库尔勒香梨离体叶片再生体系的建立

【目的】建立库尔勒香梨叶片诱导再生的稳定高效再生体系。为梨的遗传转化研究奠定基础。【方法】以库尔勒香梨离体培养的继代30 d左右的无菌苗叶片为材料,1/2 MS为基本培养基,用 TDZ与 IBA或 NAA分别组合设计配方,研究不同生长调节剂质量浓度组合对不定芽诱导过程中愈伤组织形成率和不定芽形成率的影响,选取最优配方附加不同质量浓度的AgNO₃,获得不定芽再生的最佳培养基。用IBA和NAA分别组合设计生根生长调节剂的配比,根据生根率、平均生根数以及平均生根长度筛选最适宜生根的生长调节剂的配比,建立生根的培养体系。【结果】库尔勒香梨叶片诱导不定芽再生的最佳培养基为1/2 MS+TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+AgNO₃ 0.5 mg/L,愈伤组织诱导率100%,不定芽形成率84.92%。最适宜香梨再生苗生根的培养配方为1/2 MS + 0.5 mg/L IBA + 0.9 mg/L NAA,结合前期暗培养7 d,生根率可达100%,平均生根条数为5.66,平均根长度为 2.8 cm。【结论】建立了库尔勒香梨的再生体系。     

酿酒葡萄“赤霞珠”叶片和叶柄离体再生系统建立的研究

以赤霞珠叶片、叶柄为材料,研究了细胞分裂素(TDZ)、不同基本培养基、叶柄砧有无对其不定芽再生的影响。结果表明:TDZ对赤霞珠离体叶片、叶柄不定芽再生有诱导作用,对叶片、叶柄的最高诱导率分别为18.06%和28.57%;叶片再生的最佳培养基为MS+TDZ4.0mg/L,叶柄再生的最佳培养基为MS+TDZ4.0mg/L+NAA0.01mg/L,叶片不定芽生根培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+20g/L蔗糖。     

软籽石榴(Punica granatum L. cv. Yushizi)叶片再生体系的研究

为建立软籽石榴的离体高效再生体系,试验以新梢为材料建立了软籽石榴的无菌体系,并试验了不同激素组合对软籽石榴增殖效果的影响;以叶片为外植体研究了不同培养基组合对不定芽再生频率和伸长的影响。结果表明,茎段增殖培养的最适培养基为MS+6-BA 0.3 mg/L+KT 0.3～0.4 mg/L+NAA 0.1 mg/L;叶片不定芽诱导的最适培养基为MS+TDZ 0.6 mg/L+NAA 0.2 mg/L,在不定芽诱导培养基中添加0.6 mg/L的GA3对不定芽的伸长效果较好。在1/2MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.2 mg/L+AC0.5 g/L培养基增殖培养所得芽苗生根效果最优。     

蜻蜓凤梨叶片组织培养植株再生的研究

以蜻蜓凤梨试管苗叶片为外植体进行离体再生研究。结果表明,叶片诱导直接分化不定芽的最佳培养基是MS+BA 5.0 mg/L+IBA 1.5 mg/L,分化率高达80%。增殖培养基为MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L。壮苗培养基为MS+NAA 2.0 mg/L。生根培养基为MS+NAA 2.0 mg/L+AC 0.5 g/L,生根率达100%。     

‘雪球’海棠组织培养体系的建立与优化

【目的】建立‘雪球’海棠离体植株组织培养快繁体系,并对组织培养体系进行优化。【方法】以‘雪球’海棠当年生茎段为起始接种材料,获得无菌苗,利用无菌苗和试管苗叶片为材料,以MS为基础培养基,采用正交试验研究不同激素及其配比对雪球组培苗扩繁、植株再生和组培苗生根的影响。【结果】用2 g/L HgCl₂处理‘雪球’海棠茎段外植体是较为恰当的消毒及获得无菌苗的方法。在MS+2.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IBA培养基中组培苗的总增殖倍数最高,为9.11,为最适增殖培养基;在MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IBA培养基中组培苗的总增殖倍数为6.38,分化的芽生长良好,无玻璃化,为获取叶盘不定芽再生试验用叶片的最适培养基。在MS+0.2 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA培养基（以山梨醇为碳源）中,叶盘不定芽再生效率最高,为60.71%,为不定芽再生最适培养基。‘雪球’海棠生根容易,在1/2 MS+0.2 mg/L IBA培养基中,组培苗培养7 d开始生根,生根率为100.0%。【结论】建立了‘雪球’海棠组织培养体系,明显提高了其繁殖速率,使其生根率可达到100.0%。     

