病毒 REV 与 ALV-J 经鸡胚垂直传播共感染对雏鸡的协同致病性

【目的】J 亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J，ALV-J）和禽网状内皮组织增殖病毒（Reticuloendotheliosis virus，REV）均可通过鸡胚垂直传播，且两者在鸡胚中的自然共感染已有报道，但两者经鸡胚共感染的致病性未有研究。建立 ALV-J 与 REV 垂直传播共感染的实验动物模型，研究 ALV-J 与 REV垂直传播共感染的致病作用及其对禽白血病净化检测的影响，以期为推动多病原协同净化提供参考。【方法】通过鸡胚接种方式构建分别携带 ALV-J、REV 及两者共感染的雏鸡感染模型，通过孵化率、死亡率、体重、胎粪 ALV-p27 抗原检出率、病毒血症阳性率等指标分析 REV 与 ALV-J 在垂直传播中共感染的致病性。【结果】ALV-J+REV 共感染组鸡胚孵化率为 65.71%，低于单感染组和空白组（CK）；共感染组死亡率高于单感染组和CK。7 日龄时 CK、ALV-J 组、REV 组、ALV-J+REV 组雏鸡平均体重分别为 59.25、50.83、49.67、43.78 g，共感染加重了对雏鸡生长的抑制。ALV 血浆病毒分离结果显示，ALV-J 组、ALV-J+REV 组阳性率在各日龄均为100%，CK 均为 0%。采集肛拭子检测 ALV-p27 抗原结果显示，ALV-J+REV 组雏鸡阳性率在 1、3、7、14 日龄分别为 91.30%、94.12%、90.90% 和 100%，肛拭子的 ALV-J p27 阳性检出率低于血浆病毒分离。比较免疫器官发育指数结果显示，ALV-J 和 REV 单感染均导致雏鸡免疫器官萎缩，共感染加重免疫器官萎缩程度。免疫器官病毒载量显示，REV 与 ALV-J 共感染促进了 ALV-J 在免疫器官中的增殖，同时 ALV-J 也促进了 REV 在免疫器官中的增殖。【结论】相对于 ALV-J 和 REV 单感染，两者共感染降低了鸡胚孵化率、增加了雏鸡死亡率、增强了对雏鸡生长的抑制作用，对诱导胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官萎缩的影响更加显著，且两者在共感染过程中对彼此复制均有促进作用。     

地方品种皖南黄肉种鸡ALV-J与REV的共感染 及其分子变异分析

 【目的】探讨地方品种皖南黄肉种鸡群中禽白血病病毒（ALV）与禽网状内皮增生病病毒（REV）的感染状态，同时对J亚型ALV（ALV-J）分离株的囊膜糖蛋白基因（env）和非编码区3′UTR序列进行分子变异分析，并对近十年的分离株非保守序列区段进行统计比较，探讨ALV-J分子变异趋势。【方法】取7只300日龄皖南黄肿瘤病鸡分别进行病理组织学观察、IFA检测肝脏组织切片后激光共聚焦观察、细胞培养后的IFA以及PCR方法检测。【结果】7只皖南黄肉种鸡有6只同时感染ALV-J与REV，而且ALV-J和REV已经共感染同一个肝细胞。取2个ALV-J分离株进行env基因与非编码区3′UTR扩增与序列分析，两分离株的env全长均为1 704 bp，3′UTR全长均为400 bp，3′UTR区段rTM和E元件同发生双缺失；3′UTR-E元件与近十年国内来自白羽肉鸡的ALV-J分离株比较，基因缺失表现为共性，但3′UTR-rTM基因缺失呈现多样性；5′LTR作为保守序列较之前所有国内外毒株有11 bp缺失。【结论】研究发现，地方品种皖南黄肉种鸡群存在ALV-J与REV的共感染，且呈现普遍性（6/7），表明地方品种鸡高肿瘤发生率与ALV-J、REV共感染密切相关；ALV-J的基因缺失主要集中于3′UTR-E与3′UTR-rTM， 3′UTR-E元件基因缺失显示，皖南黄肉种鸡群ALV-J分离株与近十年国内来自白羽肉鸡的ALV-J分离株有共同的来源。     

