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1.
以含中华蜜蜂王浆抗菌肽Acc-royalisin基因的该蜂头部cDNA文库质粒为模板,用PCR方法扩增出其前体片段,并克隆入表达载体pGEX-4T-2中,在大肠杆菌BL21中与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合进行表达,得到大小为36ku,占细胞总蛋白16.3%,与GST多克隆抗体有免疫反应的表达产物;用割胶回收获得的目的蛋白注射新西兰大白兔,采集血清制备多克隆抗体,该抗体与纯化的GST-Acc-royalisin融合蛋白经ELISA反应显示出较高效价,经Westernblot印迹分析获得特异性条带.这为进一步利用免疫方法检测王浆的防腐性能和Acc-royalisin生物制品质量,以及蜜蜂抗病性奠定了基础.  相似文献   
2.
采用本实验室制备的氯霉素(CAP)单克隆抗体,以包被抗原1:6 000和酶标CAP单抗1:8 000的稀释比例为工作浓度,建立CAP直接竞争ELISA(cdELISA)方法,cdELISA检测灵敏度达到0.1 μg/L.利用xMag异硫氰酸根末端磁粒标记CAP单克隆抗体制备免疫磁珠,用该免疫磁珠富集样品中的CAP.经过乙酸乙酯抽提免疫磁珠表面吸附的CAP,再通过cdELISA检测,可使CAP的检测灵敏度提高50倍,即达到0.002 μg/L.  相似文献   
3.
用过碘酸钠氧化法交联核糖基异戊烯基嘌呤和卵清蛋白,并免疫Bal.b/c小鼠.鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA筛选获得抗核糖基异戊烯基嘌呤单克隆抗体.将活化的Sepharose6B与单克隆抗体交联制成免疫亲和色谱柱.发酵液经免疫亲和柱纯化后用高效液相色谱检测,其纯度极高.比较了不同洗脱条件对免疫亲和柱纯化的影响,认为利用免疫亲和柱纯化发酵液具有内源性杂质干扰少的优点,是生物样品预处理的一种有效方法.  相似文献   
4.
 【目的】制备麦长管蚜单克隆抗体,为进一步研究麦蚜的捕食性天敌种类奠定基础。【方法】应用杂交瘤技术制备单克隆抗体;双抗夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA)鉴定抗体类型及亚类;间接ELISA测定抗体特异性;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot印迹分析确定抗体结合蛋白。【结果】制备出2株高度特异性的麦长管蚜单克隆抗体,分别命名为EGA-1E8和EGA-4H11,分别属于IgM亚类和IgG2b亚类。麦长管蚜抗原由多种多肽组成,其中单克隆抗体EGA-4H11与麦长管蚜抗原54.2 kD的多肽结合。特异性试验表明,这2种抗体不与麦田中其他种类的昆虫和蜘蛛发生交叉反应。【结论】成功地制备了麦长管蚜单克隆抗体,为进一步研究麦蚜的捕食性天敌种类奠定了可靠的基础。  相似文献   
5.
灰飞虱携带的水稻条纹病毒免疫检测   总被引:33,自引:3,他引:30  
利用间接ELISA方法和DIBA方法对采自江苏省不同地区灰飞虱的带毒率进行检测,结果发现各地灰飞虱的带毒率比较高,这是江苏省水稻条纹叶枯病严重发生的主要因素。对两种检测方法比较发现,DIBA方法更快速、实用,也更加灵敏,适合于基层工作人员直接检测灰飞虱携带的病毒,从而为病害的流行预测提供依据。  相似文献   
6.
褐飞虱单克隆抗体的制备及其初步应用   总被引:2,自引:0,他引:2  
应用杂交瘤技术,制备了4株褐飞虱的单克隆抗体,分别命名为3B2、3B11、3H3和4B8,其只与褐飞虱所有虫态发生反应,不与稻田其它主要昆虫和蜘蛛发生交叉反应,具有高度的特异性,应用4B8初步检测浙江大学华家池校区农场稻田蜘蛛对褐飞虱的阳性反应率,其中拟环纹豹蛛,拟水狼蛛和纵条蝇狮的阳性反应率最高,粽管巢蛛,黑肩绿盲蝽次之,狡蛛较低,而八斑鞘腹蛛,跳蛛,肖蛸和食虫瘤胸蛛未检测到阳性反应,拟环纹豹蛛对4B8的阳性反应率与褐飞虱和拟环纹豹蛛种群密度均极显著相关(r=0.612**,r=0.632**)。  相似文献   
7.
单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
利用 2 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒(BBWV)的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ELISA 方法⒚经测定,McAb 最适包被浓度为04 μg/m L,HRPMcAb 最佳工作浓度为1∶2 000,该方法最小检出浓度为016 μg/m L,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 140 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中BBW V 的阳性率达 80% ⒚  相似文献   
8.
cecropins是最早在天蚕中发现的抗菌肽,故被称为天蚕素(cecropin),由31~39个氨基酸残基组成,分子量约为4ku,具有广谱抗菌作用。目前已报道的cecropins有30多种,其中cecropin-P1是Lee等首先从猪小肠中分离得到的(Lee et al.,1989)。cecropin-P1含有31个氨基酸残基,分子量为3339u,不含半胱氨酸(Cys),不能形成分子内二硫键,有强碱性的N端和强疏水性的C端,C端酰胺化,酰胺化的C端对其广谱抗菌作用极为重要。  相似文献   
9.
钩端螺旋体七日热血清型(56610)培养物,经甲醛灭活后免疫BAL B/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得6株阳性杂交瘤,分别定名为1A9、1B8、1F9、2D10、2E4、3E8,其中1A9、1F9、2D10、2E4为特异性抗56610杂交瘤。抑制试验结果表明,多抗血清能够有效地抑制这些特异性单抗,这些特异性单抗被鉴定为IgG1亚类。  相似文献   
10.
酶联免疫吸附试验方法的比较   总被引:3,自引:0,他引:3  
应用白背飞虱单克隆抗体比较了3种酶联免疫吸附试验方法。结果表明:间接酶联免疫吸附试验的灵敏度高于直接酶联免疫吸附试验,分别为0.03125μg蛋白/ml(相当于1/256头成虫)和0.0625μg蛋白/ml(相当于1/128头成虫),而双抗夹心酶联免疫吸附试验无法使用。样品中非目标抗原(捕食者)浓度对检测结果有显著的影响,且对直接酶联免疫吸附试验的影响更大,检测时必须对样品做适当的稀释  相似文献   
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