生防细菌复配对苹果主要病原真菌抑菌活性筛选及其稳定性

采用生长速率法测定4种生防细菌及其复配对5种苹果主要病原菌的抑制效果，并将筛选出的最佳复配生防细菌发酵液进行稳定性测定。结果表明，单一生防细菌发酵液中多粘类芽孢杆菌FS-1206对苹果树腐烂病菌的抑菌效果最好，为78.19%；当多粘类芽孢杆菌FS-1206与解淀粉芽孢杆菌TS-1203复配比例为 2∶1时，其对苹果树腐烂病菌的抑菌率高达86.64%，抑菌效果显著优于单一生防细菌发酵液。稳定性测定结果表明，复配生防细菌（FS-1206∶TS-1203= 2∶1）发酵液在紫外照射、高温和强酸强碱环境条件下，其抑菌活性均具有良好的稳定性。     

无患子粗提液抑菌杀菌作用的研究

[目的]探究无患子粗提物的抑菌杀菌效果.[方法]酶解法提取无患子果皮中的皂苷,并测其皂苷含量.将皂苷粗提液稀释成3种浓度,用这3种浓度的粗提液分别对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和酵母菌进行抑菌试验,测定抑菌率;用无患子皂苷粗提液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌进行杀菌试验,测定杀菌率.[结果]随着无患子粗提液皂苷浓度的提高,其对金黄色葡萄球菌的抑菌率保持25％不变,对其他4种菌的抑菌率均有不同程度的提高,其中对酵母菌的抑菌率高达68.4％;111.9mg/ml的无患子皂苷粗提液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌的杀菌率随着杀菌时间的延长均有不同程度的提高,其中对酵母菌的杀菌率最高,30 min内达100％.     

苹果树腐烂病菌拮抗细菌筛选及鉴定

【目的】筛选对苹果树腐烂病菌具有较高抑菌活性的拮抗细菌,为苹果树腐烂病的生物防治提供理论依据.【方法】采用平板对峙法及生长速率法对分离自苹果树根际土壤和发病枝条的细菌进行筛选,并根据形态学与分子生物学对抑菌活性较高的菌株进行鉴定.【结果】共分离出13株细菌,其中QYTR-2对苹果树腐烂病菌的抑菌率最高,为82%,明显高于其他菌株.菌株QYTR-2不同稀释倍数的发酵滤液对苹果树腐烂病菌均有一定的抑制作用,其中5倍发酵滤液抑菌率最高,达92.23%.结合形态学和分子生物学技术鉴定该菌为嗜麦芽寡氧单胞菌Stenotrophomonas maltophilia.【结论】拮抗细菌QYTR-2(Stenotrophomonas maltophilia)对苹果树腐烂病菌具有良好的抑制作用,研究结果对丰富苹果树腐烂病的生防资源和开发利用生防菌株具有指导意义.     

鬼针草抑菌物质提取及抑菌活性研究

采用正交试验法优化鬼针草抑菌活性成分的提取条件并研究其抑菌活性.结果表明,抑菌活性成分提取的最佳条件:95%乙醇在70℃下提取1次(2 h).鬼针草醇提物抑菌谱较宽,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、水稻纹枯和荔枝疫霉的抑制效果较好,对大肠杆菌、稻瘟菌无抑制效果.对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的MIC分别为12.5、6.25 mg·m L-1,对水稻纹枯、荔枝疫霉的抑菌率为60.4%、31.6%.鬼针草醇提物的抑菌活性具有较好的热稳定性,对紫外光照射稳定,p H 4-8时抑菌效果稳定.     

几种生防细菌对尖孢镰刀菌的抑菌效果及其相互间包容性生长的快速检测

为明确几种生防细菌对茄子枯萎病菌和香蕉枯萎病菌的抑菌效果,采用平板对峙法进行抑菌试验。结果表明,JK2015菌对茄子枯萎病菌和香蕉枯萎病菌的抑菌效果最为明显,抑菌率分别为52.54%和70.45%;而巨大芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌对2种病原真菌均无明显的抑菌效果,抑菌率只有3.48%～7.25%;对2种病原菌的抑菌效果均为:JK2015菌胶冻样芽孢杆菌JK02菌JK01菌枯草芽孢杆菌解淀粉芽孢杆菌。同时,为了明确生防菌之间的生长是否相互影响,采用平板划线共培养,探索出一种快速检测方法,对它们之间包容性做出快速初筛,结果表明,JK01和JK02不能与枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌包容生长,枯草芽孢杆菌不能与胶冻样芽孢杆菌包容生长,而其余菌株间都可以包容生长。这些结果可为微生物混合菌剂及茄子和香蕉专用生物肥料的开发奠定基础。     

