‘小白杏’诱导愈伤组织及不定芽体系的优化

为建立快速繁殖离体培养再生体系并为遗传转化奠定基础,本研究以‘小白杏’胚和叶片为材料,探讨了氯化汞和次氯酸钠消毒的方法和时间对种子和种胚的影响,2,4-D(0.5,1.0,1.5 mg/L)、ZT(0.5,1.0,1.5 mg/L)和TDZ(1.0,2.0,3.0 mg/L)浓度配比对‘小白杏’胚诱导愈伤组织再分化不定芽的作用,及2,4-D(0.5,1.0 mg/L)、IBA(0.5,1.0 mg/L)、NAA(0.5,1.0 mg/L)浓度配比对‘小白杏’叶片诱导愈伤组织再分化不定芽的作用。结果表明:使用10%的次氯酸钠消毒10 min,种胚污染率和死亡率最低,分别为2.6%、0.7%,存活率最高,为96.7%;在3/4MS+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D处理下,胚诱导愈伤组织形成率和不定芽诱导率最高,分别为98%、96%;在3/4MS+2.0 mg/L AgNO_3+1.0 mg/L ZT+2.0 mg/L TDZ+1.0mg/L IBA处理下,叶片诱导愈伤组织形成率和不定芽诱导率最高,分别为96%、93%。综合来看,胚诱导愈伤组织再分化形成不定芽的诱导率优于叶片,种子和种胚消毒的最佳方案是10%的次氯酸钠消毒10 min;胚诱导愈伤组织再分化形成不定芽最佳配方是3/4MS+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D;叶片诱导愈伤组织再分化形成不定芽的最佳配方是3/4MS+2.0 mg/L AgNO_3+1.0 mg/L ZT+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L IBA。     

厚叶岩白菜叶片离体培养研究

以厚叶岩白菜无菌苗的嫩叶为试验起始材料,研究了其离体培养诱导不定芽再生和体胚发生的过程。结果表明,叶片可以诱导出愈伤组织,诱导培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT+0.5mg/L VC;愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+1.0mg/L ZT+0.1mg/L NAA+0.5mg/L VC;诱导不定芽分化的最佳培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+0.5mg/L VC,诱导率最高为30%;体胚发生的最佳培养基为MS+1.0mg/L ZT+0.1mg/L IBA+0.5mg/L,分化率最高为26.67%。     

罗汉果叶片离体再生快繁技术

以罗汉果叶片为外植体,探讨不同培养方式、不同激素组合对愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,以期建立起稳定高效的罗汉果叶片离体再生快繁体系.结果表明:罗汉果叶片在培养基MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.7 mg/L上培养4周,愈伤组织的诱导率在90%以上;罗汉果愈伤组织在培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+TDZ 0.1 mg/L上不定芽的分化率可达70%,平均出芽指数达3.7;罗汉果试管苗在培养基MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L上芽增殖比较稳定,在培养基MS+IBA 0.1 mg/L上培养2周开始分化不定根,生根率在90%以上.     

TDZ/NAA对尾赤桉茎段愈伤分化及植株再生的影响

以尾赤桉继代幼苗茎段作为外植体,研究不同质量分数组合的TDZ/NAA对愈伤和不定芽分化及植株再生培养的影响.结果表明:改良MS+TDZ 0.05 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基效果最好,可获得高达80%的不定芽诱导,每个愈伤组织可以产生10～20个有效芽.获得的分化苗在无TDZ和NAA培养基中的壮苗效果好.     

杂交构树叶片组培快速繁殖体系的建立

为满足市场对杂交构树种苗的需求,以无菌苗叶片为外植体进行组织培养,优化其快速繁殖技术。结果表明:1)愈伤组织诱导及不定芽分化的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L,其愈伤组织诱导率达91.7%,不定芽分化率为88.3%。分化出的不定芽长势较好,叶片的颜色浓绿,且愈伤褐化、软化现象较少。2)继代增殖的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA30.5mg/L,增殖倍数可达5倍;3)生根适宜培养基为改良B5+6-BA 0.01mg/L+NAA 0.3mg/L+IBA0.5mg/L,生根率为60%。     