肉种鸡MDV和REV人工共感染的动态病理学与抗原定位研究

 【目的】深入了解MDV与REV人工共感染肉种鸡后疾病的发生、发展状况,为二者临床复杂的混合感染提供确实的鉴别诊断方法和明确的诊断时间。【方法】MDV和REV强毒株人工共感染1日龄肉种鸡,定期剖检,进行病理组织学、细胞凋亡、免疫组化和肿瘤组织的超微结构观察。【结果】肝、胰腺、腺胃、盲肠扁桃体、心肌在感染后1周出现以小淋巴细胞浸润为主的炎症,2～9周时,大部分实质器官出现以幼稚淋巴细胞、大中小淋巴细胞为主的渐进性增生灶,部分增生灶中可见原始网状细胞和马立克氏病细胞;10周后免疫器官实质细胞出现明显的凋亡;免疫组化显示,肝、脾、法氏囊、胸腺等在2周时呈双抗原阳性;电镜下,肝脏肿瘤组织中可见多形态淋巴细胞,核分裂相和细胞凋亡同时存在,同一细胞中可见MDV和REV两种病毒粒子。【结论】MDV与REV共感染对病程起协同和促进作用,发病早,病变明显;免疫酶及荧光方法可用于共感染的早期诊断（2周以前）;而后期（4周以后）可通过病理组织学进行鉴别诊断,两种病毒粒子、马立克氏病细胞、原始网状细胞、多形态和幼稚淋巴细胞可作为诊断依据。     

高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究

【目的】为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）和猪圆环病毒2型（PCV2）的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。【方法】选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+ CD4+ CD8-、CD3+ CD4- CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。【结果】HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60%;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子（尤以TNF-α）变化也最为明显。【结论】HP-PRRSV和PCV2之间存在协同致病作用,且猪群先感染HP-PRRSV后感染PCV2可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。     

雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒后免疫病理的研究

 研究了 1日龄 SPF雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒 ( REV)后 ,胸腺和脾脏 T细胞增殖反应及 T细胞数量、法氏囊和脾脏 B细胞增殖反应和抗体生成细胞数量、胸腺和脾脏 IL- 2及 IFN诱生活性的动态变化。结果发现 ,雏鸡感染 REV后 ,胸腺和脾脏 T细胞增殖反应及数量、法氏囊和脾脏 B细胞增殖反应和 Ig G+、Ig M+、Ig A+抗体生成细胞数量均明显低于未感染对照雏鸡 ;胸腺和脾脏 IL- 2及脾脏 IFN诱生活性显著下降 ,表明感染 REV后雏鸡中枢和外周免疫器官细胞免疫和体液免疫降低及细胞因子 IL- 2及 IFN免疫调节减弱。     

鸡痘病毒整合禽网状内皮组织增生病病毒基因的分子生物学鉴定及致病机理研究

 【目的】验证FPV野毒株是否存在REV基因整合现象,初步研究整合毒株致病鸡群REV的抗体变化规律、FPV感染组织细胞的病变及发病鸡的病理组织学变化特征。【方法】自泰安及周边地区搜集的9例典型FP临床病例取其病变组织分离FPV,电镜观察FPV形态特征、PCR扩增REV-env和LTR序列、ELISA检测FP发病鸡群血清REV抗体变化特征及病理组织学检查病鸡的病理学变化。【结果】9株FPV野毒株均有REV基因片段的整合,整合毒株使感染组织细胞的核由原来紧密球状变成较松散的螺旋状;FP患病鸡REV抗体阳性率显著升高;发病鸡除FP的一般病变外,同时显示脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官的淋巴组织严重萎缩,网状内皮细胞增生;肝脏、十二指肠、肺脏等器官内的淋巴组织亦表现相应的病理变化;用分离纯化整合REV基因的FPV毒株对SPF鸡试验性感染表明：整合REV基因的FPV毒株试验性感染SPF鸡患痘后期REV抗体水平的变化及组织器官的病理变化与野毒株FPV自然感染鸡所致病变相同。【结论】泰安及周边地区流行的FPV野毒株普遍存在REV基因的整合现象,整合有REV基因的FPV野毒株的致病性已发生改变,具有REV的某些致病特征。     

