抗苹果树腐烂病解淀粉芽孢杆菌TS-1203的抑菌活性物质稳定性及抑菌谱测定

【目的】研究将抗苹果树腐烂病解淀粉芽孢杆菌TS-1203开发成高效低毒生防制剂的潜力.【方法】采用生长速率法测定解淀粉芽孢杆菌TS-1203的生长曲线和抑菌活性物质稳定性.【结果】解淀粉芽孢杆菌TS-1203生长曲线呈"S"型,13h后进入对数生长,43h后趋于稳定期;物理因素光照、温度与紫外照射对抑菌活性物质影响不大,只有当温度与紫外照射时间分别为100℃、60s时,其粗提液对苹果树腐烂病菌(Valsa mail)抑菌率显著下降,与对照达到显著差异水平(P0.05);化学因素中,只有强酸强碱,金属离子为Mg~(2+)时,其抑菌率显著下降,与对照达到显著差异(P0.05);不同饱和度硫酸铵对粗提液抑菌率影响也不明显;粗提液抑菌谱测定发现其对多种病原菌有抑制作用,其中对立枯丝核菌和链格孢抑菌率均达80%以上.【结论】解淀粉芽孢杆菌TS-1203粗提液有良好的稳定性,且抑菌谱广.     

苹果树腐烂病菌拮抗细菌筛选及鉴定

【目的】筛选对苹果树腐烂病菌具有较高抑菌活性的拮抗细菌,为苹果树腐烂病的生物防治提供理论依据.【方法】采用平板对峙法及生长速率法对分离自苹果树根际土壤和发病枝条的细菌进行筛选,并根据形态学与分子生物学对抑菌活性较高的菌株进行鉴定.【结果】共分离出13株细菌,其中QYTR-2对苹果树腐烂病菌的抑菌率最高,为82%,明显高于其他菌株.菌株QYTR-2不同稀释倍数的发酵滤液对苹果树腐烂病菌均有一定的抑制作用,其中5倍发酵滤液抑菌率最高,达92.23%.结合形态学和分子生物学技术鉴定该菌为嗜麦芽寡氧单胞菌Stenotrophomonas maltophilia.【结论】拮抗细菌QYTR-2(Stenotrophomonas maltophilia)对苹果树腐烂病菌具有良好的抑制作用,研究结果对丰富苹果树腐烂病的生防资源和开发利用生防菌株具有指导意义.     

多粘类芽孢杆菌TC35的鉴定及对辣椒疫病的田间防效

[目的]鉴定生防菌株TC35,评价其对辣椒疫病的防治效果。[方法]克隆gyr B基因序列鉴定生防菌种类,采用对峙培养法测定抑菌谱,通过田间药效试验研究其防治效果。[结果]生防菌TC35鉴定为多粘类芽孢杆菌,与辣椒疫霉的抑菌带为22 mm,对辣椒疫病的防治效果为84.3%~92.1%。[结论]多粘类芽孢杆菌TC35发酵液对辣椒疫病有良好的防治效果,可应用于辣椒疫病的防治。     

几种生防细菌对尖孢镰刀菌的抑菌效果及其相互间包容性生长的快速检测

为明确几种生防细菌对茄子枯萎病菌和香蕉枯萎病菌的抑菌效果,采用平板对峙法进行抑菌试验。结果表明,JK2015菌对茄子枯萎病菌和香蕉枯萎病菌的抑菌效果最为明显,抑菌率分别为52.54%和70.45%;而巨大芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌对2种病原真菌均无明显的抑菌效果,抑菌率只有3.48%～7.25%;对2种病原菌的抑菌效果均为:JK2015菌胶冻样芽孢杆菌JK02菌JK01菌枯草芽孢杆菌解淀粉芽孢杆菌。同时,为了明确生防菌之间的生长是否相互影响,采用平板划线共培养,探索出一种快速检测方法,对它们之间包容性做出快速初筛,结果表明,JK01和JK02不能与枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌包容生长,枯草芽孢杆菌不能与胶冻样芽孢杆菌包容生长,而其余菌株间都可以包容生长。这些结果可为微生物混合菌剂及茄子和香蕉专用生物肥料的开发奠定基础。     

