Sevage法纯化紫菜粗多糖的工艺研究

本文以紫菜多糖样品浓度、Sevage试剂添加量与供试液体积比、Sevage试剂中氯仿与正丁醇体积比为因素,采用正交实验设计,优化紫菜粗多糖的纯化工艺,以寻求最佳的纯化条件和生产工艺,为最大限度的节省原料资源和能源,利用紫菜的自然资源,为大规模工业生产紫菜多糖提供可靠依据。试验结果表明:使纯化后紫菜多糖中总糖含量最高的最佳工艺条件是A1B3C1,紫菜多糖浓度4mg/ml,Sevage试剂添加量与紫菜多糖样品液体积比1∶6,Sevage试剂中氯仿与正丁醇体积比3∶1;影响紫菜多糖得率从主到次的因素排序为A,C,B,即紫菜多糖浓度,Sevage试剂中氯仿与正丁醇体积比,Sevage试剂添加量与紫菜多糖样品液体积比。     

绿豆多糖的提取工艺研究

以多糖提取率为指标,对多糖提取和除蛋白工艺参数进行优化选择,首先进行单因素试验,后在单因素试验的基础上采用正交实验进行分析,最后确定绿豆多糖的最佳提取工艺为:浸提温度为95℃,料液比为1∶15,浸提时间为4.5h,而后以3%(w/v)三氯乙酸溶液除蛋白,80%乙醇最终浓度沉淀多糖,透析后冷冻干燥,得到灰白色粗多糖粉末,粗多糖得率为15.44%,后经蒽酮硫酸法测定,多糖得率为5.87%,粗多糖中绿豆多糖含量为38%。     

西藏雪莲多糖初步分离和清除自由基活性研究

为合理利用西藏雪莲提供一定依据,对西藏雪莲多糖进行提取分离纯化。西藏雪莲经热水浸提,乙醇沉淀得粗多糖。粗多糖凯氏定氮法测得蛋白质含量为4.38%,苯酚-硫酸法测定多糖含量为25.8%,硫酸-咔唑法测半乳糖醛酸含量为38.18%。粗多糖经Sevage法和酶法联合脱蛋白,得初步纯化的多糖。纸层析和气相色谱分析表明西藏雪莲多糖由7种单糖组成:木糖,阿拉伯糖,鼠李糖,半乳糖,葡萄糖,半乳糖醛酸,甘露糖,物质的量比为:1.0∶2.8∶2.6∶2.6∶2.0∶7.6∶1.6。西藏雪莲多糖对阴离子自由基和羟自由基具有明显的清除效果,且初步纯化后多糖的清除效果比粗多糖好。西藏雪莲多糖对脂质自由基的清除效果不明显。     

长裙竹荪菌丝体多糖的提取条件及抑菌性研究

为探讨长裙竹荪液态发酵菌丝体多糖的最佳提取条件、纯化方法及抑菌性,通过正交试验对多糖提取的温度、浸提次数、液料比、提取时间以及Sevage法脱除蛋白条件进行研究.结果表明,其多糖提取的最适条件为提取温度60℃,浸提时间2 h,液料比30∶1,浸提次数2次;Sevage法脱除蛋白条件为V氯仿∶V正丁醇=1∶0.2,V样品(滤液)∶VSevage试剂=1∶0.25,脱除时间为10 min.该工艺提取条件下多糖得率为1.34%.试验还证明,粗多糖有抑菌作用,而纯多糖无明显的抑菌作用.     

