免疫亲和层析法纯化发酵液中的核糖基异戊烯基嘌呤

用过碘酸钠氧化法交联核糖基异戊烯基嘌呤和卵清蛋白,并免疫Ｂａｌ．ｂ／ｃ小鼠,鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ＥＬＩＳＡ筛选获得抗核糖基戊烯基嘌呤单克隆抗体,将活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ与单克隆抗体交联剂成免疫亲和色谱柱,发酵液经免疫亲和柱纯化后用高效液相色谱检测,其纯度极高,比较了不同洗脱条件对免疫亲和柱纯化的影响,认为利用免疫亲和柱纯化发酵液具有内源性杂质干扰少的优点,是生物样品预处理的一种有效方     

植物细胞生长周期中内外源细胞激素素的变化

应用细胞同步培养技术、高压液相色谱分析（ＨＰＬＣ）和酶偶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）分析了胡萝卜细胞在悬浮培养时生长分裂周期的变化并对内源激动素类物质（玉米素Ｚ－Ｚｅａｔｉｎ、核糖基玉米素ＺＲ－ｚｅａｔｉｎｒｉｂｏｓｉｄｅ、二氢玉米素ＤＨＺ－ｄｉｈｙｄｒｏｚｅａｔｉｎ、核糖二氢玉米素ＤＨＺＲ０ｄｉｈｙｄｒｏｚｅａｔｉｎｒｉｂｏｓｉｄｅ、异戊烯基核糖基腺漂呤ＩＰ－ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌａｄｅｎｉｎｅ和核糖     

植物细胞生长周期中内外源细胞激动素的变化

应用细胞同步培养技术、高压液相色谱分析（ＨＰＬＣ）和酶偶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）分析了胡萝卜细胞在悬浮培养时生长分裂周期的变化并对内源激动素类物质（玉米素Ｚ－Ｚｅａｔｉｎ、核糖基玉米素ＺＲ－ｚｅａｔｉｎｒｉｂｏｓｉｄｅ、二氢玉米素ＤＨＺ－ｄｉｈｙｄｒｏｚｅａｔｉｎ、核糖二氢玉米素ＤＨＺＲ－ｄｉｈｙｄｒｏｚｅａｔｉｎｒｉｂｏｓｉｄｅ、异戊烯基核糖基腺嘌呤ＩＰ－ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌａｄｅｎｉｎｅ和核糖基异戊烯基腺苷ＩＰＲ－ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌａｄｅｎｉｎｅｒｉｂｏｓｉｄｅ）含量进行定量分析．从用荧光显微技术分析ＤＮＡ含量变化结果看出，附加有激动素０．１×１０－６·Ｌ－１的悬浮液中，胡萝卜细胞的分裂周期为８．５ｈ，比不加外源激素的处理短１ｈ．在无外源激素存在的情况下，细胞分裂期中内源细胞分裂素类物质除ＺＲ之外，其余的Ｚ、ＤＨＺ、ＤＨＺＲ、ＩＰ和ＩＰＲ的含量在分裂的第６．５ｈ均有一个峰值出现，ＺＲ在第４．５和８．５ｈ有峰值出现．外加细胞分裂素的处理中．Ｚ、ｉＰ和ｉＰＲ整个周期无明显含量变化，ＤＨＺ和ＤＨＺＲ在第６．５ｈ出现峰值．ＺＲ在第８．５ｈ时也出现峰值．说明附加细胞激动素可协调Ｚ．ｉＰ和ｉＰＲ的积累，加速利用?     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒提纯病毒粒子免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有稀释法克隆,成功获得了２株ＢＢＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１：６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ ４４．７ｋＤ的外壳蛋白     

黄芪甲苷免疫亲和色谱介质的制备及应用

旨在提出1种新的具有高灵敏度、特异性抗黄芪甲苷(AST)单克隆抗体的纯化方法,从而为制备具有类似活性基团的其他天然化合物的亲和层析树脂方法提供参考。用AST与环氧活化琼脂糖6B(EAS6B)偶联制备的免疫亲和柱从小鼠腹水中纯化抗AST的高敏单克隆抗体(mAbs),与用G-葡聚糖凝胶从小鼠腹水中纯化的抗AST单克隆抗体进行比较,通过间接ELISA(酶联免疫吸附测定)和间接竞争ELISA比较2种方法纯化的单克隆抗体,评价亲和培养基的效用。间接ELISA结果显示,用AST-EAS6B柱纯化的抗AST单克隆抗体的效价略高于用G-葡聚糖凝胶柱纯化的抗体效价;间接竞争ELISA结果显示,用AST-EAS6B柱纯化的抗AST单克隆抗体的结合抑制50%浓度(IC_(50))为0.005μg/mL,用G-葡聚糖凝胶柱纯化的抗AST单克隆抗体的IC_(50)为0.05μg/mL,用AST-EAS6B柱纯化的抗AST单克隆抗体比用G-葡聚糖凝胶柱纯化的抗AST单克隆抗体对AST更具有特异性。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞发校瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ、４ＡＦ１、６ＤＨ及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ６２株单抗牧场卉性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩ     

