枯草芽孢杆菌DZSY21抗菌肽的提取及其应用

为了提取枯草芽孢杆菌抗菌肽以探索其对食品的防腐效果,选用枯草芽孢杆菌DZSY21、解淀粉芽孢杆菌FZB42和枯草芽孢杆菌OKB105 菌种发酵,然后将这3个菌种的发酵上清液分别与丙酮按1:2的体积比混合,旋转蒸发浓缩得到3种菌的抗菌肽粗提物。对抗菌肽的热稳定性试验可知3种菌的抗菌肽经100 ℃加热30 min后抑菌效果均有小幅度降低,但抑菌活性仍较强。抗菌肽蛋白酶稳定性试验结果显示,3种菌的抗菌肽对胰蛋白酶和木瓜蛋白酶都很敏感;应用性试验中采用牛奶、苹果、肉等作为食品模型,结果显示经枯草芽孢杆菌DZSY21抗菌肽处理后的试验组品相均明显好于对照组。表明枯草芽孢杆菌DZSY21抗菌肽具有较好的防腐效果。     

枯草芽孢杆菌4种环脂肽抗猪δ冠状病毒的研究

为探究从枯草芽孢杆菌Bs 916中提取的表面活性素、罗克霉素、泛革素及杆菌霉素L 4种抗菌肽对猪δ冠状病毒(PDCoV)的抗病毒作用。首先采用CCK-8法确定抗菌肽对细胞无毒性的最佳浓度范围,随后分别采用RT-qPCR、Western blot及IFA 3种方法检测Bs 916中4种环脂肽对PDCoV的抗病毒效果。结果显示,4种环脂肽在浓度≤50μg/mL时对细胞无毒性,同时具有良好的抗病毒效果。相同条件下,罗克霉素抗病毒效果最佳,其次为表面活性素。本研究从枯草芽孢杆菌Bs 916中提取的表面活性素、罗克霉素、泛革素及杆菌霉素L可抑制PDCoV在细胞中的增殖,具有良好的抗病毒作用,其中以罗克霉素和表面活性素的抗病毒效果最佳,可为抗PDCoV药物研发提供理论支持。     

芒果多酚的微波萃取及抑菌作用

为探明提取芒果多酚最佳工艺条件及芒果多酚的抑菌作用,采用微波萃取法对芒果核多酚进行提取,并用滤纸圆片法测定其粗提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒杆菌的抑菌效果。结果显示,芒果多酚的最佳提取条件为乙醇浓度60%、料液比1∶30(g∶mL)、微波功率385 W、提取时间1min、抽提3次,在此条件下芒果多酚提取率达10.56%。芒果多酚溶液的抑菌效果为大肠杆菌>伤寒杆菌>金黄色葡萄球菌>枯草芽孢杆菌,其对应的最低抑菌浓度为0.2mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL。结论:芒果多酚具有一定的抑菌能力,可用于食品贮存与加工。     

早竹竹叶多糖的提取及其抑菌作用

对竹叶多糖进行微波提取后初步纯化,并研究其抑菌效果。以早竹叶粉为原料,通过微波辅助-水提醇沉提取,脱蛋白,脱色,干燥后得到竹叶多糖,多糖的最终得率为4.609mg/g,其纯度为60.7%。将多糖配制成一定浓度的溶液后采用纸片扩散法测定了早竹多糖对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈大小和最小抑菌浓度(MIC),研究表明:对这两种细菌均有一定的抑制作用,且对大肠杆菌的抑制效果好于枯草芽孢杆菌。相应的MIC分别为12.5mg/mL和25mg/mL。     