红稗多糖的分离纯化工艺

为研究红稗粗多糖不同的脱蛋白工艺,并确定DEAE-52纤维素交换层析柱纯化分离红稗多糖的最优条件。用Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的红稗多糖并采用柱前衍生化高效液相色谱法对纯化后的红稗精多糖的单糖组成种类进行测定。结果表明:红稗粗多糖的最佳上样浓度为5 mg/mL,洗脱速度0.5mL/min,上样体积25mL;采用Sevage法除蛋白3次,得到的蛋白清除率以及多糖保存率均较高,通过DEAE-52纤维素的柱层析分离纯化后可得到大组份多糖;再由Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的大组份红稗中性多糖;再利用柱前衍生化高效液相色谱法(HCLP)测定分离纯化后的红稗多糖主要由L-鼠李糖(rhamnose,Rham)、D-葡萄糖醛酸(glucuronic acid,Glu)和葡萄糖(glucose,Glc)3种单糖组成。     

油茶籽饼粕多糖的提取工艺优化及结构鉴定

[目的]以油茶籽饼粕为原料,优化油茶籽饼粕多糖提取工艺,并对纯化后的多糖进行结构鉴定。[方法]根据单因素试验结果,以超声时间10、15、20 min;料液比1∶15、1∶20、1∶25;浸提温度50、60、70℃;浸提时间60、90、120 min为影响因素,多糖得率为指标,通过正交试验设计优化提取工艺。粗多糖经脱色,脱蛋白处理后,再经过DEAE-52纤维素阴离子交换树脂纯化,并对纯化多糖组分进行紫外光谱和高效液相色谱分析。[结果]超声时间10 min,料液比1∶20,浸提温度60℃,浸提时间120 min为最佳工艺条件,此条件下油茶籽饼粕多糖的平均得率16.76%。粗多糖经脱色、脱蛋白、纤维素阴离子交换树脂柱层析得到纯化组分CCP。紫外光谱表明CCP为较纯的均一多糖组分,高效液相色谱表明CCP的单糖组成为甘露糖和葡萄糖,其物质的量比为:1.91∶1.00。同时还含有少量的鼠李糖。[结论]该工艺优化合理,多糖的结构得到了初步的确证。研究为油茶籽饼粕多糖的后续理化活性分析、结构表征提供了理论依据。     

太子参粗多糖的提取及其除蛋白方法研究

太子参多糖是太子参的有效成分之一。对太子参中粗多糖的热水浴加热提取工艺进行研究,对料液比、提取温度、提取时间、提取次数分别进行单因素试验和L9(34)正交试验,结果表明最佳工艺料液比1∶20,温度100℃,回流提取90min,提取3次。用Sevage法、三氯乙酸法、三氯乙酸-正丁醇法3种方法对太子参粗多糖去除蛋白处理效果进行比较,结果显示三氯乙酸-正丁醇法的蛋白质去除效果较好,其多糖纯度为81.2%,蛋白含量为9.93%,蛋白去除率为60.14%。     

刺梨果多糖提取过程中脱蛋白和脱色方法研究

[目的]筛选出梨果粗多糖水提醇沉过程中最佳的蛋白质和色素的脱除方法。[方法]以蛋白质脱除率、多糖保留率以及数据加权平均法构成的综合评分为评价指标,选用三氯乙酸法、三氯乙酸-Sevage法、三氯乙酸-正丁醇法、Sevage法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶-Sevage法、木瓜蛋白酶-三氯乙酸法、木瓜蛋白酶-三氯乙酸-正丁醇法和盐酸法9种脱蛋白方法对刺梨果粗多糖水提物的脱蛋白效果进行对比;同时在单因素试验的基础上,通过正交试验优化三氯乙酸-正丁醇法对刺梨果粗多糖水提物的脱蛋白工艺条件。并以脱色率和多糖保留率为评价指标,比较过氧化氢溶液与活性炭粉末对刺梨果多糖水提物的脱色效果。[结果]三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白效果最佳,三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白的最佳工艺条件为样液与试剂体积比为1∶2、三氯乙酸与正丁醇体积比为1∶10、振荡时间为60 min,此时脱蛋白率为78.64%,多糖保留率为86.59%。活性炭粉末对刺梨果粗多糖的脱色素和多糖保留率均优于过氧化氢溶液。[结论]该试验优选出的方法具有实际可操作性,可有效脱除刺梨果粗多糖中的蛋白质和色素,最终确定三氯乙酸-正丁醇法和活性炭粉末作为刺梨果多糖初步纯...     