辣椒果实胎座中生防细菌对白绢病的防效

从辣椒果实胎座中分离出60株内生细菌,平皿对峙培养发现13株细菌对辣椒白绢病菌(Sclerotium rolfsii Sacc.)有拮抗作用,其中6株对白绢病抑制率较高的生防菌对辣椒疫病(Phytophthora capsici)和辣椒炭疽病(Colletotrichum capsici)病原菌也有抑菌活性。16Sr RNA鉴定结果表明,菌株G242和T443为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),菌株YZ12、G241、T151、T442为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。以单一菌株或菌株复配进行盆栽试验,结果 G241和T443复配后对辣椒白绢病的防效达到88.41%,高于单一菌株G241(29.14%)和T443(38.16%)的防效。     

多粘类芽孢杆菌的固态发酵工艺及其对水稻恶苗病的防治作用

多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa) CH-23是一株分离自水稻根际的水稻恶苗病生防细菌。为制备菌数高、稳定性好、生防效果好的微生物菌剂,本研究采用单因素及响应面试验对CH-23菌株固态发酵条件进行了优化,并通过盆栽试验对其生防效果进行了验证。结果表明,固态发酵培养基的最佳组成为以麸皮为基础原料,添加玉米粉15.20%、蛋白胨1.59%、硫酸锌0.05%、硫酸镁0.15%、硫酸锰0.09%、磷酸氢二钾0.10%;最佳培养条件为初始含水量55%,初始pH 7.5,发酵温度33℃,接种量10%。在此条件下,多粘类芽孢杆菌活菌数和芽孢生成率分别可达4.39×10~(10)cfu/g和89.86%。固态发酵菌剂对水稻恶苗病具有较好的防治效果,生防指数高达68.35%,可用作生防菌剂。本研究可为多粘类芽孢杆菌菌剂的工业化生产和在水稻恶苗病防治中的应用提供试验依据。     

拮抗放线菌ZZ-9菌株发酵液的抑菌谱及稳定性测定

为探究拮抗放线菌ZZ-9(Streptomyces rochei)菌株发酵液的抑菌谱,并明确传代培养、温度、光照、pH及紫外线等理化因素对发酵液稳定性的影响。以15种植物病原真菌为供试菌,采用菌丝生长速率法测定发酵液的抑菌谱,并以苹果树腐烂病菌(Cytosporasp.)为指示菌,测定不同条件下发酵液的稳定性。抑菌谱结果表明:ZZ-9菌株发酵液对供试的15种病原真菌均具有不同程度的抑制作用,其中对苹果树腐烂病菌和立枯丝核菌抑制效果最好,生长抑制率可达96%以上,且效果持久;而对苹果轮纹病菌、蚕豆褐斑病菌、月季叶霉病菌等抑制效果较差,抑制率在27%以下。稳定性试验结果表明:菌株传接6代时,活性稳定,从第7代开始菌株活性下降显著;发酵液耐高温,对强酸强碱处理、可见光及紫外线照射均有较好的稳定性;且在4℃及室温(20~25℃)下可贮藏至少30d而保持其抑菌活性几乎不变。因此,拮抗放线菌ZZ-9菌株次生代谢产物具有较广谱的抑菌活性和较强的稳定性,具有开发成微生物农药的潜力。     

侧孢短芽孢杆菌B8发酵液中抑菌物质理化性质研究

从烟草根际土壤中分离到一株生防菌侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)B8,其发酵液对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的抑菌圈直径可达到63 mm.为了明确生防菌株B8发酵液中抑菌物质的理化性质,对发酵液的稳定性进行了测定.结果...     