绿萝组织培养和遗传转化条件优化

为优化绿萝离体再生条件，建立更高效的遗传转化体系，分别以绿萝叶片和叶柄为外植体，比较不同植物生长物质对绿萝不定芽诱导和植株离体再生的影响。并通过PCR技术克隆拟南芥AtFALDH基因，利用农杆菌介导法对绿萝愈伤组织进行遗传转化，比较不同转化条件下绿萝愈伤组织抗性不定芽诱导率。结果表明，绿萝叶柄愈伤组织和不定芽诱导效果均优于叶片。绿萝叶片愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D，该培养基下诱导率大约为61.5%；叶柄愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA，该培养基下诱导率达到97.8%。绿萝叶片不定芽诱导最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA，该培养基下诱导率接近100%；叶柄不定芽诱导最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA，该培养基下诱导率约为100%，但叶柄来源的愈伤组织诱导产生的不定芽数量较多，而且生长更旺盛。生根最适培养基为1/2 MS+0.05 mg/L NAA，该培养基下生根...     

‘宏绿1号’辣椒离体培养与植株再生体系的建立

【目的】建立高辣度辣椒的高效离体培养再生体系,为其工厂化育苗生产奠定基础。【方法】以云南宏绿辣素有限公司选育的高辣度辣椒品种宏绿1号种子为试材获得无菌外植体,采用单因素试验和正交试验设计对基本培养基、芽诱导分化、增殖、生根培养及移栽等影响因子进行研究。【结果】不定芽诱导的适宜基本培养基为MS+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;筛选出MS+2.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3为不定芽分化的最佳培养基,分化率达93.3%;在MS+5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基上进行不定芽茎伸长诱导,伸长率可达100%;最适生根培养基为B_5+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,生根率达100%,炼苗移栽后成活率可达98.0%。【结论】建立了该辣椒品种高效的离体快繁培养技术体系。     

甘蓝CMS下胚轴和子叶的离体培养与植株再生研究

【目的】探索一种利用甘蓝胞质雄性不育系(CMS)下胚轴和子叶进行快速扩繁的技术,为利用CMS大量繁制甘蓝杂交种提供一条新途径。【方法】以甘蓝CMS 05-2-10为试材,将苗龄5~7 d无菌苗的下胚轴和子叶切下,接种于MS培养基上,45~50 d后统计再生芽数,比较6-BA与NAA不同质量浓度配比对不定芽的诱导情况;将诱导出的不定芽接种于添加不同质量浓度(0,0.1,0.3,0.5 mg/L)NAA的MS生根培养基上,20 d后比较生根率和根的长势。【结果】在对下胚轴和子叶进行不定芽诱导时,MS培养基中分别添加1.0和4.0 mg/L的6-BA对下胚轴、子叶的诱导效果较好,其芽再生频率和分化系数分别为83.3%,53.0%和3.6,3.0。在MS培养基中添加1.0mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,其对下胚轴不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为80.7%,分化系数为3.4,褐化率为1.5%;在MS培养基中添加4.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,其对子叶不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为50.0%,分化系数为3.2,褐化率为3.4%;二者的褐化率均明显低于仅添加6-BA的处理。在MS生根培养基中添加0.3 mg/L NAA时,不定芽的生根效果较好,生根率达100%,且根系生长健壮。【结论】利用甘蓝胞质雄性不育系CMS 05-2-10的下胚轴和子叶作为外植体进行不定芽的诱导,对于下胚轴,其适宜培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂;对于子叶,其适宜培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。不定芽诱导生根的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。     

利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0 mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4 mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA-3(0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】 在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和 GA-3 3种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25 d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35 d后诱导效果下降。【结论】 甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L;以生长日龄为25 d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA3(0.5,1.0,1.5,2.0mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和GA33种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35d后诱导效果下降。【结论】甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L;以生长日龄为25d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