枯草芽孢杆菌添加剂对生物絮团菌群结构和营养成分的影响

为探究枯草芽孢杆菌添加剂对生物絮团菌群结构、添加菌在絮团上的富集效果、絮团营养以及系统构建过程水质的影响。生物絮凝系统构建过程中,枯草芽孢杆菌的添加剂量分别为A组106 CFU/mL、B组105 CFU/mL、C组104 CFU/mL和D组0 CFU/mL,添加周期为3 天/次。结果表明：生物絮凝系统构建过程中,枯草芽孢杆菌添加剂量对絮团总悬浮颗粒物(Total suspended solids, TSS)、5 分钟内絮团沉降体积(Floc Volume, FV)影响显著(P＜0.05);对三态氮浓度变化趋势影响较明显;对絮团氨基酸含量、粗蛋白含量、絮团碳氮比影响显著(P＜0.05),对絮团粗脂肪,粗灰分含量影响不显著(P＞0.05);添加枯草芽孢杆菌絮团中氨基酸、粗蛋白含量高于不添加枯草芽孢杆菌组;枯草芽孢杆菌添加剂量对絮团门、属水平菌群差异物种相对丰度有显著影响(P＜0.05),增加枯草芽孢杆菌添加剂浓度,絮团中芽孢杆菌浓度也随之升高。综上所述,枯草芽孢杆菌能在生物絮团上得到有效富集,在生物絮凝系统构建过程中添加枯草芽孢杆菌能提高絮团粗蛋白和氨基酸含量,有利于为养殖对象提供蛋白源。     

藜麦种子总黄酮的提取及体外抑菌作用

采用96孔板微量法和牛津杯法研究藜麦种子总黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌的抑制作用。结果表明,藜麦种子总黄酮对供试菌株的抑制效果由大到小顺序为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌,对金黄色葡萄球菌基本没有抑菌作用。最低抑菌浓度值分别为:大肠杆菌32 mg/m L、枯草芽孢杆菌64 mg/m L、白色念珠菌128 mg/m L、铜绿假单胞菌256 mg/m L、金黄色葡萄球菌512 mg/m L。说明藜麦种子总黄酮对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和铜绿假单胞菌有抑菌作用,对金黄色葡萄球菌不敏感。     

褐多孔菌发酵代谢物的抑菌活性初步研究

采用滤纸片法和生长速率法分别研究了褐多孔菌发酵代谢物对7种常见细菌和6种植物病原菌的抑制作用。结果表明,发酵液乙酸乙酯部分对金黄色葡萄球菌、巨大芽孢杆菌抑制效果显著,最小抑菌浓度分别为2.50 mg/mL和1.25 mg/mL,浓度为0.5 mg/mL时对小麦赤霉病菌抑菌率达到100%,菌丝乙酸乙酯部分对蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌最小抑菌浓度分别为1.25mg/mL和0.625 mg/mL,对白菜黑斑病菌和小麦赤霉病菌抑菌率均高于70%,菌丝及发酵液正丁醇部分对几乎所有病原菌抑制作用都很明显。     

枯草芽孢杆菌产脂肽的发酵条件优化

[目的]优化枯草芽孢杆菌产脂肽的发酵条件,提高枯草芽孢杆菌ATCC21332脂肽产量。[方法]利用较低成本的底物对枯草芽孢杆菌ATCC21332进行发酵优化。[结果]枯草芽孢杆菌在葡萄糖浓度9 g/L、豆粕浓度40 g/L、接种量5%、装液量120 mL(500 mL容量瓶)、温度30°C、转速150 r/min、发酵时间120 h时,脂肽产量最高,为4 885.1 mg/L,比添加活性炭载体的最高产量3 600.0 mg/L增加了35.70%。通过测定发酵过程中不同时间段发酵液中氨基酸含量,发现在81 h时谷氨酸含量急剧增大,添加谷氨酸可使脂肽产量达954.0 mg/L,相比不添加谷氨酸的培养基可使脂肽产量增加近6倍。[结论]该研究为工业化生产提供新思路。     

