柔嫩艾美耳球虫SO7基因重组乳酸菌的构建及保护性效果

为了检测转鸡柔嫩艾美耳球虫保护性抗原SO7基因及白细胞介素2(IL-2)的功能乳酸菌对试验感染球虫攻击的保护性,用重组乳酸菌饲喂1日龄雏鸡,连喂7 d后,以5×10~4个/只剂量接种球虫卵囊,通过观察雏鸡的组织病理学变化来评价转球虫基因工程乳酸菌的效果。结果显示:饲喂乳酸菌组雏鸡受球虫攻击的组织病理学变化最轻微。从而证明含保护性抗原SO7基因和IL-2片段的功能乳酸菌对试验感染球虫攻击具有一定的保护性。     

重组NDV HN基因乳酸菌穿梭表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

为构建新城疫病毒乳酸菌穿梭表达载体,采用RT-PCR方法从新城疫病毒中扩增了HN基因,将其克隆到pMD18-T Simple Vector中.经测序鉴定正确后,定向克隆至乳酸菌表达载体pW425et中,并转化入表达宿主菌BL21 (DE3),利用IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况.结果表明:NDVHN基因与表达载体pW425et正确重组,且该重组菌传50代次以上,重组质粒依然稳定.SDS-PAGE显示表达出约63 kD的条带,与已知表达的HN蛋白大小相符.Western blotting进一步证实该蛋白能被NDV阳性抗体所识别,具有反应原性.表明构建了重组NDVHN基因乳酸菌穿梭表达载体.     

我国畜禽基因工程疫苗技术体系建设进展迅速

在国家“863”计划支持下,以提高基因工程疫苗的免疫能力和安全性为目标,在畜禽基因工程疫苗和免疫佐剂技术体系建设方面取得了重要进展。在克隆抗原或疫苗研制用相关基因的基础上,构建了高效表达的稳定载体,建立并完善了基因工程疫苗安全性评价体系和规模化生产工艺。成功研制出鸡传染性法氏囊病(IBD)二价基因工程疫苗、4种DNA疫苗(如猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗)、轮状病毒基因工程乳酸菌疫苗、鸡传染性鼻炎疫苗;建立并完善了猪伪狂犬病病毒闽A株SA215三基因缺失疫苗生产工艺,完成猪伪狂犬病基因缺失活疫苗SA215新兽药证书的全套研究…     

这些新型兽用疫苗,你认识吗?

1.基因工程疫苗 1.1重组活载体疫苗 病毒活载体疫苗的研究较多,如用鸡痘病毒作为载体,表达成功的保护性抗原基因就有新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、马立克氏病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒、狂犬病病毒、传染性支气管炎病毒、艾美尔球虫等.2005年12月24日,农业部在北京宣布,我国已成功研制出禽流感--新城疫重组二联活疫苗,并正式批准生产.     

基因工程牛生长激素高密度发酵表达的研究

通过对重组牛生长激素基因工程大肠杆菌摇瓶和5、30 L发酵罐发酵表达的研究,建立了基因工程牛生长激素的高密度发酵表达工艺,菌体密度最高可达到OD550=120,rbIL-2的表达量占菌体总蛋白的20%以上.     

乳酸菌作为宿主系统的可行性研究

通过生理、生化特性,抗生素敏感性,转化实验及质粒的提取和鉴定等实验,对嗜酸乳杆菌ATCC4356和乳酸乳球菌NZ9000作为宿主系统的可行性进行研究。结果表明,乳酸乳球菌NZ9000和嗜酸乳杆菌ATCC4356均可作为宿主系统,表达pLP352质粒(氯霉素抗性质粒,可在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭)。研究结果,在基因工程上应用抗病基因在乳酸菌中的表达奠定了基础,证实了乳酸菌作为生物安全级别的宿主系统的可行性。     