鸭源呼肠孤病毒感染引起雏鸭免疫损伤的观察

【目的】观察鸭源呼肠孤病毒对雏鸭脾、法氏囊的病理损伤及相关免疫指标,初步阐明鸭源呼肠孤病毒对所引起的机体免疫器官损伤以及机体免疫抑制,为进一步探讨发病机理和免疫防治提供理论依据。【方法】7日龄樱桃谷雏鸭人工感染鸭源呼肠孤病毒,分别观察脾、法氏囊组织病理学变化,检测脾、法氏囊指数,外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率,脾、法氏囊IgY生成细胞,并分析试验组及对照组差异显著性。【结果】感染鸭源呼肠孤病毒后,雏鸭脾出现明显坏死灶,之后出现肉芽肿结构,法氏囊固有层淋巴滤泡明显减少;脾、法氏囊指数降低;外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率降低;脾IgY生成细胞数量增多、法氏囊IgY生成细胞数量减少。【结论】鸭源呼肠孤病毒感染可导致雏鸭免疫器官严重损伤并引起免疫抑制。     

鸭源呼肠孤病毒感染引起雏鸭免疫损伤的观察 征文

 【目的】观察鸭源呼肠孤病毒对雏鸭脾、法氏囊的病理损伤及相关免疫指标,初步阐明鸭源呼肠孤病毒对所引起的机体免疫器官损伤以及机体免疫抑制,为进一步探讨发病机理和免疫防治提供理论依据。【方法】7日龄樱桃谷雏鸭人工感染鸭源呼肠孤病毒,分别观察脾、法氏囊组织病理学变化,检测脾、法氏囊指数,外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率,脾、法氏囊IgY生成细胞,并分析试验组及对照组差异显著性。【结果】感染鸭源呼肠孤病毒后,雏鸭脾出现明显坏死灶,之后出现肉芽肿结构,法氏囊固有层淋巴滤泡明显减少;脾、法氏囊指数降低;外周血CD3+、CD8+T细胞阳性率降低;脾IgY生成细胞数量增多、法氏囊IgY生成细胞数量减少。【结论】鸭源呼肠孤病毒感染可导致雏鸭免疫器官严重损伤并引起免疫抑制。     

镉对生长期小鼠脾组织及脾细胞DNA的损伤作用

【目的】研究镉对生长发育阶段小鼠脾组织及脾细胞DNA的损伤作用,以揭示镉的免疫毒性作用机制。【方法】将生长期小鼠随机分为对照组、镉低剂量组(LD50/100,经口灌胃测定镉的半数致死剂量LD50为187mg/kg)、镉中剂量组(LD50/50)和镉高剂量组(LD50/25),饮水染镉40d时处死,分析脾脏相关参数和血液免疫指标变化,利用光学显微镜检查脾脏组织的病理学变化,利用彗星试验研究脾细胞DNA的损伤情况。【结果】随着染镉剂量的增加,小鼠的脾脑系数和脾脏指数均增大;白细胞总数和淋巴细胞比率升高,中性粒细胞比率不变,中值细胞比率、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M降低;各镉剂量组小鼠脾脏组织的形态结构均遭到损伤,镉高剂量组最严重,表现为白髓区淋巴细胞数量明显减少,红髓内红细胞数量明显增加;各镉剂量组小鼠脾细胞DNA的拖尾率、尾长、彗星全长、尾矩、Olive尾矩和损伤等级均高于对照组,呈明显的剂量-效应关系。【结论】镉可致生长期小鼠的脾脏相关参数、血液免疫指标、组织形态结构改变和脾细胞DNA损伤,从而对其免疫功能产生抑制性影响。     

鸡病防治中网状内皮组织增殖病病毒(REV)的有害作用

本文报道对禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)进行的一些研究,电镜观察表明REV是典型的RNA肿瘤C型病毒,具有“苯环状结构”,动物感染试验表明REV与火鸡疱疹病毒(HVT)之间可产生协同作用来危害鸡群。作者采用了冰冻切片结合荧光抗体或酶标抗体技术来检测组织中的REV抗原,采用间接荧光抗体试验对广东10个鸡场进行了血清学调查,结果表明只有2个鸡场是REV抗体阴性的,其余8个场均呈不同程度的抗体阳性,特别值得提到的是,其中1个场两批鸡因注射不同来源的HVT疫苗而表现出REV抗体阳性率的显著差异,这显示了“HVT疫苗失效”一个很可能的原因是REV污染了HVT疫苗。     

