应用SRAP分子标记构建红麻种质资源分子身份证

【目的】以来源于不同国家和地区的127份红麻栽培种、野生种和近缘种为材料,利用SRAP标记构建红麻种质资源分子身份证。【方法】利用SRAP标记对127份红麻种质进行遗传分析,计算其遗传相似系数。利用UPGMA法作聚类图,构建分子身份证。【结果】40对引物组合在127份红麻种质材料中共扩增出383条DNA片段,其中,375条为多态性片段,总的多态性条带比率（PPB）为97.9%。UPGMA聚类分析结果表明,相似系数为0.70时,127份红麻种质资源被划分为4个类群。用SRAP特征谱带和多种引物组合2种方法可有效区分所有材料,并构建出127份红麻种质资源特异性分子身份证,置信概率达到99.99%。【结论】基于15对SRAP核心引物组合的36条谱带构建了一套127份红麻种质资源唯一性的分子身份证。     

果桑种质资源SRAP指纹图谱构建及遗传差异分析

为了有效区分15份果桑种质资源,利用分子标记SRAP技术进行遗传差异分析并构建DNA指纹图谱。从42对SRAP引物组合中筛选出17对引物进行PCR扩增,得到306条清晰条带,其中多态性条带253条,多态性比率为82.68%,供试材料间的遗传相似系数(GS)在0.390 9～0.811 1之间。选用2对多态性引物（Me2/Em1 和Me7/Em5）,初步构建了15份果桑种质材料的DNA指纹图谱。经过非加权组平均法(UPGMA)聚类分析,以遗传相似系数0.666为阈值,将供试材料分为3组;根据条带的有无转换为二进制编码形成数字指纹图谱,简便快速区分每份种质材料。采用SRAP分子标记建立的指纹图谱适合于果桑品种的分类和鉴定。     

基于SCoT标记的猕猴桃种质资源遗传多样性研究

利用SCoT分子标记对28份猕猴桃种质资源进行遗传多样性和UPGMA聚类关系研究。结果表明,8条引物对供试猕猴桃材料显示多态性,共扩增出75条清晰的条带,平均每条引物扩增9.1个多态性条带,多态性比率为97.3%。遗传相似系数在0.47～0.86,显示供试的猕猴桃种质资源具有丰富的遗传多样性。UPGMA聚类分析显示,在遗传相似系数0.64处可将28份猕猴桃种质划分为3个明显的聚类分支,部分中华猕猴桃、2个软枣猕猴桃与多数美味猕猴桃种质聚类,显示中华猕猴桃、软枣猕猴桃与美味猕猴桃具有较高的遗传相似性,种质亲缘关系较近;部分中华猕猴桃种质遗传变异较高,并与大籽猕猴桃有较近的遗传关系。     

基于AFLP的茶花种质资源遗传多样性研究

采用限制性扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分子标记方法,对来自国内外35份茶花种质资源间的遗传关系进行分析。结果表明,7对引物组合扩增出508条条带,其中多态性条带456条,多态性条带比例为89.67%,揭示了茶花种质丰富的遗传多样性;Nei's基因多样性指数范围为0.255 9~0.320 3,香农指数范围为0.396 5~0.476 7,品种间的遗传相似系数范围为0.17~0.52;UPGMA聚类分析可将35份茶花种质分为3个大类群。说明AFLP是研究茶花种质资源遗传多态性及亲缘关系的有效手段之一。     

基于SCoT标记的木奶果种质资源遗传多样性分析

利用SCoT标记对37份不同来源的木奶果种质资源进行遗传多样性分析。从75条引物中筛选出9条重复性好、条带清晰的引物用于PCR扩增,共扩增出109条条带,其中多态性条带94条,多态性比率为86.24%;供试材料相似系数介于0.58～0.92之间,9条引物平均多态性信息含量为0.8728,说明供试样品具有较高的遗传多样性。UPGMA聚类分析显示,SCoT标记能将37份木奶果资源完全区分开,并在相似系数0.69和0.70处将供试材料分成A、B、C 3个大组,C组在相似系数0.72处可进一步分为C1和C2两个亚组。     

