molecular breeding technology not only can accelerate the development of dairy cows in the core group of comprehensive construction,but also is very necessary to cultivate a bull.     

奶牛分子育种技术研究进展

分子育种技术是在DNA水平上直接进行选择,通过对随机分布于整个基因组的分子标记的多态性进行比较,更加全面地了解研究对象的多态性,可以获得更大的信息量,选种的准确性也更高,进而提高奶牛生产效率和经济效益。作者从奶牛分子育种技术的角度入手,阐述了数量性状基因的定位、分子标记辅助选择、转基因育种以及全基因组关联分析这几方面的研究难点、存在问题和研究进展,指出分子育种技术在奶牛育种及改良过程中具有非常重要的作用,进一步研究并应用分子育种技术,不仅可以加速我国奶牛核心群的全面建设,而且对培育种公牛也是非常必要的手段。     

牛主要抗病候选基因的研究进展

牛抗病基因与其自身的抗病性和免疫能力有一定的相关性,因此研究相关抗病基因对提高牛自身免疫能力和选育优良后代有重要意义,文章着重介绍了国内外关于天然抗性相关巨噬细胞蛋白1（natual resistant macrophage protein 1,Nramp1）、主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex,MHC）、甘露糖结合凝集素（maflnan binding lectin,MBL）、Toll样受体（Toll-like receptors,TLR）及干扰素基因（interferon,IFN）与牛某些疾病相关性的研究进展,及其是否可用于后代育种的分子标记,如MHC与奶牛的乳房炎密切相关;牛TLR4基因的外显子1760 C>T突变中的CC基因型可作为奶牛乳房炎抗性筛选中的分子标记等。笔者认为研究这些抗病基因可更深层次了解牛的抗病机制,同时借助先进的技术手段如分子标记、基因工程等,可更好的选育出抗病后代,抗病基因在育种中的应用将是未来研究抗病性和免疫能力的主要方向。