响应面优化蛹虫草多糖脱蛋白工艺研究

以人工培养的蛹虫草（Cordyceps militaris…L.）为原料,以多糖损失率和蛋白去除率为指标,采用木瓜 蛋白酶对蛹虫草粗多糖进行脱蛋白处理,通过单因素与响应面分析法探索蛹虫草多糖除蛋白的优化工艺条件。结 果表明当酶液与样液的体积比为1.72∶1、酶解温度为64℃、pH…6.23、酶解时间为3…h时,蛋白质脱除率为68.9%, 多糖损失率为10.13%,结合一次Sevage法后,蛋白脱除率与多糖损失率分别为83.37%、19.43%。     

牡丹多糖的提取及其对自由基和亚硝酸根离子的清除作用

为探讨牡丹多糖抗氧化及其清除亚硝酸根离子的能力,对牡丹根进行脱脂、去蛋白等操作,建立了牡丹多糖的提取、纯化工艺,同时测定牡丹根中主要物质组成;通过检测不同质量浓度多糖溶液对DPPH自由基、O_2·和NO_2的清除率,评价牡丹多糖清除自由基和亚硝酸根离子的活性。结果表明,牡丹根的物质组成大致为:粗脂肪含量为6%,蛋白质含量为12%,多糖含量较为丰富,约为29%。确定了制备牡丹多糖的去蛋白最佳方案为:Sevage试剂中氯仿与正丁醇体积比为3∶1,多糖提取液与Sevage试剂添加量体积比为4∶1。牡丹多糖对2种自由基和NO_2均具有不同程度的清除能力,随着多糖质量浓度的逐渐增大,清除率变化趋势表现为先急剧增大,再缓慢升高,最后趋于稳定。对DPPH自由基、O_2·和NO_2达到较好清除效果的多糖质量浓度分别为2.5、2.5、1.0 g/L。牡丹多糖是一种良好的天然抗氧化剂。     

超声波法提取猴头下脚料多糖工艺研究

[目的]综合利用猴头下脚料和残次菇,筛选出超声波法提取多糖的最佳工艺。[方法]通过粉碎、超声提取、浓缩、Sevag法除蛋白、醇沉纯化等得到多糖,采用硫酸-蒽酮法测定多糖含量。在设计单因素试验优化多糖提取工艺的基础上,采用正交试验确定超声波法提取猴头下脚料多糖的最佳工艺。[结果]pH值在5.0～6.5范围内,经正交试验所得超声波法提取猴头下脚料中多糖的最佳工艺为：料液比（体积比）为1∶70,超声功率为最大功率的80%,提取时间是45min,提取温度为60℃,此时多糖提取率可达9.56%。[结论]该工艺条件综合利用下脚料和残次菇,多糖得率较高,有一定的开发利用价值。     

山药多糖提取工艺的优化及抗氧化活性的测定

[目的]优化山药多糖的提取工艺,并测定其抗氧化活性。[方法]在单因素试验的基础上,用正交试验优化山药多糖的提取工艺,并对不同蛋白质结合程度的山药多糖羟自由基清除率进行测定。[结果]山药多糖提取的最佳工艺参数为：提取温度为60℃,提取时间为3.0 h,料液比为1∶8,pH值为8,在最佳工艺条件下,山药多糖的平均提取率为15.1%;经蛋白酶水解脱蛋白后的山药多糖抗氧化活性最高,其次为Sevage法脱蛋白处理后的山药多糖,而未经处理的山药多糖液抗氧化活性最低。[结论]该研究优化了山药多糖的提取工艺,为山药多糖的开发提供了技术支持。     