巨大芽孢杆菌JD-2的解磷效果及对土壤有效磷化的研究

考察巨大芽孢杆菌JD-2对有机磷、无机磷的降解效果,比较巨大芽孢杆菌JD-2、乳酸芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌对土壤有效磷化的作用差异。研究不同浓度的巨大芽孢杆菌JD-2对土壤有效磷化的作用效果。结果表明:巨大芽孢杆菌JD-2具有很强的降解有机磷、无机磷的能力,有效磷含量分别为对照组的25倍、22倍。巨大芽孢杆菌JD-2在土壤中的解磷效果最好,土壤有效磷含量由19.0 mg/kg增至34.5 mg/kg。不同浓度的巨大芽孢杆菌JD-2在土壤中均具解磷效果,接入土壤起始浓度106CFU/g最适宜。     

草莓根腐病病原菌鉴定及其防治药剂筛选

【目的】明确草莓根腐病的病原菌及其对不同药剂的敏感性,为草莓根腐病防治提供参考依据。【方法】于2018年10月在河南南阳唐河县采集具有草莓根腐病典型症状的发病植株,通过病原菌分离纯化、致病性检测结合形态学与分子生物学鉴定等对其致病病原菌种类进行鉴定;同时,采用室内毒力测定与田间防治相结合,研究甲基硫菌灵、杀毒矾、寡雄腐霉、哈茨木霉、多抗霉素和枯草芽孢杆菌等6种药剂对草莓根腐病的防治效果。【结果】当地种植园内草莓根腐病的致病病原菌为尖孢镰刀菌;6种药剂对尖孢镰刀菌的毒力为甲基硫菌灵哈茨木霉枯草芽孢杆菌多抗霉素杀毒矾寡雄腐霉,其EC50分别为4.98mg/mL、38.39mg/mL、57.25mg/mL、67.98mg/mL、192.76mg/mL和610.55mg/mL;田间防效因供试草莓品种(丰香和隋珠)不同而存在较大差异,其中杀毒矾对丰香和隋珠的防效最佳,均为80.16%;甲基硫菌灵、枯草芽孢杆菌对丰香和隋珠的防治效果也较好,均分别为80.16%和69.95%;哈茨木霉对丰香和隋珠的防治效果均为69.95%。【结论】枯草芽孢杆菌的防治效果较好,且其活性成分主要为生防类芽孢杆菌,可减少农药使用量,降低草莓产品的农药残留,可在当地大面积推广应用。     

革胡子鲶体表粘液抗菌肽的分离与纯化及抑菌活性研究

[目的]分离纯化革胡子鲶体表粘液抗菌肽,并分析其抑菌活性。[方法]通过硫酸铵沉淀、Sephadex G-50凝胶层析,对高密度养殖的革胡子鲶体表粘液中的抗菌肽进行了初步的分离及纯化,并分析其抑菌活性。[结果]经Sephadex G-50凝胶层析分离得到2个洗脱峰,经检测这2个洗脱峰对迟缓爱德华氏菌抑制作用最强,对嗜水气单胞菌抑制作用次之,对大肠杆菌的抑制作用最弱;对同种菌而言,洗脱峰2的抑菌效果强于洗脱峰1。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,洗脱峰1显示3条蛋白主带,并以9.5kD的蛋白含量最高,而洗脱峰2中所含蛋白的分子量应小于4.1kD。[结论]为探讨高密度养殖条件下革胡子鲶的抗病机理奠定了基础,同时有望为研制和开发新型的水产饲料添加剂和抑菌药物奠定基础。     

苦丁茶等10味中草药抑菌作用研究

本文研究苦丁茶等10味中草药提取物的抑菌作用。本实验以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,测定苦丁茶等10味中草药乙醇提取物的抑菌作用,并通过呼吸代谢抑制实验对其中抑菌效果最好的苦丁茶提取物进行了抑菌机制初探。10味中草药提取物中苦丁茶的抑菌效果最好。苦丁茶提取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）是6．25mg／mL,对大肠杆菌的MIC是12．5mg／mL。呼吸代谢抑制实验结果显示,当苦丁茶提取物的浓度为6．25mg／mL时,可抑制两种指示菌的苹果酸脱氢酶活性,加药组的金黄色葡萄球菌苹果酸脱氢酶（MDH）比活性与对照组相比降低了39．88％;加药组的大肠杆菌MDH比活性与对照组相比降低了32．02％。说明其抑菌机制是通过抑制细菌的呼吸代谢过程等方式实现的。     