光合细菌PSB-1对辣椒苗期生长和产量的影响

以分离获得的光合细菌ＰＳＢ－１菌株为材料,经特殊工艺培养后,将获得的培养液喷施于辣椒苗上。结果表明：ＰＳＢ－１发酵液可显著促进辣椒生长和叶片增多。经喷施ＰＳＢ－１发酵液的辣椒苗植于大田后,其产量可提高４．７５％～１５．７７％。     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

免疫亲和柱- 高效液相色谱法测定 生霉玉米中的呕吐毒素

1,目的： 应用免疫亲和柱-高效液相色谱法测定不同生霉含量玉米中的呕吐毒素。2方法：样品经 粉碎后用水溶解,经聚乙二醇水溶液提取,提取液稀释过滤后经过含有呕吐毒素特异性抗体的免疫亲和柱层析 净化,洗脱液采用ZORBAX Eclipse plus-C18 反相色谱柱分离,二极管阵列检测器测定。3 结果： 呕吐毒素在 0.1-1.6μg浓度范围内线性关系良好。线性方程如下：y=60.57901x+0.285970 r=0.99958 。色谱峰面积与含量之 间有良好的线性关系,仪器检出限为0.02168μg/ml,加标回收率为93.2%~95.1%。4结论： 采用免疫亲和柱-高效 液相色谱法对生霉百分比分别为5%,10%,15%,20%,30%,40%,100%的玉米进行呕吐毒素分离检测,发现不同含 量生霉玉米中的呕吐毒素值不同,生霉含量为100%的玉米呕吐毒素含量最高。     

新型壳聚糖疏水色谱填料的制备及应用初步研究

以壳聚糖为载体、以正戊基为配基建立新型疏水色谱填料的合成工艺，研究该色谱填料对牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和假单细胞杆菌脂肪酶（ＰＳＬ）的吸附容量，结果分别为１８．１和２．２ｍｇ／ｇ干重疏水色谱填料。该色谱填料对ＰＳＬ有很好的分离提纯效果，纯度提高３倍左右，收率达５５．３％。     

脱氨再生几丁质凝胶亲和柱层析法纯化溶菌酶

首次采用脱氨再生几丁质凝胶亲和柱层析法直接从鸡蛋清及菜心的茎叶粗提液中纯化了溶菌酶．纯化倍数分别为４２．４倍和３１０．９倍；回收率为７０．２％与６１．０％；每克酶蛋白的活性分别为９９１５３Ｕ和７１１００Ｕ．每克吸附剂对鸡蛋清溶菌酶的活性吸附量为３１２．７Ｕ；蛋白吸附量为１６．１ｍｇ．两种纯化的溶菌酶经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳结果均显示单一条蛋白带．     

抗鸡IgC单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

利用纯化鸡血清ＩｇＣ免疫的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，用ＥＬＩＳＡ间接法和夹心法作阳性抗体检测，经有限稀释法克隆，结果筛选出１株可持续分泌抗鸡ＩｇＣ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株３Ｅ３，其培养上清和诱生Ｂｌａｂ／ｃ小鼠腹水的ＭｃＡｂ效价分别为１：４×１０＾２－１．２８×１０＾４和１：８×１０＾５－１×１０＾１０，经染色体分析可见到两种形态的染色体，该细胞株经体连续     

高聚物型高效液相色谱柱在依替米星发酵液分析中的应用

[目的]建立一种用聚苯乙烯反相色谱柱联用示差检测器高效液相色谱法（HPLC）分析依替米星发酵液的方法。[方法]使用MKF—RP—ETI色谱柱（100．0mm×7．8mm,200．0mm×7．8mm,5μm）,流动相：O．22mol／L醋酸盐缓冲液（pH=6．0）,流速：1ml／min,检测器：示差检测器。[结果]MKF—RP—ETI色谱柱和HPLC—RD法可方便、快速用于分析鉴定依替米星发酵液,依替米星保留时间约为8min。[结论]该方法可方便、快速、高效地用于依替米星发酵液生产、纯化过程中在线检测的分离分析。     