小球藻多糖的分离纯化和组成分析

采用冻结-融化方法,用冷水提取海水小球藻Chlorellasp.多糖,多糖经除蛋白、乙醇分级沉淀、柱层析等一系列步骤处理后,得到组分均一的小球藻多糖(简称CPSB-1)。将CPSB-1完全酸水解,用高效阴离子液相色谱对其溶液进行分析,结果表明:组成多糖CPSB-1的单糖有D-岩藻糖、D-鼠李糖、D-2-氨基葡萄糖、D-半乳糖、D-葡萄糖和几种未知的单糖;各已知糖基的摩尔比为D-岩藻糖∶D-鼠李糖∶D-2-氨基葡萄糖∶D-半乳糖∶D-葡萄糖=1.3∶1.0∶1.4∶1.2∶3.1。     

猪苓发酵菌丝胞内多糖提取工艺研究

【目的】优化猪苓发酵菌丝胞内多糖的提取工艺,以提高猪苓胞内多糖浸提的得率。【方法】通过单因素试验、正交试验和对比试验确定猪苓发酵菌丝胞内多糖的浸提方法、辅助浸提方法和除蛋白方法。【结果】与水浸提相比,弱碱性溶剂浸提猪苓菌丝胞内多糖的效果更好,具体工艺参数为:按料液比1∶40添加40倍体积pH=11的NaOH,90℃浸提4次,每次60 min;酶解辅助法和超声波辅助法可有效提高猪苓发酵菌丝胞内多糖的浸提得率,其中酶解辅助浸提的效果更好,其最佳工艺参数为:复合酶配比为m(纤维素酶)∶m(果胶酶)=1∶1,复合酶用量为10 mg/g,酶解80 min;蛋白酶和Sevag配合的除蛋白方法,是去除猪苓胞内蛋白的最佳方法。【结论】猪苓发酵菌丝胞内多糖的最适提取工艺流程为:猪苓菌丝干粉-添加10 mg/g复合酶〔m(纤维素酶)∶m(果胶酶)=1∶1〕和40倍体积蒸馏水?50℃酶解80 min-NaOH溶液调pH=11,90℃浸提4次,每次60 min-浸提液合并、浓缩-HCl溶液调pH=6.5-蛋白酶酶解1 h-85℃酶灭活-Sevag除蛋白至无蛋白检出-浓缩-醇沉-干燥。     

肉苁蓉多糖脱蛋白工艺的优化

优选肉苁蓉多糖的脱蛋白工艺,为肉苁蓉多糖纯化提供试验依据。以脱蛋白率为指标,比较Sevag法、酶法及酶-Sevag联合法对肉苁蓉粗多糖的脱蛋白效果,采用正交试验优选最佳工艺。结果表明,Sevag法优于酶法和酶-Sevag联合法,Sevag法脱蛋白的最佳工艺为:三氯甲烷与正丁醇的体积配合比4∶1,料液体积比1∶3,搅拌40 min,脱蛋白4次。在该工艺下平均脱蛋白率为87.11%,RSD为1.34%;平均多糖保留率为83.05%,RSD为1.54%。试验证明该工艺稳定可靠,适用于肉苁蓉多糖的纯化。     

榴莲壳多糖微波提取及脱蛋白方法

[目的]优化榴莲壳多糖的微波提取及脱蛋白最佳工艺。[方法]采用L9(34)正交试验,以多糖含量为评价指标,利用苯酚-硫酸法测定多糖的含量,确定多糖的提取工艺;以脱蛋白率与多糖损失率为指标,选择最佳脱蛋白方法。[结果]最佳提取工艺为料液比1∶30g/ml,微波功率450 W,提取时间6 min,提取次数为1次;三氯乙酸法(TCA)为最佳脱蛋白方法。[结论]优化后的工艺条件稳定可行,可为榴莲壳多糖工业化生产提供理论依据。     