4种生防菌对芒果细菌性黑斑病的田间防效

采用平板对峙法对4种生防菌进行抑菌效果测定,结果表明,荧光假单胞菌、蜡质芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌和绿针假单胞菌等4种生防菌对芒果细菌性黑斑病菌有较好的抑菌效果,抑菌圈直径分别为26.51mm、24.12mm、23.78mm和20.32mm。将4种生防菌进行田间试验,田间试验结果表明,荧光假单胞菌的效果最好,平均防效达到64.04%;其次是甲基营养型芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌和绿针假单胞菌,平均防效为62.84%、60.80%和60.13%。     

芽孢杆菌抑制玉米茎腐病菌禾谷镰孢菌和拟轮枝镰孢菌的研究进展

玉米茎腐病是由一种或多种真菌、细菌单独或共同侵染引起玉米根腐、茎腐、鞘腐以及穗腐等症状的世界性顽疾,部分病原还能产生真菌毒素,严重影响玉米的产量和质量。芽孢杆菌(Bacillus spp.)是已知的最具潜力的生防菌之一,且在自然界中分布十分广泛。深入了解生防芽孢杆菌的抗菌活性物质及抑菌机制,对玉米茎腐病的绿色防控具有重大意义。本文重点阐述对玉米茎腐病具有生防作用的芽孢杆菌种类、防效、防控机制,及相关混合菌剂的应用现状。生防芽孢杆菌菌体悬液、发酵液和无菌发酵液对病原菌均具有一定的抑菌效果。其中,甲基营养型芽孢杆菌TA-1的发酵液防效最佳,且对玉米具有促生长作用;蜡样芽胞杆菌B25菌体悬液浸种后显著降低了鲜玉米粒中伏马菌素的含量;贝莱斯芽孢杆菌BV23对玉米多种病原均有抑制作用;在室内及大田中解淀粉芽孢杆菌B9601-Y2发酵液均较菌体悬液和无菌发酵液的抑制效果好。多数芽孢杆菌产生的脂肽类抗菌物质能破坏细胞膜和细胞壁的完整性,导致禾谷镰孢菌和拟轮枝镰孢菌菌丝畸形、顶端囊泡化,细胞膜通透性增强,细胞质渗漏,从而抑制病原菌菌丝生长、孢子产生以及孢子萌发;此外,脂肽类活性物质还能使病原菌DNA二...     

马铃薯黑痣病菌拮抗细菌的筛选及鉴定

为分离筛选出对马铃薯黑痣病菌有较强拮抗作用的生防菌，采用平板对峙筛选拮抗细菌，盆栽试验测定其防治效果，通过形态特征、生理生化特性及16S rRNA基因序列鉴定生防细菌。结果表明，通过筛选获得1株有明显拮抗效果的细菌KSD17，菌株平板对病菌抑菌率高达78.91%。该菌株具有产纤维素酶、蛋白酶、β-1,3-葡聚糖酶能力，盆栽防效为66.17%，且对马铃薯植株株高和匍匐茎数均有提高，分别增加了9.05%和22.0%。菌落呈不透明乳白色，无皱褶，粘稠，无色素产生，边缘不规则，结合16S rRNA基因序列和生理生化分析，将其鉴定为多粘类芽孢杆菌。拮抗菌株KSD17是具有较强生防潜能的菌株，对防治马铃薯黑痣病生物菌剂的开发具有良好的前景。     

筛选和利用枯草芽孢杆菌防治梨轮纹病

从南京、高邮和仪征3地梨园采集土壤、病果、病叶和健叶样品共60份,分离筛选到527株细菌分离物,从中挑取与枯草芽孢杆菌目标菌落相似的菌株进行平板抑菌试验.结果表明:24株拮抗细菌对梨轮纹病菌菌丝生长有明显的抑制作用,抑菌带宽在10 mm以上;108株拮抗细菌对梨轮纹病菌的抑菌带宽在6～10 mm.选取抑制效果中等和较强的132株细菌进行室内梨果的活体生防试验,结果表明:在24株平板抑制效果较强的菌株中有18株防效在40%以上,6株防效为20%～40%;108株抑制效果中等的菌株中有3株防效在40%以上,100株防效为20%～40%,5株防效在20%以下.通过形态特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析,初步鉴定出室内活体防效在40%以上的21株细菌为枯草芽孢杆菌.     