鲶鱼体表黏液特性的初步研究

对鲶鱼体表黏液活性成分、抑菌特性进行研究,并对蛋白类物质和多糖类物质含量进行测定,结果表明:(1)使用G-200葡聚糖凝胶层析法对鲶鱼体表黏液活性成分进行分离,无法得到纯化的单一物质,在以后的试验中需要寻找新的分离纯化方法。(2)鲶鱼体表黏液对藤黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌抑菌效果不明显。(3)鲶鱼体表黏液中含有的蛋白类物质含量占黏液干重的40%左右,多糖类物质约占黏液干重的4.2%。     

鲶鱼内脏鱼油的提取工艺研究

本文探讨了鲶鱼内脏中提取鱼油的工艺条件。以鱼油的感官质量和提取率为观察指标,以几种常用有机溶剂为提取剂,以中性蛋白酶为水解酶,通过单因素和正交试验确定提取溶剂的种类和酶解工艺参数。结果表明:提取剂以正己烷-异丙醇(3︰2)最好;提取的工艺条件为:先以中性蛋白酶进行酶解,设定料液比为1︰6,加酶量为1 400 u/g,酶解温度为45℃,酶解时间为2 h;经过滤后,按料液比1︰5加入正己烷-异丙醇(3︰2),振荡萃取25 min。在此条件下,鱼油的提取率为25.3%,产品为淡黄色、澄清透亮的液体;经测定,鱼油的酸价(mg KOH/g)、过氧化值(g/100 g)、碘价(g I2/100 g)分别为3.88、0.067 1、127.4。所以,采用有机溶剂和中性蛋白酶处理相结合对鱼油进行提取,鱼油的感官质量好,提取率高。     

鲶鱼骨蛋白酶解产物抗菌性的酶解工艺优化

采用四因子二次通用旋转设计,以抑菌率为测定指标,对胃蛋白酶水解革胡子鲶Claris lareza鱼骨蛋白的条件进行了优化,同时测定了酶解产物中可溶性肽的含量,以分析抑菌率与可溶性肽含量之间的相关关系。经Design Expert7．1．2软件优化,得出胃蛋白酶酶解鲶鱼骨蛋白的最优条件为：底物浓度0．277kg／L,加酶量1408U／g,水解温度39．2℃,水解时间4．86h,在此条件下获得的水解物,对大肠杆菌、藤黄微球菌及枯草芽孢杆菌的抑菌率分别为71．40％、56．88％和64．54％。通过SAS软件分析二者的相关性,发现可溶性肽含量和抑菌率之间并不存在相关性。     

微波法测定分析鱼油脂成分(英文)

采用微波提取斑点叉尾鮰内脏鱼油,然后加酸使其甲酯化,以气相色谱/质谱法分析鱼油中的脂肪酸。结果表明斑点叉尾鮰内脏纯油脂中鱼油达到99%。从鱼油中共鉴定出23种成分,有饱和及不饱和脂肪酸,还有少量烷烃类物质。不饱和脂肪酸含量为72.84%,其中多不饱和脂肪酸为19.12%,以C18:2(16.54%)为主,单不饱和脂肪酸为53.72%,以C18:1(48.52%)为主。饱和脂肪酸含量为19.21%,主要有C16:0(14.46%)和C18:0(4.17%),多是低于C18以上的中长链脂肪酸。因此斑点叉尾鮰油脂可作功能性脂肪酸的重要膳食来源。该研究为探讨斑点叉尾鮰纯油脂成分构成,综合利用和开发斑点叉尾鮰鱼提供理论基础和质量控制方法     

大鲵不同部位的抑菌效果研究

[目的]研究大鲵皮肤、黏液、肉粉和脂肪的抑菌效果。[方法]用80%甲醇水溶液分别浸提大鲵粘液、皮肤及肉粉获取提取物,用乙醚萃取大鲵油。采用滤纸片扩散法,研究大鲵4种提取物对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌的抑菌作用。[结果]大鲵皮肤浸提物对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌有较强的抑菌作用,而对大肠杆菌无抑制作用。大鲵黏液、大鲵肉粉、大鲵油对4种菌的抑制作用均不显著。[结论]大鲵的主要抗菌部位为皮肤。     