噬菌体裂解酶Cp51在重组乳酸菌中的表达及对A型产气荚膜梭菌的抗菌活性

【目的】构建A型产气荚膜梭菌Clostridium perfringens裂解酶重组表达乳酸菌Lactococcus lactis,并检测重组菌及其表达产物的抗菌效果。【方法】全基因合成噬菌体裂解酶Cp51基因,构建PNZ8148-Cp51原核表达重组载体,电转化至乳酸菌NZ9000,经乳链菌肽诱导表达可溶性Cp51蛋白;用比浊法检测表达蛋白对A型产气荚膜梭菌的抗菌活性;利用细菌液混合培养检测重组菌对A型产气荚膜梭菌增殖的抑制作用。【结果】噬菌体裂解酶Cp51在乳酸菌中成功表达,为1 268 bp;质量浓度1μg·mL-1以上的重组蛋白对A型产气荚膜梭菌具有高效抗菌活性;重组乳酸菌对A型产气荚膜梭菌增殖有一定的抑制效果,混合培养后使产气荚膜梭菌活菌数从9×10~9 CFU·mL~(-1)下降到约9×10~8 CFU·mL~(-1)。【结论】A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶重组乳酸菌构建成功,为后续优化表达和临床应用研究奠定了基础。     

猪乙型脑炎病毒广西分离株FC792E基因主要抗原域的原核表达及抗原性鉴定

对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础.结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质粒 pET32a-Ea,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表明,JEV FC792株Ea蛋白在Roetta(DE3)菌中成功进行融合表达,表达出约58 KDa的融合蛋白;经抗原性鉴定表明,表达的融合蛋白Ea能与猪JEV阳性血清抗体发生特异性反应,融合蛋白Ea具有良好的JEV抗原性.     

鸡痘病毒载体研究进展

本文就鸡痘病毒作为基因工程重组疫苗的重要载体研究的进展作以综述，主要包括鸡痘病毒表达载体的构建，外源基因在重组鸡痘病毒中的表达及免疫效果，并对鸡痘病毒载体的研究及开发应用前景加以展望。     

嗜酸乳杆菌S-层蛋白表面展示系统的构建及酶切位点分析

[目的]克隆和表达嗜酸乳杆菌S-层蛋白基因,用其构建能承载外源抗原表位的乳酸菌细胞表面展示系统。[方法]以染色体DNA为模板克隆S-层蛋白基因SlpA,通过酶切、连接将其插入大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pW425et,构建表面展示系统pW425et-S,并对酶切位点进行分析。[结果]将pW425et-S转化入thyA基因缺陷型E.coli X13感受态细胞,SDS-PAGE、Western-blotting、全细胞ELISA检测表明,在重组菌表面表达出S-层蛋白,构建出表面展示系统,确定BstEⅡ作为融合外源保护性抗原基因的酶切位点。[结论]克隆出嗜酸乳杆菌S-层蛋白基因,成功构建表面展示系统pW425et-S,为开发乳酸菌活载体口服活菌疫苗提供了可行性操作平台。     

凡纳滨对虾良种培育研究进展

凡纳滨对虾是世界养殖范围最广、产量最高的三大对虾之一,其良种培育对发展对虾养殖产业具有重要现实意义。文章从遗传育种、分子标记辅助育种、细胞工程育种、基因工程育种、种间杂交等方面,总结分析了凡纳滨对虾良种培育的理论和实践,并针对当前凡纳滨对虾良种培育存在基础研究落后于应用研究、多性状复合育种尚未取得关键性突破、育种工艺不足、种质资源匮乏、数量遗传学应用不够等问题,提出在改良和培育遗传性状稳定的优良品种时,灵活运用多学科知识和多种现代科学技术,即高新技术与常规选择育种相互配合的综合育种技术,是今后凡纳滨对虾新品种培育技术发展的必然趋势。     

凡纳滨对虾良种培育研究进展

凡纳滨对虾是世界养殖范围最广、产量最高的三大对虾之一,其良种培育对发展对虾养殖产业具有重要现实意义。文章从遗传育种、分子标记辅助育种、细胞工程育种、基因工程育种、种间杂交等方面,总结分析了凡纳滨对虾良种培育的理论和实践,并针对当前凡纳滨对虾良种培育存在基础研究落后于应用研究、多性状复合育种尚未取得关键性突破、育种工艺不足、种质资源匮乏、数量遗传学应用不够等问题,提出在改良和培育遗传性状稳定的优良品种时,灵活运用多学科知识和多种现代科学技术,即高新技术与常规选择育种相互配合的综合育种技术,是今后凡纳滨对虾新品种培育技术发展的必然趋势。     

