斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的纯化及性质研究

采用硫酸铵盐析，DEAE Sephadex A－50凝胶层析等方法从嗜麦芽寡养单胞菌胞外产物中提纯了一种分子量为45.7 ku的单一多肽蛋白酶。该酶对小鼠和斑点叉尾鮰具有明显的致死作用，其LD50分别为4.33 μg•g-1体重和3.49 μg•g-1体重。酶的最适温度为20 ℃，热稳定性差，100 ℃作用15 min酶活完全丧失，最适pH为9.0，PMSF对酶活无影响，部分金属离子如Ca2+、Hg2+、Cu2+能使酶活性明显下降，而Co2+对酶有一定程度的激活作用，EDTA能完全抑制酶活性，表明该酶为一种金属蛋白酶。图1表4参29     

一株产低温碱性蛋白酶嗜冷海洋细菌YS-9412-130的分离和培养条件研究

自海水贝类中取样，经分离培养基和酪蛋白培养基复合培养，用检测蛋白酶产生水解圈和Folin-酚碱性蛋白酶活性测定相结合的方法从1000多份样品中初步筛到了产碱性蛋白酶活力高、性能优良的菌株YS－9412－130。对其初步研究结果表明，该菌只能利用有机氮源生长；在接近自然海水盐度、温度20℃、pH在7.0-9.0条件下，菌体生长和产酶较好。     

牡蛎酶解液的抗氧化活性

检测了牡蛎(Crassotera gigas)木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性。由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析牡蛎酶解液,得到具抗氧化活性组分的分子量分布。分子量为1191 D和826 D左右的木瓜蛋白酶酶解活性肽组分的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.184 mg/mL和0.673 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别为53.6%和66.5%;分子量分别为1074 D和735 D左右的中性蛋白酶酶解活性肽的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.166 mg/mL和0.830 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别57.6%和70.5%。HPLC分析结果表明,木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的活性肽组分分别由几种抗氧化肽组成。抗氧化活性最强的木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的肽组分在质量浓度为2.5 mg/mL时,活性分别可达83.6%和80.8%。用牡蛎原浆与各酶解液灌胃昆明小白鼠。研究结果表明,用木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解原液及经超滤纯化的酶解液对小白鼠实施灌胃,其肝脏组织的SOD活力都显著提高(P<0.05);灌胃经超滤纯化的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液,小白鼠肝脏组织GSH-PX活力、GSH含量显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。     

蟹源拟态弧菌外毒素酶活性的分析

采用琼脂平板扩散法和指示凝胶技术对蟹源拟态弧菌HX-4菌株外毒素的酶活性及稳定性等特性进行了系统研究。结果显示:该菌外毒素具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、溶血素、卵磷脂酶和几丁质酶活性,不具有血浆凝固酶、脂酶和DNase酶活性。外毒素具有相对的稳定性,除热外,其它环境因素改变对其酶活性影响不大。指示凝胶技术试验结果表明:外毒素含有3种蛋白成份,相对分子量分别为154 KD、143 KD和117 KD,同时具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、溶血素活性。     

太湖秀丽白虾不同生长阶段主要消化酶活性研究

研究了太湖秀丽白虾（Exopalaemon modestus）不同生长阶段的消化酶活性。结果表明，太湖秀丽白虾的生长可分为3个阶段，体质量小于0．1g时，蛋白酶活性维持在较高水平；体质量介于0．1～0．3g之间时，蛋白酶活性呈现不同程度的下降；体质量大于0．4g以后，蛋白酶活性进一步降低；其中脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶活性均很低。成虾肝胰腺、胃和肠3种不同消化器官的消化酶活性差异显著，蛋白酶活性依次为胃〉肝胰腺〉肠，淀粉酶活性则为胃〉肠、肝胰腺。     