胶束纸色谱法分离和鉴定黄酮类化合物

目的：探讨胶束纸色谱在分离,鉴定黄酮类化合物中的应用。方法：采用高于临界胶束浓度的ＳＤＳ,ＢｚＢｒ水溶液作展开剂通过纸色谱法分离和检测桑色素,杨梅黄素等８种黄酮甙和甙元,并对胶束浓度和有机添加剂影响分离效果作了观察。结果：０。．０１－０．０２ｍｏｌ／Ｌ的ＳＤＳ或ＢｚＢｒ胶束展开体系适宜于分离黄酮甙类,而当展开剂中０．０６ｍｏｌ／Ｌ的ＳＤＳ水溶液与乙酰乙酸乙酯的体积比为１０：１时,黄酮甙元可以得到满     

细胞分裂素与魔芋组织培养官发生研究

在魔芋组织培养过程中，细胞内异戊烯基嘌呤类（ｉＰＡｓ）细胞分裂素含量的上升与不定芽发生中呈正相关，而玉米素类（ＺＲｓ）细胞分裂素的含量变化与器官发生无显著关系。培养基中细胞分裂素类物质的种类和浓度，影响魔芋愈伤组织细胞内ｉＰＡｓ的生物合成，从而影响魔芋愈伤组织的细胞分化，器官发生和植株再生。魔芋愈伤组织的不定芽姓对培养基中ＣＴＫ种类有很强的选择性，适宜的分化培养基为ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／１＋...     

兔出血症病毒主要结构多肽的纯化及免疫保护性试验

人工感染ＲＨＤＶ－ＮＪ株病死兔肝经－５０℃反复冻融,氯仿处理,ＰＥＧ沉淀、差速离心,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ柱层析得纯化病毒,纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＣｕＣｌ２负染色后,切取主要结构多肽ＶＰ１（６４．５ＫＤ）凝胶带,除去ＣｕＣｌ２和ＳＤＳ获得ＶＰ１,高效液相色谱鉴定只有一个蛋白峰,Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,ＨＡ和ＨＩ结果显示纯化ＶＰ１具有良好的抗原表位稳定性。无母源抗体的３月龄兔１     

兔化高免褪黑激素抗血清的制备

运用Ｍａｎｎｉｃｈ反应,将褪黑激素与ＢＳＡ联结起来制备完全抗原,用ＵＶ－２６０紫外仪测定了ＭＬＴ与ＢＳＡ的联结比为１２：１,用此抗原免疫新西兰大耳兔５只,经过６次免疫后,发现抗体效价平均１：１００００（ＥＬＩＳＡ）,将抗血清经Ｎａ２ＳＯ４沉淀,Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－２００过柱层析、收集纯化抗体,用分光光度计７２１ 春蛋白浓度,经５－羟色胺等阻断试验发现抗体特异性较高。     

免疫亲和柱-高效液相色谱荧光检测法测定饲料中的T-2毒素

建立了免疫亲和柱净化-柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测器测定饲饲料中T-2毒素含量的方法。样品经甲醇-水(体积比80:20)提取,通过免疫亲和柱(IAC)净化,以1-蒽腈(1-anthroylnitrilc,1-AN)为衍生化试剂、4-二甲基氨基吡啶(DMAP)为催化利进行衍生,C1 8色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量。结果表明:T-2毒素的线性范围为10～200μg/L,加标回收率为76.9%～92.1%,相对标准偏差(RSD)小于6%。该方法可用于饲料中T-2毒素的测定。     

枸杞中性多糖的糖链结构分析

从枸杞子中分离纯化得到枸杞中性多糖，经气相色谱法和色谱－质谱法分析，该多糖由木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、赤藓糖及少量岩藻糖和山梨糖等８种糖基组成，前５种糖基的摩尔比为１０：１：１：６．７：４．多糖呈分枝结构，主链包括１，４连接的葡萄糖、１，６连接的半乳糖、１，４或１，５连接的木糖，在１，４连接的葡萄糖上６位分枝形成侧链，侧链末端是木糖和半乳糖。此外，尚有含量较高的一种未知连接结构和少量其它连接。