利用基因工程改良柑橘砧木种质的研究综述

概述了当前国内外基因工程技术在柑橘砧木种质改良工作中的研究现状与进展,基因工程在柑橘育种中的应用主要有农杆菌介导法、附体腋芽转化—离体扩繁鉴定法、DNA直接导入法等,并在培育新型抗性柑橘砧木品种上取得了一定的成果,建立了有效的基因转化体系,也获得了一批转基因植株。目前,随着生物技术的不断发展及基因工程技术的日趋成熟,基因工程在柑橘砧木资源多样性研究与种质改良方面仍将是今后的主攻方向。     

Despite doubts RAC moving to widen role

The Recombinant DNA Advisory Committee (RAC) of the National Institutes of Health has encountered setbacks in its attempt to increase its regulatory authority over genetic engineering ventures. Competing claims by the Environmental Protection Agency have been supported in a congressional report authored by Rep. Albert Gore, Jr. (D-Tenn.) which is critical of RAC's actions in approving experimental release of genetically-modified organisms into the environment. During a 6 Feb 1984 public meeting, RAC faced a barrage of criticism led by activist Jeremy Rifkin, and learned of a U.S. Court of Appeals decision blocking its consideration of a proposed field test with engineered bacteria.     

乳酸菌胞外多糖生物合成与遗传调控研究进展

乳酸菌是被公认的安全食用菌株,其合成的胞外多糖由于具有良好的物理学特性和生物学活性,受到人们的广泛关注。了解多糖合成途径和糖基代谢过程对于改变多糖结构与产量具有重要意义。就乳酸菌胞外多糖生物合成途径、遗传调控以及在控制多糖产量与结构方面的研究现状进行简述。     

葡萄生物技术研究的进展

该文从葡萄快速繁殖、胚培养与花药培养、细胞培养、原生质体培养与基因转化及种质离体保存等几个方面概述了近几年葡萄生物技术研究的进展．生物技术在葡萄良种快速繁殖和新品种培育上取得了很大成绩，并产生了巨大的经济效益．但细胞培养、原生质体培养与基因转化在葡萄育种上的巨大潜力有待进一步研究开发     

生物技术在剑麻研究上的应用进展

剑麻作为我国极具特色的热带经济作物,具有广阔发展前景和巨大的出口潜力。而当今世界发展最快、最活跃的高新技术—细胞工程、转基因技术和分子标记技术等生物技术在剑麻研究及生产上的应用,给剑麻产业的发展带来了新的飞跃。     

根瘤菌竞争结瘤的研究进展

近年来已通过自然选育或基因工程技术获得了不少具有高效固氮能力的菌株。并在人工控制的条件下证明它们能够使豆科作物显著增产。但由于人工接种剂与土著根瘤菌的竞争结瘤问题一直未得到很好解决，阻碍了这些高效固氮菌株田间应用效果的发挥。尽管人们对这一问题已进行了大量的研究。但也根瘤菌结瘤基因的研究相比。我们对根瘤菌的竞争结瘤机制的认识仍非常有限。已有的研究结果表明，影响根瘤菌竞争结瘤的因素主要包括根瘤菌与宿主植物的遗传基因和生态学因素两个方面。     

植物抗病性分子机制研究进展

近几年来,植物抗病分子机制研究取得显著进展。文章综述了与植物抗病性相关基因的克隆及其结构分析,植物与病原菌的作用机制及植物抗病基因工程的前景与展望。     

高产纤维素酶绿色木霉基因工程菌的构建

[目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CBHⅠ重组质粒与瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅱ（CBHⅡ）PcbhⅡ启动子片段连接,将潮霉素磷酸转移酶（hyg）基因片段插入PcbhⅡ启动子下游,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组表达质粒pCAMBIA1302-CBHⅡ。[结果]构建的重组表达质粒电转化后经SDS-PAGE电泳检测,绿色木霉纤维素酶CBHII基因在原宿主菌中成功过量表达,证实CBHⅡ基因在PcbhⅡ启动子控制下进行高效表达。[结论]为高产纤维素酶系的工业化菌株构建奠定基础。