养殖大黄鱼溃疡病的病原菌及其防治药物研究

从症状典型的网箱养殖患病大黄鱼体内分离到1株细菌824-1,经人工感染试验证实为是引起该病的病原菌。经鉴定,菌株824-1为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。利用杯碟法研究了其胞外产物的性质,结果表明:其胞外产物具有淀粉酶、明胶酶、酪蛋白酶、卵磷脂酶、脂酶和几丁质酶活性以及溶血活性,其中以淀粉酶、明胶酶和酪蛋白酶的活性最强,但没有脲酶活性。研究了20种化学药物和15种中草药对病原菌的抑菌作用,结果表明:复方新诺明、磺胺 TMP和庆大霉素等3种化学药物和石榴皮、地榆、五味子、大黄等4种中草药的抑菌能力最强,可作为防治该病的有效药物。     

大菱鲆消化系统的组织学和组织化学研究

为探讨大菱鲆的消化生理,用组织学和组织化学方法对其消化系统进行了研究。胃黏膜上皮由柱状细胞组成,胃腺上皮由Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞构成,幽门盲囊与肠黏膜上皮由柱状细胞和数量不等的黏液细胞组成。胃黏膜柱状细胞呈现酸性磷酸酶和一定的脂酶活性;胃腺Ⅰ型细胞分泌黏液,Ⅱ型细胞呈现蛋白酶活性。幽门盲囊与肠黏膜柱状细胞呈现蛋白酶、脂酶和非特异性酯酶活性,其游离端胞质和质膜还分别具有酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性。肝细胞呈现蛋白酶活性,另有贮存糖原和脂肪等功能。胰腺仅显示较弱的脂酶及非特异性酯酶活性。     

大菱鲆肠道蛋白酶的分离纯化及性质的初步研究

以大菱鲆肠道为材料,对大菱鲆消化生理中起重要作用的肠蛋白酶的分离纯化条件和理化性质进行了研究。经Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级分离,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析分离纯化,获得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的电泳纯制品,并对该酶的性质进行了研究。结果显示:纯酶的分子量约为58kD。纯酶最适反应pH为9.0,最适反应温度50℃;pH稳定范围6.0~11.0,30℃以下酶活性稳定;Mn2 可激活大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ,Cu2 、Zn2 、Ag 、Fe3 则对酶活性有抑制作用;巯基蛋白酶抑制剂显著抑制大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的活性,金属蛋白酶抑制剂对大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ无影响。50℃、pH9.0条件下以双倒数作图法得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ催化酪蛋白水解的Km值为2.92g.L-1。     

不同生长时期中国对虾蛋白酶,脂肪酶活性变化的研究

本文对中国对虾生长各阶段的蛋白酶和脂肪酶活性变化进行了分析，探讨了蛋白质和脂肪的消化利用。结果表明，从中国对虾生长与消化酶活性的关系可将其分为两个生长阶段。第一阶段，体长在２．５５－１０．１１ｃｍ间（饲养时间为６月８日至８月２７日），在这一时期随着个体增大蛋白酶，脂肪酶活性不断升高。９月份对虾消化酶活性趋于下降，构成了在养殖后期消化功能趋于减弱的第二阶段。进入繁殖期的对虾与个体大小相似的生长期对虾     

产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130的复合诱变原生质体选育

以黄海黄杆菌YS－9412－130突变株SW1－104为出发菌，在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体，对原生质体进行复合诱变，对大量再生突变株进行筛选和淡水驯化，最终获得了高产、稳定的碱性蛋白酶产生菌SW2－104，在自来水培养基中能够大量产酶，产酶活力为3910U／ml。从而解决了黄海黄杆菌YS－9412－130低温碱性蛋白酶大规模工业化生产设备和产业化区域的局限性。     

驼海燕内脏中蛋白酶的提取及其酶学性质的研究

以驼海燕为原料,用丙酮沉淀法制备蛋白酶粗酶,并对其酶学性质进行研究。试验结果表明,提取蛋白粗酶的最佳条件为:原酶液与丙酮的体积比为1∶1.6;蛋白酶反应的最适温度为45℃,最适pH值为8.1;pH为7～9时可保持较高的酶活力;蛋白酶的酶活力在20～50℃基本稳定。酶促反应结果表明,Na+、K+、Li+、Mg2+对蛋白酶活力具有促进作用,而Zn2+、Cu2+、Hg2+能抑制蛋白酶的活力,EDTA对蛋白酶活力的影响甚微。酶动力学方程表明,最大反应速度vmax=5.99U/mL,米氏常数Km=0.69g/mL。     