解淀粉芽孢杆菌1841的生物相容性和其发酵清液的理化性质测定

【目的】解淀粉芽孢杆菌1841是重要的生防菌,本试验初步摸索了其生物相容性和理化性质,为其制剂产品开发、应用和保存提供一定的理论基础。【方法】采用直接混合法和含药平板法测定助剂和杀菌剂对解淀粉芽孢杆菌1841菌体的影响;采用平皿法测定温度、紫外线、pH和金属离子对解淀粉芽孢杆菌1841发酵清液抑菌活性的影响。【结果】解淀粉芽孢杆菌1841对稻梨孢、核盘菌、灰霉菌、玉米尾孢和立枯丝核菌具有良好的抑菌活性,抑制率可达80%以上;填料硅藻土和膨润土、润湿剂W-2001等、分散剂木质素磺酸钠等以及壳聚糖与解淀粉芽孢杆菌1841相容性较好,可作为其制剂产品开发的助剂;大部分杀菌剂在中等浓度(100～1000 mg/L)或者低浓度(100 mg/L)下,与解淀粉芽孢杆菌1841都具有良好的相容性,可以考虑田间混用。井冈霉素、嘧菌酯、吡唑醚菌酯和咯菌腈可以与解淀粉芽孢杆菌1841开发生物-化学复配的农药产品;发酵清液经过80℃以下、紫外线90 min以下处理,pH3.0～9.0以及K~+、Na~+、Ca~(2+)和Mg~(2+)处理后,其抑菌活性与不处理相当,在其他处理下对其活性具有显著影响,但其相对抑菌活性依然较高。【结论】解淀粉芽孢杆菌1841具有广谱抑菌活性,很好的生物相容性和稳定性,具有开发成微生物农药的潜力。     

三株芽孢杆菌抑菌活性分析及对肉鸡舍空气微生物的影响

【目的】分析2株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）和1株苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的基本特性以及对大肠埃希氏菌（Escherichia.coli,CVCC1570）的抑制活性;分析3株芽孢杆菌复合制剂对肉鸡舍空气大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用,为改善畜舍环境提供基础数据。【方法】对3株芽孢杆菌进行形态学观察、镜检和生长曲线测定,以大肠埃希氏菌（CVCC1570）为指示菌株,采用琼脂扩散法对单一菌株的抑菌特性进行测定,筛选出适宜的抑菌浓度;利用三因子三水平的正交试验设计,筛选出最佳抑菌效果的复合芽孢杆菌组合;鸡舍喷洒试验采用单因子设计,分为3个处理组,每个处理设3个重复,分别为空白对照组,化学消毒剂阳性对照组（苯扎氯铵）,喷洒复合芽孢杆菌菌剂处理组。在肉鸡不同日龄检测鸡舍内大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的变化规律。【结果】3株芽孢杆菌为革兰氏阳性需氧菌。芽孢杆菌SKN01和芽孢杆菌SKN02生长曲线相近,在培养2h开始进入对数生长期。芽孢杆菌SKN03生长较缓慢,进入对数生长期的时间相对较长。单一菌株对大肠埃希氏菌有效抑菌浓度均为108CFU•mL-1。经正交试验测定,3株芽孢杆菌复合菌液最佳抑菌组合为4×108 CFU•mL-1、4×108 CFU•mL-1、6×108 CFU•mL-1。最佳组合复合芽孢杆菌喷洒鸡舍,能够有效抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长,在肉鸡生长后期复合制剂的抑菌效果明显。【结论】3株芽孢杆菌能够有效抑制大肠埃希氏菌,同时复合菌液能够有效减少鸡舍有害微生物的数量,起到改善鸡舍环境的作用。     

菊迪基氏菌生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM抑菌物质防治效果评价及药剂筛选

采用单因素试验方法优化生防菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D2WM抑菌物质的提取效率,并对抑菌物质粗提取的储藏特性展开研究,同时利用市售药剂对菊迪基氏菌(Dickeya chrysanthemi)进行室内药剂筛选,对比生防菌剂与市售药剂的防治效果。结果表明,通过单因素优化提取生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM中的抑菌物质,发现最佳提取溶剂为正丁醇,有机溶剂与发酵液体积比为1∶7、提取时间为0.5 h;抑菌物质具有良好的热稳定性和紫外光照稳定性,在处理温度达100℃,紫外光照射12 h时,抑菌效果均没有显著性下降,抑菌圈仍有23 mm;当抑菌物质储存180 d后,抑菌圈大小仍有16.33 mm。生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM粗提物对黑腐果胶杆菌、胡萝卜软腐果胶杆菌、菊迪基氏菌、丁香假单胞菌和黄单胞菌等植物病原菌均有良好的抑菌效果。测定的19种药剂中对菊迪基氏菌有良好抑制作用的仅有新田秀才6号、中生菌素、噻霉酮和氯溴异氰尿酸4种;其中,以生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM粗提物作为对照药剂,发现其抑菌效果高于噻霉酮和氯溴异氰尿酸。     