两种生防制剂对食用菌杂菌的抑制作用

利用生长速率法和悬滴法,测得生防药剂多粘类芽孢杆菌剂和枯草芽孢杆菌剂对食用菌常染杂菌脉孢霉和青霉菌丝的生长速率和孢子萌发的抑制效果。试验结果显示,两种生防制剂对脉孢霉和青霉有一定的抑制作用,其中,多粘类芽孢杆菌药剂对脉孢霉和青霉孢子萌发的抑制作用明显,抑制率分别为90.44%和65.04%;而枯草芽孢杆菌药剂对脉孢霉和青霉的菌丝生长的抑制效果在处理中表现为最高,抑制率分别为36.29%和46.66%。因此,多粘类芽孢杆菌药剂可以作为杂菌孢子抑制剂,枯草芽孢杆菌药剂可以作为杂菌菌丝生长的抑制剂。     

植物枯萎病拮抗细菌KL-1菌株的分离及鉴定

[目的]筛选、鉴定植物枯萎病菌拮抗细菌,为植物枯萎病生防制剂的研究奠定基础。[方法]采用对峙培养法筛选对植物枯萎病菌具有良好抑制作用的生防细菌,通过Biolog细菌自动鉴定系统和16SrDNA序列分析法鉴定其分类地位,并研究该菌株对棉花和小鼠的安全性。[结果]从棉花根际土壤中分离出的12株细菌中,有5株对多隔镰刀菌、香石竹尖孢镰刀菌、棉花枯萎病菌具有拮抗活性;其中,KL-1菌株对3株目标病原菌的抑菌活性分别达69.09%、80.78%、78.89%。Biolog细菌自动鉴定系统和16SrDNA序列分析法鉴定结果表明,KL-1菌株为解淀粉芽孢杆菌;生物安全性初步测定结果表明,KL-1菌株对棉花和小鼠安全无毒。[结论]解淀粉芽孢杆菌KL-1菌株具有对多种植物枯萎病菌的抑菌活性,且对棉花和小鼠安全无毒,是一株具有研究和开发潜能的生防菌株。     

枯草芽孢杆菌D-29拮抗作用及其抗菌蛋白特性研究

枯草芽孢杆菌D-29是从地肤根内分离获得的一株生防细菌,为进一步了解D-29的生防特性,采用平板对峙法测定其抑菌谱并对其抑菌蛋白进行了研究。结果表明,该菌对番茄灰霉病菌、玉米大斑病菌等11种植物病原真菌均具有抑制作用,其中对玉米大斑病菌的抑菌效果最好,抑制率为54.6%;确定80%饱和硫酸铵为最佳盐析饱和度,获得的粗提蛋白耐高温,对有机溶剂和紫外光照不敏感,耐酸不耐碱。     

多粘芽孢杆菌抗逆性与益生性的体外评价

为了探讨多粘芽孢杆菌的抗逆性与益生特性,通过5个试验评定多粘芽孢杆菌的抗热、抗酸、耐胆盐、抑菌性能和粘附性。85℃水浴对多粘芽孢杆菌分别处理2.5,5.0,7.5 min模拟制粒条件;利用pH分别为2、3、4的人工胃液模拟胃液环境;0.3%胆盐模拟肠液环境;抑菌试验测定多粘芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制能力;以蛋鸡肠道上皮细胞为模型测定多粘芽孢杆菌的粘附能力。结果表明:多粘芽孢杆菌高温处理7.5min活菌数较对照组减少1.17%(P0.05)。在耐酸性试验中,pH3的试验组较对照组活菌数降低0.37%(P0.05)。在耐胆盐试验中,试验组活菌数较对照组降低了0.74%(P0.05)。多粘芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌环直径分别为0,17.46 mm。粘附性试验结果显示,在每100个蛋鸡肠道黏膜上皮细胞上可以粘附30个多粘芽孢杆菌。因此,制粒温度、人工胃液、人工肠液不影响多粘芽孢杆菌活菌数;多粘芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌有显著的抑制能力,基本不能在蛋鸡消化道内定植。     