卵形鲳鲹消化酶活性的研究ⅢpH对幼鱼和成鱼消化酶活性的影响

研究了pH对卵形鲳鲹幼鱼和成鱼3种主要消化酶(蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶)活力的影响。实验用鱼暂养7 d后解剖取样,在设计的10个酶反应pH值(2.2,3.2,4.2,5.2,6.2,7.2,8.0,8.6,9.6,10.6)下测定消化酶活力。结果表明:卵形鲳鲹胃内pH为强酸性,幼鱼肠内为中性偏酸性,肝、幽门盲囊和成鱼肠内为中性偏弱碱性。胃蛋白酶的最适pH值幼鱼为2.2,成鱼为3.2;肝、幽门盲囊和肠的蛋白酶活性最适pH值幼鱼为7.2,成鱼为8.0。淀粉酶活性的最适pH值幼鱼为8.0,成鱼为8.6。脂肪酶活性的最适pH值均为弱酸性,幼鱼和成鱼均为6.2。卵形鲳鲹幼鱼和成鱼3种相同消化酶活性的变化趋势相似,并以胃蛋白酶、肠淀粉酶、肠脂肪酶的活力最高。     

卵形鲳鲹消化酶活性的研究Ⅱ盐度和昼夜变化对幼鱼消化酶活性的影响

研究了盐度对卵形鲳鲹幼鱼主要消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)的影响及其消化酶活性的昼夜变化。实验设计了6个盐度梯度组,分别为10、15、20、25、30、35。结果表明:(1)淀粉酶、脂肪酶活性在盐度25时最高,而蛋白酶活性在盐度30时最高。3种消化酶酶活性的平均值在盐度20~30时要明显高于盐度10~15时(P<0.05)。(2)对卵形鲳鲹幼鱼消化酶活性昼夜变化的测定表明,蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性的最高值分别在20∶00、8∶00和14∶00,最低值分别在2∶00、17∶00和11∶00。     

Purification and characterization of stomach protease from the turbot (Scophthalmus maximus L.)

Proteolytic activity in the different parts of the digestive tract of the turbot (Scophthalmus maximus L.) were studied in this work. One pure protease was isolated from turbot stomach and its behavior was studied. Results showed the optimum pH for proteases in the different parts of the digestive tract of the turbot were pH 2.0 for the stomach, pH 8.0 for the pylorus cecum, pH 8.0 for the foregut, pH 8.5 for the midgut, and pH 8.0 for the hindgut. The activity of proteases in the different parts of the digestive tract were in the sequence pylorus cecum protease > stomach protease > foregut protease > midgut protease > hindgut protease. The stomach protease was purified by ammonium sulfate precipitation and column chromatography on DEAE-Sepharose F.F. and Sephadex G-100. The purified enzyme gave a single band in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Its molecular weight was found to be approximately 42,000 Da. The enzyme is stable at pH 1.0–9.0 and at temperatures below 40°C. Its activity was maximum at pH 2.0 and 40°C. When reaction time was prolonged the optimum temperature of the enzyme tended to decline. The enzyme was activated by Mn²⁺ and Cu²⁺ and inactivated by Fe³⁺. It was fully inhibited by pepstatin and partially inhibited by PMSF, TPCK, PCMB, and NBS. These results imply the enzyme is a pepsin.     

盐度对点篮子鱼消化酶活性的影响

以自然海水组(盐度30～32)为对照,研究了20、10、5三种盐度对点篮子鱼(平均体重86.09 4-17.99g,平均全长13.90±1.53 cm)幽门盲囊、肠、胃和肝脏中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活力的影响.结果表明:第24天盐度20的点篮子鱼幽门盲囊蛋白酶活力显著低于对照组(P<0.05);第24天和第48天,在同...     