解淀粉芽孢杆菌抑菌活性初步研究

为了进一步分离纯化抑菌蛋白和脂肽类物质,促进拮抗菌的开发和利用,选取2株对多种植物病原真菌具有良好拮抗作用的解淀粉芽孢杆菌,利用硫酸铵沉淀法粗提2株菌株的抑菌蛋白,酸沉淀法粗提脂态类抑菌物质,分别测定粗提物对多种植物病原真菌的抑制效果。初步检测2株菌株是否具有产纤维素酶、蛋白酶和嗜铁素活性。结果表明:BQD1菌株20%~30%的蛋白粗提液对玉米大斑病菌拮抗作用最强,抑菌直径达31.48mm。TY菌株30%~40%的蛋白粗提液对玉米大斑病菌抑菌直径最高达34.20mm。2株菌株脂态类粗提液对靶标病原菌株的拮抗作用均高于其发酵液,且均可产生纤维素酶、蛋白酶和嗜铁素。     

8种园林草本植物挥发性物质的抑菌效果研究

【目的】比较我国北方地区常见的8种园林绿化草本花卉植物叶片挥发性物质的抑菌效果,为园林绿化中植物的合理配置提供依据。【方法】采用皿内试验,测定8种供试植物(一串红、矮牵牛、鸡冠花Ⅰ、鸡冠花Ⅱ、万寿菊、彩叶草、羽衣甘蓝、紫叶酢浆草)的1 g和2 g整叶、碎叶,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及酵母菌的抑菌率,比较其抑菌效果的差异。【结果】所有供试植物叶片的挥发性物质均具有一定的抑菌活性,一般碎叶的抑菌率大于相同质量的整叶,2 g叶片的抑菌率大于1 g叶片;8种植物2 g碎叶对大肠杆菌的抑菌率为14.84%~66.41%,其中彩叶草、羽衣甘蓝和矮牵牛的抑菌率超过50%;对金黄色葡萄球菌的抑菌率为23.93%~54.70%,其中仅彩叶草的抑菌率超过了50%;对枯草芽孢杆菌的抑菌率为11.82%~65.59%,其中彩叶草、一串红和万寿菊的抑菌率超过了50%;对酵母菌的抑菌率为34.91%~74.52%,其中一串红、矮牵牛、羽衣甘蓝和彩叶草的抑菌率超过了50%,而鸡冠花Ⅱ的挥发性物质对酵母菌无抑制作用。【结论】彩叶草、羽衣甘蓝、矮牵牛、一串红具有较强的抗菌活性,是较为理想的城市生态保健型绿化模式栽培植物。     

牛蛙皮肤抗菌肽Ranalexin 基因的原核表达及其抑菌活性

    为了验证重组抗菌肽Ranalexin的抑菌活性,提取牛蛙皮肤组织总RNA,经RT-PCR 扩增抗菌肽基因ranalexin,克隆测序后,将该基因插入pGEX-3X融合表达载体,进行原核表达,通过改变IPTG剂量、培养液pH值、诱导表达温度和诱导时间优化表达条件,并采用谷胱甘肽氧化/还原系统对重组蛋白进行复性,用琼脂扩散法测定其体外抑菌活性.结果显示,扩增获得的牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 大小为201 bp,其序列与GenBank公布序列同源性达99.57%;正确构建了pGEX-3X-Ranalexin表达载体,最佳表达条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L-1、诱导时间5～6 h;表达产物的分子质量约为34 kDa,并以包涵体的形式表达,经复性纯化后该重组蛋白对金黄色葡萄球菌具有明显的体外抑菌活性.说明牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 的原核表达载体构建成功,并获得了具有抑菌活性的重组抗菌肽GST-Ranalexin.     

生熟大蒜抑菌作用的研究

采用平板菌落计数法,通过计算抑菌率,比较了不同浓度的生熟大蒜汁对常见的3种细菌和酵母菌的抑制作用。结果表明,大蒜对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌均具有一定的抑制作用。熟蒜与生蒜的抑菌率差异达到了极显著,即生蒜的抑菌作用极显著高于熟蒜,而熟蒜也具有一定的抑菌作用;不同浓度生蒜汁的抑菌率差异极显著,即高浓度生蒜汁的抑菌作用比低浓度抑菌作用强。     

紫茎泽兰抑制马铃薯晚疫病菌的初步研究

将紫茎泽兰的乙醇提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取物对马铃薯晚疫病菌进行抑菌试验.结果表明,石油醚萃取物抑菌效果最好,抑菌率达100%.进一步采用不同梯度的混合有机溶剂对石油醚萃取物进行硅胶柱层析,抑菌试验结果表明,用石油醚:乙酸乙酯(8:1)、石油醚:乙酸乙酯(4:1)和甲醇试剂洗脱得到的有效物质,其抑菌效果最好,抑菌率达100%.     