不同品种软枣猕猴桃愈伤组织诱导及植株再生

以软枣猕猴桃(Actinidia arguta)品种"魁绿"和"佳绿"的无芽茎段、叶片、叶柄为外植体,研究外植体及生长调节剂组合对软枣猕猴桃愈伤组织诱导及植株再生的影响,从而建立"魁绿"和"佳绿"的离体再生体系。结果表明:6-BA对软枣猕猴桃愈伤组织的诱导效果好于KT,"魁绿"和"佳绿"叶片分别在MS+2,4-D0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L和MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1 mg/L的培养基上愈伤诱导率最高,分别为93.3%和96.2%。在不定芽再生培养过程中,6-BA和TDZ不能诱导不定芽发生,而ZT对不定芽的分化具有较好的诱导作用;"魁绿""佳绿"均在培养基MS+NAA 0.05 mg/L+ZT 3 mg/L上不定芽分化率最高,分别为72.0%、37.8%。不同品种及不同外植体的愈伤组织诱导率和不定芽再生率均存在差异,"魁绿"的不定芽分化率明显高于"佳绿";无芽茎段和叶片的愈伤组织诱导率均90%;叶片的不定芽分化率最高,显著高于茎段和叶柄。再生苗在培养基1/2 MS+IBA 0.1 mg/L上的生根率为97%。     

红掌组织培养再生体系建立的研究

以红掌"骄阳"幼嫩叶片为材料,筛选出红掌愈伤组织诱导、不定芽分化、生根的最佳培养基及激素配比。结果表明:红掌愈伤组织诱导的最佳培养基为改良MS+6-BA 1.0 mg/L+2.4-D0.5 mg/L,不定芽分化培养基为改良MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,生根培养基为改良MS+IBA 0.6 mg/L+IBA 0.3 mg/L,生根率达到100%。     

鸡眼草有利变异植株嫩茎组织培养及再生体系的建立

为保护野生资源,满足栽培的需求,以具有有利变异鸡眼草嫩茎为材料,进行愈伤组织诱导和不定芽分化、试管苗生根、移栽和定植的研究.结果表明,MS +6-BA 0.4 mg/L +2,4-D2.0mg/L是嫩茎愈伤组织诱导和继代增殖培养的理想培养基;MS+ZT 0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L是愈伤组织分化培养的理想培养基;1/3MS+ABT 1.0 mg/L +IBA 0.3mg/L是不定芽生根培养和试管苗的生根继代增殖培养的理想培养基;试管苗移栽成活率为94.5％;定植成活率为98.7％.定植的试管苗保持了有利变异性状和鸡眼草的所有植物学性状.     

两性株番木瓜愈伤组织分化初探

以番木瓜两性株的愈伤组织为材料,以MS为基本培养基,研究了不同植物生长调节剂及组合对愈伤组织诱导不定芽和无菌芽诱导生根的影响.结果表明,6-BA和TDZ对番木瓜愈伤组织分化都有一定的诱导作用,而6-BA的作用优于TDZ,最适浓度0.05mg/L.GA3具有促进6-BA诱导愈伤组织分化的作用,诱导番木瓜愈伤组织分化出芽的最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+GA 31.0 mg/L.相对NAA而言,IBA更适于诱导不定芽生根,生根培养基以MS+IBA 0.3 mg/L为宜.     

君迁子休眠芽及叶片离体培养体系优化及植株再生

以君迁子(Diospyros lotus Linn.)休眠芽和叶片为外植体,研究基础培养基种类和外植体基因型对休眠芽初代培养的影响,比较叶片放置方式、TDZ浓度、ZT与TDZ不同浓度组合及暗培养时间对叶片愈伤组织形成和不定芽再生的影响;然后对再生芽进行生根。结果表明:君迁子休眠芽初代培养中,DKW培养基最适合其生长发育,休眠芽生长势最佳;初代培养中,不同基因型的外植体在DKW培养基中生长势基本相同,说明外植体基因型对其初代培养没有影响,但对继代培养影响较大。叶片下表面朝上放置在MS+ZT 0.1 mg/L+TDZ2.0mg/L中暗培养20d,愈伤组织形成率达100%,在(1/2N)MS+2.200 mg/L TDZ上愈伤组织形成率为81.4%;叶片下表面朝上放置在MS+ZT 1.0mg/L+TDZ 2.0mg/L中暗培养0d,不定芽再生率和外植体平均不定芽数最高,分别为34.4%和2.1±0.3。组培苗在1/2MS(1/2N)+IBA 1.0mg/L中培养5d后,转入1/2MS(1/2N)+1g/L活性炭培养20d,生根率为58.14%,平均根数为4条。     

