菊迪基氏菌生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM抑菌物质防治效果评价及药剂筛选

采用单因素试验方法优化生防菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D2WM抑菌物质的提取效率,并对抑菌物质粗提取的储藏特性展开研究,同时利用市售药剂对菊迪基氏菌(Dickeya chrysanthemi)进行室内药剂筛选,对比生防菌剂与市售药剂的防治效果。结果表明,通过单因素优化提取生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM中的抑菌物质,发现最佳提取溶剂为正丁醇,有机溶剂与发酵液体积比为1∶7、提取时间为0.5 h;抑菌物质具有良好的热稳定性和紫外光照稳定性,在处理温度达100℃,紫外光照射12 h时,抑菌效果均没有显著性下降,抑菌圈仍有23 mm;当抑菌物质储存180 d后,抑菌圈大小仍有16.33 mm。生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM粗提物对黑腐果胶杆菌、胡萝卜软腐果胶杆菌、菊迪基氏菌、丁香假单胞菌和黄单胞菌等植物病原菌均有良好的抑菌效果。测定的19种药剂中对菊迪基氏菌有良好抑制作用的仅有新田秀才6号、中生菌素、噻霉酮和氯溴异氰尿酸4种;其中,以生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM粗提物作为对照药剂,发现其抑菌效果高于噻霉酮和氯溴异氰尿酸。     

基于16S-rDNA序列的核桃细菌性疫病病原菌遗传多态性分析

核桃细菌性疫病(Xanthomonas arboricola pv.juglandis)是世界范围内核桃产区最主要的细菌病害,对其病原菌16S-rDNA的序列进行分析,为阐明其遗传多样性提供参考。本研究从湖北省保康县和丹江口市多个核桃园采集病样,对不同核桃病组织样进行分离纯化,得到77个病原菌类似菌株,对部分菌株进行了接种和分子鉴定。用通用引物27F和1492R对其中有代表性的22株进行16S-rDNA的PCR扩增和测序。用软件MEGA7.0对所有测序结果进行遗传发育树分析,菌株之间平均遗传距离为0.244。用3种限制性内切酶MspI、AfeI和HinfI对16S-rDNA的PCR产物进行酶切,酶切结果用软件NTSYSpc2.1进行聚类分析。所有菌株之间相似系数大于52%,在76%的相似水平,可以将22个菌株划分为6个类群。用软件ApE对所有序列进行同样的3个酶切,RFLP分析结果与试验酶切结果相似。不同方法构建的聚类和发育树分析结果表明,湖北省不同地理来源和病组织的菌株存在一定的遗传多态性。     

不同样品前处理对转基因棉Bt蛋白含量测定的影响

[目的]寻找一种稳定、准确、灵敏度高的检测转Bt植物中Bt杀虫蛋白的方法。[方法]比较几种ELISA方法检测Bt杀虫蛋白的效果,并就样品前处理方式以及温育时间、显色时间等影响因子进行分析。[结果]自制抗体法较试剂盒更为灵敏,其同一时期同一组织的Bt蛋白含量显著高于试剂盒,但不同方法对Bt蛋白含量的检测结果在时空表达变化的趋势上基本一致。样品在液氮研磨后抽提5或8 h,对检测结果影响较小,差异未达显著水平;匀浆机研磨过滤后离心与否,对检测结果影响较小。从样品前处理方式看,匀浆机较液氮研磨对样品组织蛋白的萃取效率更高,其检测结果显著高于液氮研磨处理的样品,差异达显著水平。温育时间和显色时间的延长会增加样品的吸光值,对蛋白含量检测值有一定影响,但差异不显著。[结论]不同样品前处理方式对转基因棉Bt蛋白含量测定存在显著影响。     

省沽油叶枯病病原菌的分离鉴定及药剂筛选试验

【目的】在孝感市农科院试验园发现一种引起省沽油叶枯病的新病害，明确了该病害的病原物和 防治药剂。【方法】通过对病原菌分离培养、致病性测定、形态学观察、分子生物学鉴定、脂肪酸成分辅助分 析及其室内防治药剂筛选进行初步研究。【结果】该病害是由互隔交链孢霉（Alternaria alternate）真菌引起的， 该病原菌菌落为青灰色，分生孢子串联成长链状，大小为 3.5~15.8 μm×7.6~46.5 μm，有 2~10 个横隔膜和 0~3 个纵斜隔膜。且接种病原菌 14 d 后叶片的症状与田间发病植物相似，再次从接种后发病叶片重新分离出病原真 菌，分子鉴定结果显示分离出的病原菌与接种真菌一致。在供试药剂中，戊唑 ? 咪鲜胺抑菌效果最好，EC50 最低， 为 0.4004 μg/mL，在药剂包装推荐使用浓度基础上再稀释 5 000 倍，仍有抑菌作用，抑菌率达 42.8%。其次是烯 酰 ? 咪鲜胺、福 ? 福锌和三环 ? 氟环唑，EC50 分别为 1.4619、1.756、6.0559 μg/mL。【结论】首次发现引起省沽 油叶枯病的病原物为互格交链孢霉（Alternaria alternate）真菌，在供试药剂中戊唑 ? 咪鲜胺抑菌效果最好。     