15个酿酒葡萄品种的分子身份证构建

为了更好的保护并促进优异葡萄种质资源的有效区分和合理利用,利用SSR标记技术对酿酒葡萄品种(系)材料中选取的15份特异性资源进行亲缘关系的分析、分类、种质识别。从44对SSR引物中筛选出15对用于供试葡萄种质的SSR扩增,共扩增出74条带,其中多态性条带71条,多态性百分率为95.9%。根据SSR扩增结果,分析表明15份葡萄材料遗传距离的变异范围为0~1.092 4。UPGMA聚类分析表明,在遗传相似系数0.63处,可将15份供试材料分为2个类群,准确地检测出基因型之间的遗传背景与遗传关系。通过多态性谱带的有序编码转换,构建了15个葡萄品种的分子身份证系统,结果表明,利用SSR标记进行酿酒葡萄种质资源的鉴定和保护是可行的。     

利用SSR标记对陕西地方桑树品种的遗传多样性分析

应用SSR分子标记技术分析了55份陕西地方桑树种质资源的遗传多样性,结果表明,28对SSR引物在55份桑树品种中共扩增出261条带,多态性比率为100%;55份桑树品种间的遗传相似系数变异范围为0.6398~0.9655,平均遗传相似系数为0.8027。采用UPGMA法对55份桑树品种的遗传关系进行聚类分析,供试材料被分成3个大类。结果显示,供试桑树种质材料的亲缘关系与地理分布不存在关联。     

果桑遗传差异的SRAP和EST-SSR分析

为了从分子水平揭示果桑种质资源间的亲缘关系,指导其种质资源的鉴定和利用,以及快速选育优良果桑新品种,利用SRAP和EST-SSR 2种新型分子标记对供试果桑种质材料的遗传多样性进行分析。从42对SRAP引物中筛选出17对扩增条带清晰的引物,扩增得到306个位点,多态性位点达253个,多态性比率为82.68%,遗传相似系数(GS)为0.390 9~0.811 1。从26对EST-SSR引物中筛选出18对引物,扩增出297个位点,多态性位点236个,多态性比率为79.46%,遗传相似系数(GS)为0.506 8~0.858 1。综合2种分子标记得出供试材料的遗传相似系数(GS)为0.464 3~0.814 3。利用UPGMA构建聚类树状图,最终供试材料被聚为3个类群,呈现出明显的地理分布特征,并由此得出SRAP分子标记更适用于果桑种质亲缘关系的遗传差异分析。     

36份菠萝种质的遗传多样性SCoT分析

利用SCoT标记研究了36份菠萝种质资源的遗传多样性。从86条引物中筛选出18条重复性好,条带清晰的引物进行PCR扩增,共扩增出209条带,其中135条具有多态性,多态性带比率为64.99%。经NTSYS软件分析,36份菠萝种质间遗传相似系数在0.63～0.93之间,说明SCoT标记能够揭示菠萝种质间较高的遗传多样性。UPGMA聚类分析显示,SCoT标记能将36份菠萝种质完全区分开,并分成五类。     

红豆杉种质资源遗传多样性的目标起始密码子多态性(SCoT)分析

采用目标起始密码子多态性(SCo T)分子标记技术,研究红豆杉18份种质的遗传多样性及种质间的遗传关系,为红豆杉资源的保护、利用以及遗传育种提供依据。以18份红豆杉种质资源为材料,从80条引物中筛选出19条重复性好、条带清晰的引物进行PCR扩增,利用NTSYS-pc2.10e软件对其扩增位点多态性进行分析。结果表明:19条引物共扩增出134条带,其中97条具有多态性,多态性带比率为72.39%。18个红豆杉种质间遗传相似系数在0.31~0.89之间,说明SCo T标记能够揭示材料间较高的遗传多样性。利用UPGMA进行系统的聚类分析显示,在相似系数0.53处可将18份红豆杉资源分成两大类;主坐标分析结果与聚类分析结果相一致。红豆杉资源具有较丰富的遗传多样性,SCo T分子标记技术可有效地从分子水平揭示红豆杉种质资源的遗传背景和亲缘关系。     