基于AFLP标记的河八王种质资源遗传多样性分析及分子身份证构建

以广西地区的15份河八王无性系为材料,采用AFLP标记结合毛细管电泳进行分析,计算多态性引物的总扩增条带数、多态性条带数和多态性条带比率。进行遗传相似系数和UPGMA聚类分析,并建立分子身份证。25对AFLP引物组合在15份河八王种质资源中共扩增出2 208个位点,其中多态性位点1 914个,多态性比率(PPB)为87.11%。UPGMA聚类分析表明,供试的15份河八王种质资源其遗传相似系数变化范围在0.656~0.878,在相似系数为0.706时,可划分为3个类群。结合特征带和不同引物组合方法可有效建立河八王种质资源特异分子身份证,置信概率达到99.99%。所供试河八王种质具有较丰富的遗传多样性水平,基于3对AFLP引物组合104条谱带构建的15份河八王种质分子身份证具有唯一性,AFLP标记是在分子水平上鉴定河八王种质的有效方法。     

大三叶升麻嫩茎无性系的建立

为保护野生资源,实现人工栽培,以大三叶升麻茎为试验材料,进行愈伤组织的培养,以及试管苗的生根、生根继代培养和试管苗的移栽、定植的研究,建立起野生大三叶升麻无性系。结果表明:MS+BA 0.2 mg/L+2,4-D 2.0～2.5 mg/L是嫩茎愈伤组织诱导培养的理想培养基;MS+AgNO31.0 mg/L+GA30.5 mg/L+ZT 0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L是嫩茎愈伤组织分化培养的理想培养基;把不定芽的基部在NAA 4.0mg/L的溶液中处理约5 min,接种到1/3MS为基本培养基,附加IBA 0.6 mg/L的培养基上,进行生根培养的方法是生根培养的理想培养方法;1/3MS+IBA 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L也是增殖培养的理想培养基;试管苗移栽、定植易成活。定植成活的试管苗保持了野生大三叶升麻的所有植物学性状。     

噻苯隆对月季芽增殖及月季叶片愈伤诱导的影响

为研究噻苯隆( TDZ)对月季的影响,以皇家巴西诺月季的茎段和叶片为外植体,MS为基本培养基,添加一定浓度的细胞分裂素和生长素及不同浓度的TDZ,对其芽增殖和叶片愈伤组织诱导进行了研究.结果表明:促进侧芽增殖的最佳培养基为MS+NAA 0.lmg/L+6BA1.0mg/L+TDZ 2.0mg/L,诱导月季叶片形成愈伤的最佳培养基为MS+NAA 0.5mg/L+2,4D5.0 mg/L+ TDZ 1.0mg/L,0.5 cm×1.0 cm的切块有利于愈伤组织的产生.     

一品红叶片愈伤组织诱导及腋芽的增殖

以一品红叶片和腋芽为外植体进行了愈伤组织诱导和腋芽增殖的研究,结果表明,叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+KT 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L;腋芽增殖的较佳培养基为MS+TDZ 0.5 mg/L+KT 0 mg/L+NAA 0 mg/L;试管苗生根的最佳培养基为MS+NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L。     

药用植物刺五加组织培养及快速繁殖的研究

选用刺五加的茎尖为外植体材料,采用正交试验方法研究了激素对刺五加愈伤组织分化、继代培养、不定芽发生及生根的影响。试验结果表明,刺五加的最佳初分化培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+KT0.8mg/L+NAA0.10~0.15 mg/L,继代芽分化培养基MS+6-BA0.5 mg/L+IAA1 mg/L+IBA0.8 mg/L,生根培养基为1/2MS+IBA0.4 mg/L     

硝酸铵和植物生长调节剂对花烛愈伤诱导和植株再生的影响

以花烛(Anthurium andraeanum Lind.)品种阿拉巴马和塞拉叶片为外植体,研究硝酸铵和植物生长调节剂对花烛愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明,将硝酸铵用量减少至MS配方量的1/4时,阿拉巴马和塞拉叶片愈伤诱导率分别显著提高285.9%和458.5%;叶片愈伤组织诱导的最适培养基为改良MS(1/4NH4NO3)+TDZ 0.4mg/L+2,4-D 1.0mg/L;不定芽分化和试管苗增殖的最适培养基为1/2MS+6-BA 0.2mg/L+KT 0.5mg/L,添加适量生长素(IBA 0.2mg/L)有利于试管苗生长。     