幼鲤肝胰脏、肠道消化酶活性比较研究

采用同日龄幼鲤在同一饲养条件下，连续测得38、76、114日龄时肝胰脏、肠道蛋白酶、脂肪酸和淀粉酶活性。结果表明：肝胰脏、肠道蛋白酶活性，肝胰脏淀粉酶活性随日龄增加而增加；38至76日龄时肠道脂肪酶、淀粉酶活性明显增加，76至114日龄变化不明显，而肝胰脏脂肪酶活性显著增加；38至76日龄时肠道蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性高于肝胰脏，114日龄时肝胰脏蛋白酶、脂肪酶活性高于肠道，淀粉酶活性与肠道接近。     

鲢、鳙蛋白酶、淀粉酶的研究

运用酶动力学方法研究了鲢、鳙的蛋白酶和淀粉酶的活性分布。鲢、鳙的蛋白酶活性在肝胰脏中最强,脾脏中也较强,而在胆汁中未测出。该酶活性在肠粘膜的第Ⅱ段最大,第Ⅰ段向第Ⅱ段递增,第Ⅱ段向肠后端递减,但第Ⅴ段的该酶活性比前段要高些。鲢的淀粉酶活性分布规律与上述情况相似,但鳙的淀粉酶活性在肠粘膜各段中由前向后呈递减趋势,并以第Ⅰ段为最大。在相同的器官组织中,鳙蛋白酶活性高于鲢,但差异不显著（Ｐ＞０．０５）,而淀粉酶活性则相反。这两种鱼的蛋白酶活性适宜ｐＨ为８．０～８．５,淀粉酶活性在ｐＨ７．５时最适。在鲢的肠内容物中发现有纤维素酶活性,但在肠粘膜中未检出该酶。     

卵形鲳鲹消化酶活性的研究Ⅴ大规格幼鱼消化酶活性在不同消化器官中的分布及盐度对酶活性的影响

研究了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)大规格幼鱼(全长10.53±1.41 cm,体质量15.02±2.46 g)蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性在不同消化器官中的分布,以及5、15、25、30、35五种盐度对肠、幽门盲囊、胃和肝脏中消化酶活性的影响.结果表明:在不同盐度下,蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性在各消化...     

In vitro assay of plant protease inhibitors from four different sources on digestive proteases of rohu, Labeo rohita (Hamilton), fingerlings

The in vitro inhibitory effect of protease inhibitors from four seed extracts (soybean, grasspea, black gram and horse gram) on digestive proteases of rohu was assessed by enzyme inhibition assay and substrate sodium dodecyl sulphate‐polyacrylamide gel electrophoresis. High proteolytic activity was detected in the intestinal extract of rohu (Labeo rohita) fingerlings at two different pH ranges (8–8.5 and 10–11). That protein digestion occurs mainly in the alkaline condition in this fish without a stomach is evident from very high trypsin activity (0.95±0.04 benzoyl‐dl ‐arginine‐p‐nitroanilide U mg protein⁻¹) in the intestine. In case of grass pea seed, more than 50% inhibition of alkaline protease activity was recorded when the ratio of inhibitor to enzyme was 9.41 μg U⁻¹. More than 40% inhibition of protease activity was recorded in case of horse gram seed when the ratio of inhibitor to enzyme was 5.51 μg U⁻¹. Black gram at 11.0 μg U⁻¹ and soybean seed proteins at 62.75 μg U⁻¹ resulted in 50% and more than 30% inhibition of digestive protease activity in rohu fingerlings respectively. A plot of the inhibition values obtained by changing the relative concentrations of enzyme/inhibitor resulted in different dose–response curves for different protein sources. The use of substrate gel electrophoresis allowed the visualization of the aforementioned differences in inhibition. Each seed extract produced a characteristic profile of protease inhibition. It is concluded that protease inhibitors present in plant protein sources adversely affect the digestive proteases in fish and hence there is a need to eliminate/reduce the amount of such inhibitors through proper processing before incorporation into aquafeeds.