山红柿组培快繁技术体系的建立

以山红柿(Diospyros morrisiana Hance)当年生枝条上休眠芽为外植体材料,通过不同处理间对比研究对山红柿组培苗生长的影响,建立了初代培养、继代增殖、生根培养、叶片再生技术体系。初代培养:山红柿休眠芽经10%H2O2和75%乙醇消毒30 s消毒处理,有效解决了外植体褐化等问题。通过3种基本培养基的比较研究,发现(1/2N)MS培养基最适于豆柿组培苗的初代增殖生长培养。继代增殖:采用(1/2N)MS+6-BA1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L+TDZ 0.05 mg/L与(1/2N)MS+ZT 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L培养基交替继代培养,平均株高可达2.28 cm。生根培养:在添加20 g/L蔗糖,活性炭0.05 g/L+IBA 0.1 mg/L的MS(1/2N)培养基中,前期暗培养3 d,平均根数最高可达2.08,生根率最高可达78.46%。叶片再生:在MS+TDZ 2.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L的培养基中,先期暗培养14 d后转移至正常光照条件下培养,30 d后愈伤组织形成率、不定芽再生率和平均不定芽数分别达到93.3%,92%和3.74个。成功地建立了山红柿离体快繁技术体系。     

‘Damas1869’李离体叶片不定芽再生影响因素分析

以‘Damas1869’李试管苗幼嫩叶片为试材,对影响离体叶片再生的培养基种类、激素浓度、叶片放置方式、暗培养时间、琼脂用量等关键因素进行研究。结果表明:F14培养基再生效果最好,明显优于MS和WPM培养基;最佳激素配比为4.0 mg/L TDZ+0.5 mg/L IBA,用4.5 g/L琼脂配制偏软的再生培养基,叶片近轴面向下接触培养基,暗培养5 d后转光下培养有利于提高离体叶片的再生效率,再生率可保持在73.5%左右,平均每叶再生3~5个芽。     

TDZ对牛皮杜鹃叶片分化及继代增殖的影响

以牛皮杜鹃组培苗为试材,研究以改良MS为基本培养基,不同质量浓度TDZ、ZT与IBA组合,对叶片愈伤组织诱导及分化、继代增殖的影响。结果表明：TDZ对组培苗叶片愈伤组织诱导及分化的效果显著优于ZT,但在继代培养时增殖效果不如ZT;TDZ 0.3 mg/L+IBA 0.5 mg/L处理的叶片分化效果最好,分化率高达97.44%;不定芽在改良MS+ZT 0.2 mg/L+IBA 0.5 mg/L中继代培养后,每瓶分化的不定芽数最多（30.2个）。     

马铃薯品种茎段愈伤组织诱导和植株再生的研究

以2个马铃薯品种夏坡蒂和费乌瑞它茎段为外植体,研究了不同植物激素对马铃薯愈伤组织诱导及其不定芽分化的影响.结果表明,夏坡蒂和费乌瑞它的茎段最佳愈伤诱导组织培养基分别为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+GA30.5mg/L和MS+ZT 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L,愈伤率均可达到100%;夏坡蒂和费乌瑞它的不定芽最佳诱导培养基分别为MS+ZT 2.0 mg/L+NAA0.1mg/L+GA3 5mg/L和MS+6-BA 2.0mg/L+ZT 2.0mg/L+GA3 5mg/L,诱导率分别为52.38%和53.6%.结果为进一步转基因工作中高效植株的再生奠定了一定的基础.     

野生紫斑百合高效离体再生体系的建立

 采用丽江野生紫斑百合鳞片为外植体,以MS为基本培养基,附加不同浓度激素,进行鳞片分化诱导、增殖和生根培养,筛选适宜激素浓度配比。结果表明：鳞片可以通过愈伤诱导发生途径再生,从愈伤组织上直接形成不定芽,最佳愈伤诱导培养基为MS+0.5mg/L TDZ+0.5mg/L NAA,诱导率为45.00%;不定芽增殖最佳培养基为MS+1.0mg/L 6BA+0.5mg/L NAA,增殖率为72.58%;最佳生根培养基为1/2MS + 1.5mg/L IBA,生根率达到93.33%。     