盐生植物盐角草同化枝不定芽的诱导与增殖

【目的】建立并确定盐生植物盐角草(Salicornia europaea L)同化枝不定芽诱导与增殖的试验体系和培养基。【方法】以MS为基本培养基,通过附加不同浓度激素(TDZ、NAA、6-BA)及盐(NaCl)进行盐角草不定芽的诱导,筛选诱导盐角草不定芽的最适激素配比及盐浓度;后期通过对细胞分裂素TDZ浓度(0、1.6、1.8、2.0和2.5 mg/L)的摸索,确定盐穗木不定芽增殖的最适浓度。【结果】盐角草同化枝在含有200 mM NaCl的MS₃(2.0 mg/L TDZ、0.1 mg/L NAA)培养基中不定芽诱导率达32.4%,显著高于(P<0.05)其余组,为最适诱芽培养基。再生的不定芽在含有2.0 mg/LTDZ的培养基中经过30~40 d的培养,不定芽增殖率可达619.5%。盐角草不定芽诱导及增殖最适培养基均为:MS+2.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mM NaCl。【结论】一定浓度的TDZ、NAA及NaCl组合,可通过直接器官发生途径有效诱导盐角草同化枝不定芽的产生和增殖。     

绿萝组织培养与快繁技术

[目的]研究绿萝组培快繁技术要点,为绿萝再生体系建立和工厂化生产提供技术支持.[方法]以绿萝叶片和无节茎段为外植体,以MS为基本培养基,探讨不同浓度的激素组合(1.0~3.0 mg/L 6-BA、0.1~0.3 mg/L NAA、0.1~0.3mg/L IBA)对愈伤组织诱导及其分化、不定芽诱导、生根培养等的影响.[结果]两种外植体均能产生愈伤组织,但茎段产生愈伤组织较快,产生不定芽也快.叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L.茎段诱导愈伤组织及其分化的最适培养基均为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2 mg/L,最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L.[结论]绿萝叶片和茎段可作为愈伤组织培养的较好外植体,茎段培养效果优于叶片.     

双单倍体南瓜后代子叶离体再生植株研究

【目的】探索一种快速扩繁南瓜双单倍体植株的技术,以扩大双单倍体植株的数量,提高其育种效率。【方法】以双单倍体南瓜后代子叶为外植体,在MS培养基中分别添加不同质量浓度的6-BA（1.0,4.0 mg/L）和NAA（0.05,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L）,筛选最佳组合;在此基础上,继续添加不同质量浓度的2,4-D（0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L）,筛选3种激素的最佳组合。在MS＋6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的不定芽诱导培养基上,研究其对不同苗龄子叶的诱导效果。将不定芽接种在含不同质量浓度NAA (0.05, 0.1, 0.2, 0.5 mg/L)的MS生根培养基上,比较生根率和根系生长势。【结果】在诱芽培养基中,添加2种激素时,以6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的MS培养基诱导率最高,为66.67％,分化系数为3.89;添加3种激素时,以6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L＋2,4-D 1.5 mg/L的MS培养基诱导率最高,达80.95％,分化系数为4.12。当子叶展开后苗龄为3 d时,不定芽诱导率相对较大,为77.42％。不定芽在MS+0.1 mg/L NAA培养基上生根效果最好,根系生长健壮,生根率达100%。【结论】双单倍体南瓜后代子叶离体再生的适宜激素质量浓度组合为MS＋6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L;以展开后3 d苗龄的子叶作为外植体诱导效果最好;MS+0.1 mg/L NAA是不定芽诱导生根的最适培养基。     