除蛋白方式对湛江等鞭金藻多糖的组成、结构特征和体外抗肿瘤活性的影响

为探索适宜的微藻多糖除蛋白方式,以湛江等鞭金藻Isochrysis zhanjianggensis为试验材料,通过水提醇沉法得到粗多糖(F),再分别采用Sevag法和三氯乙酸(TCA)法去除粗多糖蛋白得到样品F_S和F_T,然后对F、F_S和F_T进行总糖、硫酸根含量和单糖组成检测,并通过傅里叶变换红外光谱(FT-IR)和凝胶排阻层析(Sephacryl S-100)对其成分加以分析,另考察了3种组分体外对6株肿瘤细胞(MCF-7、HeLa、SW480、HT29、HepG2和A549)的抑制作用。结果表明:湛江等鞭金藻中主要的单糖组成包括甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖和岩藻糖;经不同除蛋白方式处理后所得样品F_S和F_T的单糖组成比例发生变化;粗提物F中高相对分子质量组分(80 000～90 000)在Sevag法处理后比例下降,但在TCA法处理后得以较好保留;而TCA法处理由于水解和透析的作用使得低相对分子质量组分比例下降;体外抗肿瘤活性试验中3种多糖样品同浓度下对肿瘤细胞的抑制作用相比较,TCA法所得样品F_T活性最强,粗提物F次之,Sevag法所得样品F_S最弱。研究表明,不同除蛋白方式所得的多糖在组成和活性上有所差异,在多糖商品化开发探索中应考虑以活性为导向进行工艺选择和优化。     

金樱根多糖的超声提取研究

采用超声辅助提取金樱根多糖,通过水提醇沉法,得到粗多糖,再利用Sevag法脱蛋白,获得精制多糖。用苯酚-硫酸法测定多糖含量,以多糖含量为指标,评价提取条件。通过设计L_9(3~4)正交试验,可得最佳提取条件:提取温度70℃、料液比为1:50、提取时间为60min、提取次数为4次。     

辣木叶粗多糖的制备·单糖组成及抗氧化活性研究

[目的]制备辣木叶粗多糖并研究其单糖组成和抗氧化活性.[方法]以华南地区辣木叶为原料,水提醇沉法、Sevage法、过氧化氢(H2O2)法提取辣木叶粗多糖,水解衍生化分析单糖组成,并通过DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、还原力等指标评价辣木叶粗多糖体外抗氧化活性.[结果]该试验所制备的辣木叶粗多糖提取率为7.16％,测得纯度为84.33％.辣木叶粗多糖的单糖组成有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖,各占56.88％、14.44％、10.54％、9.45％和4.13％.另外,试验表明辣木叶粗多糖具有良好的自由基清除能力,抗氧化活性较好且与浓度呈正相关.[结论]该研究为辣木叶多糖的深入研究和开发利用提供科学依据.     

黄金茶多糖超声提取工艺及体外抗氧化研究

研究超声波提取黄金茶多糖工艺及体外抗氧化活性。采用L9(34)正交试验、方差分析和多重比较法对超声波提取黄金茶多糖进行试验和结果分析;对黄金茶多糖提取的单因素(超声功率、超声时间、料液比、超声温度)进行优化,通过测定黄金茶多糖清除自由基能力和还原能力来评价其抗氧化活性。黄金茶多糖优化提取工艺为超声功率165 W,超声时间40 min,料液比1∶40,超声温度65℃;黄金茶多糖最高得率可达11.23%。黄金茶多糖对DPPH、·OH、超氧阴离子自由基清除能力和还原能力低于Vc,差异极显著(P0.01);0.2 mg/m L多糖和VC对ABTS+自由基清除能力,二者差异极显著(P0.01);黄金茶多糖对·OH、ABTS+自由基的半抑制浓度(IC50)分别为1.713 mg/m L、0.553 mg/m L。黄金茶中多糖的含量较高,在一定浓度范围内,多糖浓度越高,其抗氧化活性越强。