人参锈腐病拮抗生防菌的筛选与鉴定

从人参根际土壤中筛选到具有拮抗人参锈腐病菌(Cylindrocarpon destructans)生物活性的生防菌3株,其中菌株BS015和菌株HN01为细菌,抑菌圈直径分别为22.8mm和21.9mm.菌株Tri41为木霉菌,抑菌率达76.6%.对人参几种常见病原菌进行了抑菌试验,结果表明:对人参根腐病菌(Fusarium solani)、人参立枯病菌(Rhizoctonia solani)、人参黑斑病菌(Alternaria panax)、人参菌核病菌(Sclerotinia schinseng)均有一定的抑菌效果.结合16S rDNA分子鉴定和形态鉴定对3株菌株进行了鉴定.结果表明:菌株BS015为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),菌株HN01为多粘芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),菌株Tri41为哈茨木霉(Trichdema harzianum).     

2株生防细菌协同拮抗马铃薯疮痂病及其防治效果研究

为筛选出对马铃薯疮痂病具有显著拮抗作用且较强田间防效的生防细菌,采用室内平皿拮抗及田间防效应用试验,检测菌株对马铃薯疮痂病的抑制效果.采用对峙培养试验确定了荧光假单孢菌、解淀粉芽孢杆菌菌体及其发酵菌液对马铃薯疮痂病菌均有明显抑菌效果,抑菌圈直径分别为11、5 mm和15、9 mm;将2种菌株发酵菌液按照1:1、2:1复配后,抑菌圈直径分别提高至17、28 mm,说明2种菌液复配对马铃薯疮痂病菌的抑制作用可以起到一定增效效果.通过田间防效试验验证了单一菌肥施用及2种菌肥混合施用对马铃薯疮痂病的防治效果.单一菌肥对马铃薯疮痂病的防效荧光假单孢菌(73.18％)优于解淀粉芽孢杆菌(49.31％),而2种菌肥配施防效显著优于单一菌肥,防效达91.7％.说明荧光假单孢菌及解淀粉芽孢杆菌2种菌肥配施可以有效防治马铃薯疮痂病,在田间应用及推广过程中具有巨大的潜力.     

寒地水稻病害生防菌株L1的鉴定及抑菌机理研究

本研究从寒地水稻根际筛选并鉴定了1株生防细菌,初步命名为芽孢杆菌L1,芽孢杆菌L1发酵培养5 d时发酵液中具有抑菌活性的次生代谢产物对水稻稻瘟病菌及纹枯病菌菌丝生长抑制率都达到最高,分别达74.57%和83.23%,随时间延长抑菌效果不再增加;芽孢杆菌L1的发酵液用硫酸铵梯度沉淀法提取粗蛋白,7个梯度下的粗蛋白对两种菌菌丝均具有抑菌作用,但对稻瘟病菌起主要抑菌作用的蛋白在硫酸铵饱和度50%～60%下沉淀,而对水稻纹枯病菌则在60%～70%,说明芽孢杆菌L1分泌对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌起主要抑菌活性的蛋白可能不是同一类。     

多粘类芽孢杆菌抗菌物质和防病机制之研究进展

 多粘类芽孢杆菌是一种具有防病和促生作用的生防菌，在植物病害防治方面具有很大的应用潜力。笔者对多粘类芽孢杆菌所产生的抗菌物质及其对病害生防机制的研究进展进行了综述，并对多粘类芽孢杆菌在农业中的应用前景进行了展望。