清远麻慢羽公鸡的基因分型与生产性能研究

【目的】为了探讨慢羽系中杂合子公鸡基因分型准确率和构建无ev21基因抗病品系,探讨育种群中慢羽公鸡基因分型、慢羽中的微长型（L1）、倒长型（L2）、等长型（L3）、未出型（L4）4种表型以及与生产性能关系。另外,通过表达量的差异甄别快慢羽候选基因催乳素受体基因（PRLR）和精子鞭毛蛋白2（SPEF2）的可行性。【方法】采用PCR-RFLP对清远麻慢羽公鸡进行分子分型,通过后裔测定的测交方法验证其分子分型的准确性,运用方差分析对各组别进行检验,采用百分数资料的t检验法比较各基因分型组别间对生产性能影响;利用RT-PCR 对快慢羽的候选基因进行定量分析,重点比较了快羽中的R2型与慢羽中的L2型和L4型的定量差异。【结果】568只慢羽公鸡中,缺失体组（ev21 ^-）占比41.73%,ev21 ⁺组占比为58.27%,其中纯合子与杂合子分别占比为8.80%和49.47%;经测交验证79只公鸡后代,慢羽纯合子和缺失体基因分型准确率为46.83%,基因分型杂合子实质为纯合子。慢羽公鸡中ev21 ⁺组其后代的等长型比率显著高于ev21 ^-组(P≤0.05）,ev21 ^-组公鸡的105日龄的通管性能极显著高于ev21 ⁺组（P≤0.01）。一日龄的鸡,在R2对慢羽（L2+L4）中PRLR表达差异不显著（P>0.05）,但其表达量在R2与L4型对比中则下调,达到显著水平（0.01<P≤0.05）,而SPEF2在慢羽中表达均极显著高于快羽鸡（P≤0.01）,其中与快羽R2 型比较,SPEF2分别在未出型(L4）及倒长型（L2）中均上调表达,差异均达极显著水平（P≤0.01）。【结论】研究尚需探索出慢羽杂合子准确率高的基因分型新方法,慢羽杂合子公鸡判别目前离不开现场测交验证;可以组建无ev21基因抗病品系;需进一步探讨造成ev21 ⁺组与ev21 ^-组别间等长型比率以及羽毛成熟性差异的原因;一日龄的SPEF2与PRLR均为影响快慢羽表型不同亚型差异的候选基因。     

慢羽系麒麟公鸡纯合个体分子检测方法的建立

为建立一种快速准确鉴定麒麟公鸡慢羽纯合子的分子检测方法,以加快纯合慢羽系及其配套系的育种速度,利用鸡性连锁羽速基因K/k中慢羽基因K与禽白血病内源性病毒基因ev21的紧密连锁关系,选择241只(直观鉴定171只为表型慢羽,70只为表型快羽)140日龄麒麟公鸡,应用PCR扩增URa和URb基因以鉴定其快、慢羽型,再扩增ev21基因,并采用限制性内切酶HaeⅢ对慢羽鸡扩增产物进行消化,检测基因型为纯合子的慢羽公鸡。麒麟鸡羽速类型检测结果显示,慢羽公鸡(170只)2条带,快羽麒麟公鸡(71只)1条带。慢羽公鸡酶切基因分型结果显示,酶切后有2条带的为ev21缺失个体(72只),有3条带的是杂合个体(94只),有1条带的为纯合个体(5只)。综上,可以利用ev21插入位点鉴定麒麟鸡基因型是否为纯合的慢羽个体。     

慢羽鸡PRLR和SPEF2基因连接方式和融合基因双向转录研究

快慢羽作为Z染色体1对等位基因(K,k+)控制的性连锁表型,被广泛应用在配套系生产的雏鸡性别鉴定上。为明确慢羽鸡PRLR和SPEF2基因连接方式和融合基因双向转录特征,本试验通过半定量PCR扩增PRLR和SPEF2基因共有区域477bp片段,明确两基因在慢羽鸡的连接方式;以禽内源白血病病毒ev21和SPEF2基因的转录作为对照,通过特异引物反转录和S1酶切法确定融合基因的转录方向。试验明确了慢羽K基因中PRLR与dSPEF2、SPEF2与dPRLR的5'末端以"头碰头"方式连接,"头碰头"连接的477 bp共有区域仅PRLR发生转录;证明了dPRLR和dSPEF2的3'末端"尾对尾"融合区域为双向共转录区域;还发现S1酶切法验证基因转录方向存在局限性。该研究结果为深入挖掘鸡慢羽K基因的分子结构和调控机制奠定了基础。     

