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产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130高产菌株的选育 总被引:6,自引:0,他引:6
以黄海黄杆菌YS-9412-130菌株为出发株,经亚硝基胍、硫酸二乙酯、紫外线(UV)与微波(MI)复合诱变和自然选育,获得1株产低温碱性蛋白酶高产稳定的突变株YS-9412-130-SW1-104,其产低温碱性蛋白酶为出发株的16倍。在摇瓶发酵培养条件下,酶活力达2320U/ml(20℃测定),该诱变株具有Ref^r、Str^r、Amp^r和Met^-、Lys^-标记。突变株与出发菌株在细胞形态上比较,结果表明二者没有显著差异。 相似文献
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黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶性质鉴定 总被引:8,自引:3,他引:8
对黄海黄杆菌YS-9412-130菌株产低温碱性蛋白酶的理化性质研究表明,该酶由256个氨基酸组成,分子量为33000Dar,等电点pI为9.45,米氏常数Km为5×10-3mmol/L;酶的最适作用pH范围为9.5~10.5,最适作用温度30℃,具有一定的抗氧化稳定性。Ca2+、Mn2对酶有激活作用,而Hg2+、Ag+对酶有抑制作用。DFP、NBS严重抑制酶的活性,而同时该酶也能被EDTA抑制。结果表明该低温碱性蛋白酶为一新型的丝氨酸蛋白酶。 相似文献
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黄海黄杆菌YS-9412-130产酶发酵条件的优化 总被引:4,自引:0,他引:4
以产低温碱性蛋白酶的黄海黄杆菌YS-9412-130突变株SW2-104为培养菌株,进行碳源、氮源、无机盐、起始pH值、培养时间、接种量和接种龄等发酵条件的优化实验。实验结果证明,在以1%葡萄糖为碳源,以3.5%豆饼粉为氮源,无机盐:0.4%Na2HPO4、0.03%KH2PO4、0.02%MgSO4、0.1%Na2CO3、0.2?Cl2,起始pH值7.0,接种12h种龄的种子4%,20℃、250r/min的条件下在旋转摇床中培养36h,菌株产酶活性最高。 相似文献
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黄杆菌属中的一个新种 总被引:3,自引:0,他引:3
由海产贝类中分离到一菌株YS-9412-130,为革兰氏阴性短杆菌、末端圆、有鞭毛、不能滑行运动、大小为0.4~0.7μm×1.0~1.5μm,裂殖生殖,不生成芽孢,胞内无多-β-羟基丁酸颗粒。菌落光滑,黄色、半透明,边缘完整。其色素无荧光,含类胡萝卜素,其正己烷提取液经光谱测定最大吸收峰为450nm。该菌生长的温度范围为0~25℃,最适为18~22℃,最高25℃(在25℃生长极弱或几乎不生长)。此菌株于pH7.0~9.0能生长,最适pH为7.5,耐6%NaCl,80μg/m1的链霉素或80μg/ml的氨卞青霉素。YS-9412-130菌株为好气菌,严格的有氧呼吸代谢,过氧化氢酶、氧化酶阳性和磷酸酶阳性,利用多种糖、水解淀粉但不分解纤维素、琼脂和几丁质。水解干酪素、胨化石蕊牛奶最后变碱。液化明胶试验阴性,还原硝酸盐;不产H2S和吲哚;MR和V.P.试验阴性;YS-9412-130菌株DNA中G+C含量为32.2mol%。该菌株的特征符合黄杆菌属的特征,但与此属中的其他种比较又有显著的差别,因此将其定为黄杆菌属一新种,命名为黄海黄杆菌(Flavobacteriumyellowseasp.nov)。 相似文献
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嗜水气单胞菌J-1株丝氨酸蛋白酶基因克隆与序列分析 总被引:2,自引:3,他引:2
根据已发表的气单胞菌胞外蛋白酶基因核苷酸序列,设计和合成了一对引物,以嗜水气单胞菌AhJ—1的基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增到约900bp的丝氨酸蛋白酶基因片段,并克隆到质粒载体pGEM—T中进行测序和分析,结果表明扩增的丝氨酸蛋白酶基因片段与已发表的嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶Ahe2的同源性有87%,扩增片段编码343个氨基酸,推测的分子量为35700,计算机软件分析表明编码的氨基酸有较高的抗原性,可作为核酸疫苗的侯选基因片段。 相似文献
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在从患病大口鲇中分离到普通变形杆菌TWN-3株的基础上,将该菌总DNA用EcoRI不完全酶切后,分离5kb左右的片段,连接入pUC18质粒,转化E.coli BL21,构建基因组文库,得到3.6×103个重组子,远大于理论计算的1831个重组子,随机挑选重组子经EcoRI酶切鉴定重组率为100%,文库构建成功;将该菌裂解液与佐剂混合,免疫雄性新西兰大白兔,免疫程序结束后,抽血并分离血清,对用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后的文库进行免疫印迹筛选,最终得到8个阳性克隆子。本实验为该菌的DNA疫苗以及重要基因表达研究打下基础。 相似文献
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草鱼呼肠孤病毒衣壳蛋白VP7基因真核表达载体pCI-VP7的构建及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
将编码草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)主要衣壳蛋白VP70.9kb的基因片段连接至克隆载体pMD19-T中,筛选阳性克隆并测序,经检测为正确序列后,再将目的片段克隆入真核表达载体pCI,筛选得到阳性重组质粒pCI-VP7。然后构建pCI-VP-GFP重组表达质粒(即GFP基因与VP7的一段上游基因融合表达),用PCR及酶切方法鉴定克隆的正确性。并用脂质体法将其转染入真核细胞COS-1和CIK进行瞬时表达,荧光显微镜观察及RT-PCR特异性检测。结果表明,GFP基因与VP7的一段上游基因被成功转染到COS-1和CIK细胞,并得到了很好的表达。进而证明pCI-VP7可以成功的表达,为GCRV基因疫苗的研制提供了实验资料。 相似文献