Interference with the antibacterial action of streptomycin by reducing agents

The antibacterial activity of streptomycin in infusion agar plate cultures of E. coli and other bacteria is diminished by anaerobic incubation. The bacteriostatic activity of this antibiotic for E. coli is reduced in the presence of cysteine, sodium thioglycollate, stannous chloride, sodium bisulfite, sodium hydrosulfite, sodium formate, and sodium thiosulfate. Cysteine was the most active of the agents tested. Further investigation is necessary to determine the nature of this interference. It is possible that this phenomenon is related to the mode of action of streptomycin.     

水杉种子提取物抑菌机理研究

研究了水杉种子提取物的抑菌机理。方法:测定加入不同抑菌剂后的大肠杆菌液中还原糖含量、蛋白质含量以及电导率的变化。结果:水杉种子挥发油、总黄酮及提取物都具有一定的抑菌效果,抑菌效果随着浓度的增加显著提高,使大肠杆菌菌液的还原糖含量升高、蛋白质含量升高、电导率明显提高,其中以提取物的作用效果相对显著。结论:水杉种子提取物抑菌效果优于水杉种子挥发油、总黄酮,在天然产物抑菌剂开发方面前景广阔。     

重组家蝇抗菌肽Des-HF在酵母中的表达及对金黄色葡萄球菌的抗菌活性

参考家蝇防御素抗菌肽基因序列(AY260152) 设计4条引物,用降落PCR方法获得家蝇防御素抗菌肽成熟肽基因.将基因克隆人酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC-Des-HF,转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX) 启动子调控下,相对分子质量约5 000的重组抗菌肽Des-HF获得表达.抗菌试验结果表明,该表达产物对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性.以小鼠为试验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,试验结果表明,240μg重组Des-HF可分别保护小鼠免受10倍最小致死浓度的金黄色葡萄球菌(ATCC26003) 和Cowan I的攻击.     

淫羊藿甙的提取及抑菌作用

以淫羊藿甙的含量为指标,采用正交设计试验对淫羊藿甙的提取工艺优化,并研究了淫羊藿甙的抑菌作用。结果表明：影响提取效率的因素按影响大小依次为提取次数＞乙醚的用量＞提取时间。最佳的提取工艺为淫羊藿与乙醚按1：10(g/ml)投料,回流反复提取4次,每次1．5h。淫羊藿甙对常见的几种食品污染菌均有一定的抑制作用,且淫羊藿甙经瞬时高温处理后,仍具有较强的抑菌作用。另外,对黑曲霉的最低抑菌浓度为0．23%,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0．12%,对枯草杆菌、青霉、酵母菌的最低抑菌浓度均为0．05%。     

微生态制剂中抑菌物质的分析

本文以一种市售微生态制剂为试材,对其产生的抑菌活性物质的生化性质做了研究,发现该抑菌物质显示活性的ｐＨ范围为４．０～６．０,ｐＨ值变化对其活性影响较大,ｐＨ值为７．０时活性全部消失;该活性物质对热不敏感,１２１℃处理３０ｍｉｎ后,其活性无明显变化;紫外光照射也不能使它失活;随发酵时间的延长,发酵液中的抑菌活性物质逐渐增加。根据其生化性质可以判断该抑菌物质是一种分子量较小,结构简单的多肽,具有广谱抑     

乌桕叶提取物抑菌活性研究

采用生物活性追踪法,以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus G+)为供试菌,对乌桕(Sapium sebiferum)叶提取物的抑菌活性进行探讨。结果表明:乌桕叶不同溶剂的提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性有很大区别,乙醇提取物的抑菌活性最强;进一步的研究表明:乌桕叶乙醇提取物之乙酸乙酯可溶部抑菌活性最强,乙酸乙酯可溶部经柱层析分离,所得流分皆无明显抑菌活性,各成分间存在协同作用。     

荸荠皮中黄酮类物质的提取及抑菌特性研究

研究了乙醇浓度、提取温度、料液比和提取时间对荸荠皮中黄酮类物质提取得率的影响,并通过正交试验优化了提取荸荠中黄酮类化合物的最佳工艺条件。结果表明,当乙醇浓度60%、提取温度70℃、料液比1∶50、浸提时间3.5 h,从荸荠皮中提取黄酮类物质的得率为1.242%。分别测定荸荠皮中黄酮类物质对大肠杆菌、荧光假单孢菌、蜡叶芽枝霉、酵母菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果表明:从荸荠皮中提取出的黄酮类化合物对于大肠杆菌、荧光假单孢菌、酵母菌有抑制作用;而对腊叶芽枝霉无抑制作用。