兰州百合快速繁殖研究

【目的】优化兰州百合组织培养体系,提高其植株再生率,建立高频植株再生体系。【方法】采用正交试验设计,以鳞片为外植体,以MS和1/2MS培养基为基本培养基, 附加不同浓度NAA（0.2~1.0 mg/L）、 6-BA（0.5～2.0 mg/L）、KT（0.1～1.0 mg/L）、IBA（0.2~1.0 mg/L）、IAA（0.2～1.0 mg/L）, 对兰州百合进行鳞茎诱导、增殖和生根培养,筛选最佳激素配比。【结果】6-BA浓度过低或过高均不利于小鳞茎形成,当1.0 mg/L 6-BA与0.2～1.0 mg/L NAA配比时,鳞茎诱导率和平均生成鳞茎数较高;随着NAA浓度的增加,平均生成鳞茎数不断增加,其中以1.0 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L NAA组合的平均小鳞茎最多,为5.9个。与0.5～1.0 mg/L KT+0.2 NAA mg/L组合相比,添加0.5～1.5 mg/L 6-BA+0.5～1.0 mg/L KT或0.2 NAA mg/L组合的培养基更利于芽增殖,但其丛芽长势较弱,其中以添加0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基的丛芽长势和小鳞茎长势较好,平均分化鳞茎较多。在以MS、1/2MS为基本培养基、分别添加0.2～1.0 mg/L IAA或IBA的培养基中,随着IAA或IBA浓度的升高,鳞茎生根率不断降低,根质量不断下降,而平均根数和根长表现有所不同。从根的质量来看,MS培养基的根质量不如1/2MS培养基;而在1/2MS培养基中,1/2MS与IBA组合优于与IAA组合。【结论】鳞茎诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+NAA 0.5～1.0 mg/L,不定芽增殖的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,最佳生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L IBA,生根效果最好,生根率为100.0%,根中等长度、粗壮,质量最好。     

观赏凤梨再生体系的建立及优化*

 以5个品种（系）观赏凤梨的腋芽为外植体,研究了不同基因型、激素配比和苗龄对芽分化的影响。采用L9(34)正交试验分别针对TDZ,6-BA,NAA,IBA,蔗糖、大量元素及椰乳（CW）等因素进行优化,筛选出最佳的增殖培养基和生根培养基。结果表明：芽分化的最佳培养基为MS+TDZ 1.5mg/L +6-BA 0.5mg/L。在此分化培养基上,紫星和红星的芽分化频率较高,达76.8%,70.6%。黄星、火炬和红剑芽分化频率较低,分别为44.2%,27.4%和 24.9%。7d苗龄的腋芽外植体最适于再分化。最佳增殖培养基为MS + TDZ 0.5mg/L + 6-BA 1.0mg/L +NAA 0.2mg/L+蔗糖40g/L,其增殖系数达7.31。最佳的生根培养基为1/2MS + NAA 0.5 mg/L + IBA 1.0mg/L +CW 20mL/L,生根率达60%以上     

西葫芦双单倍体自交一代离体再生研究

以西葫芦DH12-11409双单倍体植株自交后代种子为试材,研究不同激素组合、外植体类型和苗龄对诱导西葫芦不定芽再生以及不定芽生根的影响。结果表明,取5d龄西葫芦双单倍体黄绿色子叶的子叶节为外植体,在MS+30g/L Suc+8g/L Agar+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上诱导不定芽效果最好,诱导率高达90.0%,分化系数为8.5;生根培养基则以MS培养基中添加0.05或0.1mg/L NAA为宜;5~6片真叶再生植株经驯化移栽成活率高达90.0%,为再生植株驯化移栽的最佳时期。     

龙选蕉组培快繁技术

【目的】探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系。【方法】以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0～6.0 mg/L 6-BA、0.1～0.2 mg/L NAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养。【结果】相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象。在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA 3.0 mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常。【结论】次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS+ 4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。     

野生紫斑百合高效离体再生体系的建立

 采用丽江野生紫斑百合鳞片为外植体,以MS为基本培养基,附加不同浓度激素,进行鳞片分化诱导、增殖和生根培养,筛选适宜激素浓度配比。结果表明：鳞片可以通过愈伤诱导发生途径再生,从愈伤组织上直接形成不定芽,最佳愈伤诱导培养基为MS+0.5mg/L TDZ+0.5mg/L NAA,诱导率为45.00%;不定芽增殖最佳培养基为MS+1.0mg/L 6BA+0.5mg/L NAA,增殖率为72.58%;最佳生根培养基为1/2MS + 1.5mg/L IBA,生根率达到93.33%。