Influence of REV and ALV-J Co-Infection on Immunologic Function of T Lymphocytes and Histopathology in Broiler Chickens

The aim of present investigation is to study the effect of single- and co-infection with REV and ALV-J on T lymphocytes bioactivities and histopathology in broiler chickens. The bioactivities of blood and spleen T lymphocytes including lymphoproliferation responses, cytotoxicitic responses, and histopathology of spleen were detected in broiler chickens singly- or co-infected with REV and ALV-J at different days post inoculation and the virus expressions in spleen of infected broiler chickens were detected with immunofluorescence assay （IFA）. The results indicated that blood and spleen T lymphocytes proliferation responses and cytotoxicity in broilers infected with REV or/and ALV-J were inhibited in the whole observed period compared with controls. In the co-infected chickens they were highly inhibited than in the single-infected. The histopathology of spleen in infected chickens at 17 and 37 d post inoculation （dpi） indicated that cell interium increased, the numbers of lymphocytes decreased, and the regrowth were destroyed or decreased, especially more significantly at 17 than at 37 dpi. The different numbers of virus were detected in spleen lymphocytes in REV- infected and/or ALV-J-infected chickens. In the spleen of co-infected chicken, both REV and ALV-J were detected and the total numbers of viruses were more than in chickens singly-infected with REV or ALV-J. Thus, the co-effect of REV and ALV-J caused more immunosuppression on T lymphocytes bioactivities in broiler chickens than single-effect of ALV-J or REV, which contributed to the sever histopathology and the product of tumor cells. This study will be helpful for understanding the effect of co-infection with many viruses and control them in poultry.     

鸡J亚群白血病病毒与网状内皮增殖病病毒混合感染发病机理的研究

通过人工感染建立了ALV—J、REV单独感染和混合感染1日龄肉仔鸡的病理模型。初步研究表明混合感染使试验鸡的生长发育障碍、免疫器官萎缩、对细菌易感性及死亡率等指标显著升高。 动态病理学研究表明：REV感染主要引起骨髓网状细胞及淋巴样细胞弥漫性或灶状浸润，ALV—J感染主要引起骨髓髓系细胞灶状或弥漫性显著增生，混合感染时骨髓病变与REV感染基本一致，但相对较严重，并见ALV—J感染病变。各病毒感染组免疫器官均发生了严重的实质萎缩性病变，病变以混合感染组最重，REV组次之。在某些组织器官ALV—J组见嗜酸性粒细胞样的瘤细胞浸润增生，REV组见网状细胞及淋巴细胞样瘤细胞浸润增生，而混合感染组见以上两种瘤细胞增生。从混合感染组的病变来看，在致病性上ALV—J与REV之间的确存在明显的协同促进作用，导致机体的免疫抑制加重，但混合感染早期尚未发现REV对ALV—J致瘤的促进作用。     

三群商品代蛋鸡J亚群白血病跟踪观察

【目的】了解J亚群白血病在海兰褐蛋鸡群中发生和发展的真实表现及其与病毒分离和抗体反应的关系；【方法】对来自3个鸡场39至43周龄31只疑似ALV-J感染鸡做了连续两个月的临床、病理、病毒血症和抗体反应动态观察和比较；【结果】这3群鸡对ALV-J感染率非常高，有28只鸡在死前感染ALV-J或呈现持续性病毒血症，其中14只表现为无抗体反应的免疫耐受性持续性病毒血症。这3群鸡都表现为典型J亚群白血病髓细胞样肿瘤特征性病变，且在几乎所有不同脏器和组织均可出现。在31只鸡中，有13只鸡同时在3个或3个以上不同脏器中出现肿瘤/血管瘤，有1只鸡出现在5个器官中；【结论】中国近年来不仅仍有ALV-J在蛋鸡群中流行，而且在过程中，ALV-J致病性逐渐增强。     