加工番茄遗传转化再生体系的建立

加工番茄种子出芽后7~8 d,子叶剪成约0.2~0.4 cm,0.3~0.5 cm的小块,以MS B5为基本培养基,附加IAA0.2 mg/L分别与0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mg/L的6-BA/ZT/TDZ组合;6-BA2.0 mg/L分别与0.0,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L的IAA/IBA/NAA组合。经诱芽比较,在不同浓度6-BA/ZT/TDZ与0.2mg/LIAA组合中,出芽率最高的培养基为MS ZT1.0 mg/L IAA0.2 mg/L和MS TDZ2.0 mg/L IAA0.2 mg/L。在不同浓度的IAA/IBA/NAA与6-BA2.0 mg/L组合中,IAA明显优于NAA和IBA,筛选出MS 2.0 mg/L6-BA 1.0 mg/LIAA为最佳生芽培养基。以1/2MS添加NAA//BA0.0,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L进行生根比较,再生芽在MS 0.5 mg/L IBA生根培养基上生根最好,并发育成完整的小植株。     

不同培养基及ZT诱导对洋桔梗玻璃化的影响

以洋桔梗叶片为材料,以培养基MS＋6-BA 0．5mg／L＋IBA 0．2mg／L为对照,将在对照培养基上培养的叶盘转接到含不同激素组合（6-BA 0．2—0．5mg,L、IBA 0．05～0．1mg／L、NAA 0．01～0．2mg／L、ZT 0．5～1．0mg／L）的培养基中培养30d;将不同分化时期的愈伤组织每隔3d转接到MS培养基中培养30d,观察洋桔梗不定芽分化情况。结果表明,将已诱导15d的叶盘转接到MS＋6-BA0．3mg／L、MS＋6-BA 0．4mg／L＋IBA 0．05mg／培养基中培养,利于正常不定芽的生长,分化总芽数和正常芽总数、平均每叶盘正常芽数明显高于对照,正常苗率与对照相差不明显。此外,将现芽点6d以前的不同分化程度的愈伤组织接到MS培养基中,则不利于正常不定芽的诱导分化;将现芽点第6d的愈伤组织转接到MS培养基中继续培养,其总分化芽数、正常芽总数、平均每叶盘正常分化芽数均高于对照而正常苗比率与对照相差不明显．显,说明现愈伤后不定芽的分化还继续需要外源激素的参与,以减少不定芽的玻璃化。     

红阳猕猴桃快速繁殖体系的建立

以红阳猕猴桃(ACtinidia chinensis cv.Hongyang)茎段作为外植体进行愈伤组织诱导、不定芽分化和生根培养,建立高技的猕猴桃快速繁殖途径.结果表明,茎段极易产生愈伤组织,在MS+0.8 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA培养基中,愈伤组织诱导所需时间短、出愈率高,不定芽的出芽率高、生长健壮;以1/2 MS为基本培齐基,添加0.5 mg/L IBA对不定芽生根较为有利,生根率达到93.33％.     

委陵菜嫩茎再生体系建立的研究

[目的]建立委陵菜再生体系技术,保护野生资源,实现人工栽培.[方法]以委陵菜嫩茎为材料,用组织培养的方法,进行愈伤组织诱导与分化、试管苗生根、继代增殖、移栽定植的研究.[结果]愈伤组织诱导培养较适宜的培养基为:MS +40 g/L蔗糖+0.3 mg/L6-BA +2.8 mg/L 2,4-D;愈伤组织分化培养的合适培养基为:MS+ 35 g/L蔗糖+0.4 mg/L AgNO3 +0.1 mg/L NAA +0.8 mg/L ZT;不定芽生根培养的较适宜培养基为1/3MS+ 15 g/L蔗糖+0.5 mg,/L ABT+ 0.2 mg/L IBA+ 0.3 mg/L NAA.试管苗移栽成活率为95.1％,定植成活率为97.8％.[结论]建立的再生体系,1株试管苗1年能繁殖23万株试管苗,定植的试管苗保持了野生委陵菜的植物学性状.