光皮桦叶片再生体系的建立

【目的】建立光皮桦叶片高效再生体系,为光皮桦的良种培育及遗传转化研究提供依据。【方法】以光皮桦无菌叶片为外殖体,分别用含0.6 mg/L TDZ 的MS、WPM和1/2MS培养基进行不定芽诱导分化,筛选最佳基本培养基;向筛选出的最佳基本培养基中添加0.05 mg/L NAA及不同质量浓度（0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mg/L）TDZ的激素组合组成不定芽分化培养基,用于诱导不定芽分化,筛选最佳不定芽诱导分化培养基;以1/2MS培养基为基本培养基,分别附加0,0.05,0.1,0.5,1.0,2.0 mg/L的IBA或0.5,1.0,2.0,3.0 mg/L的NAA组成生根培养基,用于再生苗生根,筛选最佳生根培养基,建立光皮桦叶片再生体系。【结果】光皮桦无菌叶片诱导不定芽的最适基本培养基为MS培养基,其诱导的不定芽最多,且芽生长状况良好,颜色深绿;最适不定芽诱导分化培养基为：MS+TDZ 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上叶片丛生芽诱导率可达到80.00%,平均不定芽数高达12.00个,且芽生长健壮,呈深绿色;最适再生苗生根培养基为：1/2MS+IBA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上再生苗的生根率达100%,平均根数为14.5个,平均根长为11 cm,根较粗壮,基部无愈伤组织,且产生了很多毛细根。【结论】建立了光皮桦无菌苗叶片的高效再生体系。     

东北点地梅下胚轴再生体系的建立

为保存野生资源和满足需要,以东北点地梅的下胚轴为材料,采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导与分化、不定芽生根、试管苗的生根、生根继代及移栽和定植的研究。结果表明,MS+ZT0.2 mg/L+6-BA0.1 mg/L+2,4-D2.1 mg/L是下胚轴愈伤组织诱导培养的理想培养基;MS+NAA0.1 mg/L+ZT0.6 mg/L是愈伤组织分化培养和不定芽分化继代增殖培养的理想培养基;用10 mg/L的IAA溶液对不定芽处理24 h,将不定芽接种到1/2 MS培养基上生根是不定芽生根培养的理想方法。在温室中试管苗移栽成活率为94.1%,定植成活率为98.5%,定植成活的试管苗保持了野生东北点地梅的生物性状。     

草莓叶柄组织培养再生研究

以草莓品种晶瑶为试材,研究了不同激素浓度和配比对叶柄的诱导愈伤组织、分化出芽的影响以及叶柄材料不同部位对不定芽再生的影响,建立了草莓叶柄的离体再生体系。结果表明,叶柄在MS+TDZ1.5mg/L+IBA0.3mg/L的诱导培养基上出愈率可达到78.2%,且愈伤组织状态较好;该愈伤组织在分化培养基MS+NAA0.2mg/L+BA1.0mg/L上的不定芽分化率可达到21.25%,并且叶柄的植物学下端部位利于不定芽的再生。     

酿酒葡萄“赤霞珠”叶片和叶柄离体再生系统建立的研究

以赤霞珠叶片、叶柄为材料,研究了细胞分裂素(TDZ)、不同基本培养基、叶柄砧有无对其不定芽再生的影响。结果表明:TDZ对赤霞珠离体叶片、叶柄不定芽再生有诱导作用,对叶片、叶柄的最高诱导率分别为18.06%和28.57%;叶片再生的最佳培养基为MS+TDZ4.0mg/L,叶柄再生的最佳培养基为MS+TDZ4.0mg/L+NAA0.01mg/L,叶片不定芽生根培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+20g/L蔗糖。     

大活组织培养及再生体系建立的研究

以大活的嫩茎为外植体,进行了大活组织培养及再生体系建立的研究。试验结果表明:MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L是愈伤组织诱导和继代增殖的理想培养基;在光照条件下MS+ZT 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L是愈伤组织分化的理想培养基;1/4MS+IAA 0.5 mg/L是不定芽生根和试管苗生根继代增殖的理想培养基。试管苗移栽成活率为92.1%,定植后成活率为96.8%。