不同免疫状态对肉仔鸡血液生化指标和细胞免疫应答的影响

 【目的】研究不同免疫状态对肉仔鸡血液生化指标和细胞免疫应答的影响。【方法】选用健康情况良好1日龄AA肉公鸡180只,随机分为4组,每组5个重复,每重复9只。设定不同免疫应激模型,为无免疫组即对照组（no vaccine,NV）,常规免疫组（conventional vaccine,CV）,以及在常规免疫基础上注射细菌脂多糖的免疫亢进组（LPS）和环磷酰胺的免疫抑制组（CYP）。采用 CD3/CD4/CD8 三色流式细胞术、MTT法检测肉鸡免疫状态和非免疫状态下外周血中 T 淋巴细胞及其亚群的变化。【结果】与NV组相比,肉仔鸡的体增重和采食量均显著降低LPS组和CYP组（P＜0.05）,各处理料重比无显著差异（P＞0.05）,NV组与CV 组生产性能指标无显著差异（P＞0.05）,各日龄处理间血清TP、GLU和CHLO含量均无显著差异（P＞0.05）。第21和35天,LPS组和CYP组血清ALB含量显著低于CV组和NV组（P＜0.05）;第21 天,LPS组血清α-AGP和 BUN含量显著低于NV组（P＜0.05）,CPY和LPS均抑制T、B淋巴细胞增殖,LPS组CD4+/CD8+T细胞百分比显著低于NV组（P＜0.05）。【结论】未进行免疫肉鸡可维持机体正常的生长性能和细胞免疫稳态,LPS和CYP的刺激可降低肉鸡采食量和体增重;随日龄增加肉鸡对CYP刺激的耐受性有所上升,LPS刺激可增强肉鸡细胞免疫应答反应。     

江西省主要养鸡地区4种鸡免疫抑制病的血清学调查

对江西省11个地市主要养鸡地区的24个鸡群的460份血清样品用ELISA方法进行了鸡传染性贫血(CIA)、禽网状内皮细胞增生症(RE)、禽呼肠孤病毒感染(ARV)血清抗体的检测,并对其中的368份血清样品用ELISA方法进行了J-亚型禽白血病(ALV-J)血清抗体的检测,结果CIAV、REV、ALV-J、ARV(ELISA)抗体总阳性率分别为80.65%、21.30%、6.52%、96.30%。结果表明目前江西省各地饲养的鸡群中这4种免疫抑制病的感染相当普遍,而且多为混合感染,感染一种及以上免疫抑制病的个体为99.13%,同时感染两种及以上免疫抑制病的个体为56.96%,同时感染3种及以上免疫抑制病的个体为20.43%,同时感染4种免疫抑制病的个体为2.17%。     

实验感染肉鸡组织中J亚群禽白血病病毒的抗原定位

从实验感染J亚群禽白血病病毒(ALVJ)的髓细胞性白血病肉鸡病例中,选取典型病例,用J亚群禽白血病病毒单克隆抗体通过免疫酶组化试验对不同组织进行了抗原定位观察。结果显示:在实验感染阳性肉鸡体内实质组织细胞及瘤细胞的核膜和细胞浆里可见不同程度的棕黄色阳性反应,可为探讨ALVJ对体内组织细胞的嗜性提供依据。     

ALV-J相关的鸡急性纤维肉瘤发病模型的建立

【目的】证明纤维肉瘤病料中含有的ALV-J相关病毒能够诱发急性纤维肉瘤。【方法】将含ALV-J相关病毒的病料过滤液经不同部位接种1日龄817肉杂鸡;将该过滤液不同倍数稀释后接种1日龄SPF鸡和817肉杂鸡;将该过滤液接种细胞培养后的上清液接种1日龄817肉杂鸡,连续动态观测30 d。【结果】颈部皮下、胸肌、腹腔3个部位攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%（20/20）、95.2%（20/21）、100%（20/20）。病料过滤液未经稀释接种817肉杂鸡和SPF鸡的肿瘤发生率均为100%（10/10）,10倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为80%（8/10）和100%（10/10）,100倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%（10/10）和80%（8/10）,1 000倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为40%（4/10）和50%（5/10）,更高倍数稀释后攻毒鸡没有肿瘤发生。接种病料的细胞培养上清也能使33.3%（2/6）的鸡只发生肉瘤。病理组织学检测显示：诱发的急性肿瘤系典型的纤维肉瘤。【结论】817肉杂鸡肉瘤病料中含有ALV-J相关的急性致肿瘤病毒,不论是病料过滤液本身还是其接种DF-1细胞培养后的上清液都能在不同品种鸡复制出急性纤维肉瘤,最快在接种后7 d出现,且肿瘤发生的时间、动态和肿瘤发生率与接种量密切相关。