两阶段调控优化保加利亚乳杆菌合成γ-氨基丁酸

保加利亚乳杆菌ATCC11842是制备富含γ-氨基丁酸(GABA)发酵饲料的优良益生菌。菌株生长的最佳初始pH为6.0,最佳温度为35℃。GABA生物合成的最佳pH为8.0,最佳温度为40℃。两阶段发酵调控保加利亚乳杆菌ATCC11842生产GABA,GABA的产量达到5.98g/L,优化后GABA的产量比优化前提高了153.39%。研究表明,两阶段分开控制菌株生长和GABA合成的pH和温度,能显著提高GABA的产量。该方法为用保加利亚乳杆菌ATCC11842生产富含γ-氨基丁酸的发酵饲料提供了科学依据。     

一株红椒软腐病病原菌的分离鉴定及致病性研究

从湖北孝感地区红椒软腐病样中筛选分离获得1株软腐病原菌HBEU-9,在实验室条件下能快速侵染健康红椒组织,并能引起蔬菜田种植的红椒软腐病症发生。进一步对比分析该株病原菌对青椒、莴苣、土豆、萝卜、瓠瓜、白菜的致病性,发现HBEU-9是一株对常见蔬菜具有广谱致病性及致病能力强的软腐病原菌。对该菌株进行生理生化和分子鉴定,依据病原菌的形态特征,并结合其16SrDNA序列分析,将病原菌鉴定为菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi,Ech)。采用抗生素对该病原菌进行拮抗作用分析,结果表明,相较其他抗生素,庆大霉素即使在较低浓度60μg·mL~(-1)时抗菌效果可达最佳。     

白睡莲黑斑病菌的生物学特性及室内防治药剂筛选

从白睡莲黑斑病叶上分离获得1株真菌SL-1512,对其完成致病性测定,依据病原菌形态特征结合rDNA-ITS序列分析,将其鉴定为草茎点霉(Phoma herbarum);为明确该病原菌的生物学特性和最佳的室内抑菌药剂,对不同条件下病原菌菌丝的生长情况展开分析和进行室内药剂平板筛选。结果表明,马铃薯葡萄糖培养基(PDA)和马铃薯蔗糖培养基(PSA)均适合该菌株的生长,碳源和氮源以葡萄糖和蛋白胨较适宜,生长适温为28℃,致死温度为55℃,在pH值4~10条件下均生长良好,其最适p H值为5~7,通气及光照对草茎点霉菌丝生长均无显著性影响;在供试的3种药剂中,代森锰锌抑菌效果最好,在质量浓度1 000 mg/L时相对抑菌率为97.1%,EC50为1.2 mg/L。     

几种植物浸提物对5株细菌的体外抑制作用研究

[目的]为了寻找对核桃细菌性疫病及其他细菌有潜在防治作用的天然植物产物.[方法]用滤纸片扩散法,对15种植物的3种溶剂浸提物的抑菌作用进行了室内平板筛选.[结果]除了广玉兰和香蒲之外,其他13种植物叶片浸提物对供试的5个菌株都表现出一定程度的抑菌作用.其中七叶树叶水浸提物对枯草芽孢杆菌XHE8的抑制作用最强,抑菌圈直径达(31.3±3.9) mm,与对照直径之比达5.0以上.接骨草对5个菌株中的4个都表现出明显的抑制作用,麦冬和吉祥草对其中的3个菌株表现出明显抑制作用,它们与对照直径之比都大于1.5.七叶树叶浸提物对细菌有十分显著的抑制作用,有进一步研究和开发的潜力.[结论]研究结果为进一步筛选有效成分及抑菌机理研究奠定了基础.     

一株软腐病拮抗真菌的鉴定及生物学特性研究

以从白菜软腐病根部土壤分离获得的1株能拮抗细菌性软腐病的拮抗真菌为试材,以平板对峙培养其抑菌圈达(37.7±2.2)mm,白菜离体叶片防效可达75%,依据形态特征结合rDNA-ITS序列分析,将获得的拮抗真菌鉴定为草茎点霉,并命名为Phoma herbarum F217-1,并研究了其生物学特性。结果表明:该菌株在马铃薯蔗糖培养基(PSA)上生长最佳,碳源和氮源以葡萄糖和硝酸钠较适宜,生长适温为28℃,致死温度为55℃,在pH 3~10条件下均生长良好,其最适pH 5~8,通气条件对草茎点霉菌丝生长均无明显影响,但光照24h条件下菌丝生长较差。     

1株油茶病害拮抗真菌的鉴定、生物学特性及拮抗作用研究

为了给油茶病害的生物防治提供科学依据,从油茶根部土壤分离获得1株能拮抗油茶主要病害的真菌F217-3。依据该菌株的形态特征,并结合全自动微生物鉴定系统及r DNA-ITS序列分析,将其鉴定为草酸青霉(Penicilium oxalicum)。对其生物学特性研究结果表明:该菌株在查氏培养基上生长最佳,碳源和氮源分别以蔗糖和尿素最适宜,生长适温为28℃,致死温度为65℃,在p H值为3~10条件下均生长良好,其中最适p H值是4~7,通气与否对菌丝生长无明显影响,但光照24 h条件下菌丝生长较差。平板对峙试验结果表明,F217-3对油茶炭疽病菌(C.nicotianae)、油茶软腐病菌(A.camellia)、黑斑病菌(A.alternate)和溃疡病菌(B.dothidea)的抑菌率均达到90%以上,可抑制油茶胶孢炭疽病菌、黑斑病菌分生孢子产生,抑制或致畸油茶炭疽病菌、溃疡病菌和叶斑病菌菌丝,是一株具有广谱拮抗作用的生防菌株。