介绍一种简便有效的猪卵丘细胞体外培养方法

卵丘细胞是与生殖细胞有关的体细胞，是一种较好的克隆供核细胞。实验在猪卵巢卵母细胞的体外培养过程中发现了一种无菌操作要求不高、简便有效的卵丘细胞的体外培养方法。     

上海地区猪戊型肝炎病毒部分序列的克隆与分析

对上海地区几个猪场的戊型肝炎感染情况进行了调查,共采集粪便样品36份,通过RT-nPCR的方法应用通用引物对病毒基因组的ORF2部分片断进行扩增,36份样品中有5份RT-nPCR阳性,HEV RNA阳性率为13.9%,去除相同的序列,得到2株HEV的ORF2部分序列。序列分析表明,这两段序列与基因I、II、III、IV的遗传距离分别为0.183、0.207、0.230、0.102和0.177、0.226、0.240、0.108。系统进化分析显示,这两株病毒都属于基因Ⅳ型。     

戊型肝炎病毒研究进展

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是一种引起全球性健康问题的RNA病毒,宿主范围广泛,并且具有跨种间屏障的特性,是重要的人兽共患病病原体之一,给人类和动物的健康造成较大危害.世界卫生组织制定了2030年消除肝炎的目标,其中HEV是肝炎病毒中不容忽视的病毒之一.本文综述了国内外HEV的研究进展,以...     

新发猪流行性腹泻病毒ORF3基因的遗传进化分析

从浙江地区分离的2株代表性样品与全国范围内流行的参考毒株进行比对和遗传进化分析,结果分为4个组,代表性样品与大部分国内的毒株落入G4-2组,与国内早期CH-S毒株核苷酸(氨基酸)同源性为98.4%~98.5%(99.1%~99.6%);以华南地区为主的2011-2012年分离的毒株自成一组,与中国其他地区的毒株的同源性为95.0%~97.2%,与其余3组比较有9个核苷酸的变异。遗传进化分析表明所分离毒株与大部分中国的流行毒株属于一个基因型;以2011-2012年中国华南地区为主的毒株成为PEDV的一个新的基因型;提示2011-2012年中国流行着2种PEDV的基因型。     

重组猪α干扰素的亲和层析

真核系统表达的猪α干扰素(PoIFN-α)发酵液,经离心、收集上清液、透析过滤处理,通过FPLC-HisTrap HP Kit亲和层析系统分离纯化,最后以SDS-PAGE银染法检验。结果表明,在不同pH和NaCl浓度情况下,发酵液经亲和层析系统分离纯化后均可以得到较为单一的目的蛋白组分,而在pH8.2,NaCl0mmol/L的情况下得到的目的蛋白更纯,且非特异性吸附也较少。     

影响基因工程猪生长激素复性效率的因素

对影响基因工程猪生长激素(r—pGH)体外复性效率的因素进行了研究，结果表明：复性液组成、变性剂种类、复性方法的选择、变复性pH对r—pGH体外复性效率有较大影响，β-巯基乙醇、谷光苷肽等添加剂对r-pGH的体外复性影响不显著。提取包含体用6mol／L盐酸胍溶解，空气氧化80h后转入复性缓冲液中开始重组蛋白复性，采用透析复性法——复性缓冲液Ⅲ(0．25％NaHCO3，0．2％α-乳糖，0．2％甘露醇)，pH90，透析5～6次，可较好地恢复r—pGH生物活性。复性后蛋白浓缩液进行去垂体大鼠试验，大鼠增重明显，表明得到了正确折叠的较高生物活性的r—pGH。     

应用灰色系统GM(1,1)模型预测猪场中猪戊型肝炎的流行趋势

为研究猪戊型肝炎的流行趋势及其预测,应用灰色系统理论对上海市2005-2010年的猪戊型肝炎资料进行分析,建立了灰色系统GM(1,1)模型,并进行了模型评价.结果表明:GM(1,1)模型精度检验结果为优,能精确地模拟猪戊型肝炎的流行趋势.应用该模型预测上海市2011年、2012年猪戊型肝炎的感染率分别为19.25％和18.34％.     

基因工程牛生长激素高密度发酵表达的研究

通过对重组牛生长激素基因工程大肠杆菌摇瓶和5、30 L发酵罐发酵表达的研究,建立了基因工程牛生长激素的高密度发酵表达工艺,菌体密度最高可达到OD550=120,rbIL-2的表达量占菌体总蛋白的20%以上.     

毕赤酵母(Pichia pastoris )分泌表达牛白细胞介素2

利用舍有强启动子PAOX1和α-因子信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体pPICZαA，构建出舍牛白细胞介素2(BoIL-2)基因的重组质粒BoIL2-pPICZαA。线性化的重组表达栽体转化到巴斯德毕赤酵母X-33及KM71H中，筛选Zeoein高抗性酵母菌株，甲醇诱导目的蛋白表达。经SDS-PAGE和Western blot检测表明，BoIL-2以融合蛋白形式在胞内表达，但没能分泌到胞外。通过BoIL-2在巴斯德毕赤酵母中的表达，重点讨论了信号肽、基因的偏爱性等对外源基因分泌表达的影响。     

小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白(N)重组表达条件的优化

为获得更高含量的可溶性N蛋白,对构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)(pET-32a-N)的表达条件(如诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行了优化.结果表明:N蛋白最佳诱导表达条件为18℃诱导17h、IPTG浓度0.2 mmol/L;优化后可溶性N蛋白的表达量为22.1 mg/L,比优化前37℃、IPTG浓度1.0 mmol/L条件下诱导4h提高了58.5％.