磷酸盐缓冲液的浓度和pH对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽分级盐析的影响

[目的]探讨磷酸盐缓冲液的pH和浓度在分级盐析时,对革胡子鲶肠道各组分蛋白/肽的影响。[方法]以不同浓度和pH的磷酸盐缓冲液作为组织匀浆缓冲液,在硫酸铵饱和度为20%、40%、60%、80%和100%的条件下,对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽进行分级盐析,并对盐析产物进行称重、电泳检测和抑菌活性分析。[结果]磷酸盐缓冲液的pH为6.0或7.4时,其浓度对盐析产物产量、蛋白沉淀和抑菌效果无显著影响。而pH为8.0、浓度为0.05 mol/L时,硫酸铵饱和度为60%和100%的粗蛋白/肽的产量显著高于浓度为0.02 mol/L的磷酸盐缓冲液粗蛋白含量;大分子蛋白能更好地在硫酸铵饱和度为20%和40%时沉淀下来,而在饱和度为60%、80%和100%能获得分子量相对较小的抗菌蛋白/肽。磷酸盐缓冲液的pH和浓度对抑菌效果无显著影响。[结论]pH8.0,浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液更适于革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽的提取。     

蝎子草醇提浸膏对金黄色葡萄球菌抗菌机制的研究

目的:研究蝎子草醇提浸膏(Girardinia suborbiculata C.J.Chen ethanol extract,GSEE)对金黄色葡萄球菌的抗菌机制.方法:测定蝎子草醇提浸膏对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC),通过GSEE对菌体生长曲线、菌体可溶性蛋白的表达和菌体核酸合成等的影响来对GSEE的抗菌机制进行研究.结果:GSEE对金黄色葡萄球菌的MIC为100 mg/mL,可明显抑制金黄色葡萄球菌对数生长期的菌体分裂;SDS-PAGE电泳表明,金黄色葡萄球菌的可溶性蛋白含量在GSEE作用后的条带明显少于对照组;同时,通过DAPI染色显示,GSEE对菌体的核酸合成具有显著抑制作用.结论:GSEE对金黄色葡萄球菌具有较强的抗菌作用,其抗菌机制可能通过抑制菌体可溶性蛋白的表达和菌体核酸的合成等方面来实现抑制金黄色葡萄球菌的生长.     

斑点叉尾鮰暴发性出血溃疡症的病理学研究

【目的】探究两起斑点叉尾鮰Ietalurus punetaus暴发性体表出血溃疡症的发病病因和病理特征。【方法】利用湿片法对鳃组织和体表黏液进行压片,观察寄生虫寄生情况。从发病鱼的肝脏、脾脏和肾脏中分离病原菌,检测细菌感染情况;利用PCR法检测患病斑点叉尾鮰的肝、脾、肾混合组织匀浆中斑点叉尾鮰病毒(Channel catfish virus,CCV)的携带情况。运用组织病理学方法观察病鱼的病理损伤特点,综合分析并推测该病的致病原因。【结果】该出血溃疡症的靶器官主要为脾脏、肾脏、肝胰脏、肠道以及皮肤肌肉。主要表现为严重的血管反应,实质细胞可见肿胀、变性、坏死;而胃、脑和心脏病变较轻,仅有轻微的炎症;鳃丝、眼球和鳔等未见明显病变。所有的患病个体均出现中度至重度出血性坏死性脾炎、中度肾炎、轻度至中度坏死性肝胰腺炎和肠炎。患病斑点叉尾鮰体内未检测到寄生虫、细菌以及CCV。【结论】综合病理学、细菌学和病毒学检测结果,推测此次斑点叉尾鮰暴发性疾病由某种非CCV的病毒感染所致,温度应激可能是引发该病的条件诱因。