快慢羽鸡的翼羽长度与相关基因表达分析

PRLR和SPEF2基因重复是鸡快慢羽表型的分子基础，为探究羽型的分子调控机制，本试验量测了19和21胚龄（E）的快慢羽坝上长尾鸡和太行鸡主翼羽和覆主翼羽长度，采用RT-qPCR检测鸡胚翅羽PRLR、SPEF2、BMP2和FST的表达变化。结果显示19E时坝上长尾慢羽鸡主翼羽比覆主翼羽长1.35 mm(P<0.05)，慢羽表型不明显；而此时太行慢羽鸡主翼羽长于覆主翼羽0.42 mm(P>0.05)，慢羽表型明显。PRLR和SPEF2在2个品种慢羽鸡的表达均显著高于快羽鸡（P<0.05），分别在1.4和2.0倍以上；SPEF2在21E坝上长尾快慢羽鸡表达均显著高于19E(P<0.05)。BMP2表达在坝上长尾慢羽鸡中显著高于快羽鸡（P<0.05），而在不同胚龄太行快慢羽鸡中则无显著差异（P>0.05）;FST在19E坝上长尾慢羽鸡中表达量最低（P<0.05），而太行鸡19E的慢羽鸡表达量最高（P<0.05）。综上，太行鸡在19E已表现慢羽表型，而坝上长尾鸡的慢羽表型在21E才呈现；推测PRLR和SPEF2在慢羽翅羽毛囊中的高表达，以及BMP2和FST在太行鸡和坝上长尾鸡翅羽毛囊中的差异表达，参与慢羽表型的形成。本试验的研究发现为阐明鸡羽型形成的分子调控提供理论依据。     

清远麻鸡快慢羽品系产蛋性能比较分析

[目的]明确清远麻鸡快慢羽系产蛋性能差异,并分析清远麻鸡慢羽系中Z染色体上K基因座禽内源性白血病毒21基因(ev21)对产蛋性能的影响,为下一步培育无ev21基因清远麻鸡品系及开展抗性研究提供参考依据.[方法]运用不同产蛋模型拟合不同羽速清远麻鸡的产蛋曲线,寻找最佳模型并分析产蛋过程中存在的问题;采用PCR-RFLP检测清远麻鸡慢羽系中ev21基因的插入情况.[结果]清远麻鸡慢羽系的开产日龄极显著迟于快羽系(P<0.01,下同),但开产体重和开产蛋重、40周龄蛋重及64周龄产蛋量均极显著高于快羽系,清远麻鸡慢羽系的40周龄体重极显著低于快羽系.利用伍德模型、杨宁模型和分室模型分别对清远麻鸡快慢羽系的产蛋率进行拟合,发现慢羽系和快羽系均以杨宁模型拟合的效果最佳,对应的拟合度(R2)分别为0.966和0.974.在清远麻鸡慢羽系中,L1亚群(含ev21基因)和L2亚群(不含ev21基因)间的产蛋性能差异均不显著(P>0.05),即ev21基因存在与否对产蛋性能无明显影响.[结论]清远麻鸡慢羽系产蛋性能优于快羽系,具体表现为产蛋率高,蛋重,且产蛋量多;ev21基因存在与否对清远麻鸡慢羽系产蛋性能无直接影响.清远麻鸡慢羽系产蛋性能尚有提升空间,因此生产上需加强其产蛋期的饲养管理.     

慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因敲除

【目的】探索在慢羽鸡成纤维细胞中敲除ev21基因的可行性,净化鸡群内源性逆转录病毒,同时为快速培育缺失ev21基因的慢羽鸡配套系打下基础。【方法】根据ev21基因序列（KY235336）特点,分别在其5'和3'端各设计2个sgRNA,用于构建4种不同sgRNA的打靶质粒,筛选出在5'和3'端打靶效率较高的sgRNA。然后基于CRISPR/Cas9基因编辑技术对ev21基因进行剪切,并通过同源重组方式以红色荧光蛋白（mCherry）的DNA片段（CAG-mCherry）替换ev21基因,实现对慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因定点敲除。【结果】在慢羽鸡成纤维细胞中能检测到ev21基因,构建的4种sgRNA（sgRNA1~sgRNA4）均能成功插入对应的打靶质粒中,经嘌呤霉素筛选及T7E1酶切检测,发现转染4种不同sgRNA打靶质粒后慢羽鸡成纤维细胞均有不同程度的死亡,其中又以sgRNA1和sgRNA3的基因敲除效率较高。同时针对同源位点左右同源臂构建表达mCherry的供体质粒,以其转染293T细胞12 h后均能表达出mCherry。以sgRNA1和sgRNA3打靶质粒及供体质粒共同转染慢羽鸡成纤维细胞,观察发现成纤维细胞内的mCherry持续表达,至转染后第30 d通过流式细胞仪分选收集红色荧光阳性成纤维细胞,并提取其总DNA进行PCR鉴定与基因测序,结果显示红色荧光阳性成纤维细胞中有目的片段（CAG-mCherry）插入,即以插入替换方式能实现对ev21基因的敲除。【结论】基于crispr/cas9基因编辑技术的基因敲除方法能成功敲除慢羽鸡成纤维细胞内源性白血病病毒ev21基因,为培育缺失ev21基因的慢羽鸡品系提供技术支持。     

固始鸡快慢羽纯系的选育及自别雌雄效果研究

据对固始鸡自然群研究得知，快羽占8．60％，慢羽占91．40％，说明固始鸡的原始种群主要以慢羽为主。其羽型分布结果为：快羽中R1型占68％，R2型占32％；慢羽中，倒长型占58．8％，等长型占16．5％，未长型占24．7％，未出现微长型。依据鸡的快慢羽显隐性关系以及伴性遗传的原理，通过个体选择、测交和纯繁扩群等方法建立了固始鸡快慢羽纯系。将建立起来的固始鸡快慢羽纯系进行纯繁，其后代快羽及慢羽比例分别达到了99．5％和99．7％以上。经两系自别配套知，其后代雏鸡羽速自别雌雄的准确率达到了99％以上。     

百宜黑鸡PRLR基因多态性对产蛋性能的影响

以催乳素受体(PRLR)基因作为候选基因,对95羽相同饲养管理水平的百宜黑鸡PRLR基因外显子3和外显子6序列进行PCR扩增,采用PCR扩增产物直接测序方法对该基因的SNP位点进行筛选,同时对不同基因型与产蛋性能进行关联分析。结果表明,在百宜黑鸡PRLR基因的序列中只发现1个SNP位点,位于第3外显子36 bp位置发生了C/T突变,将该突变位点所对应的纯合子和杂合子分别定义为CC型和CT型,其中CC型为优势基因型个体,等位基因C为优势等位基因,该基因座不处于Hardy-Weinberg平衡状态,遗传参数分析发现该位点属于低度多态;36C/T位点与百宜黑鸡产蛋性能关联分析结果表明,任何一种基因型与产蛋性能间均不显著(P 0. 05)。     

卷羽麒麟鸡快、慢羽品系生长发育规律对比分析

【目的】了解快羽和慢羽麒麟鸡生长发育规律，评估其作为培育自别雌雄配套系遗传素材的价值，挖掘并利用该地方遗传资源。【方法】分别采用Bertalanffy、Gompertz和Logistic 3种模型拟合分析麒麟鸡快羽系和慢羽系1～19周龄生长发育规律，探究其合适的生长模型。【结果】对于公鸡，快羽和慢羽公鸡体重仅在第1周龄差异显著(0.012分别为0.999和0.993，慢羽系公、母鸡体重的拟合优度R2均为0.994。快、慢羽系鸡的龙骨长和胫围的最佳拟合模型均为Bertalanffy模型，快羽系鸡胫长的最优模型是Logistic，慢羽系鸡的胫长的最优生长模型是Gompertz。【...     

羽速基因对坝上长尾鸡育成期体重和体尺生长发育的影响

为研究羽速基因对坝上长尾鸡育成期生长发育的影响,选取239只坝上长尾鸡(快羽公鸡59只,快羽母鸡60只,慢羽公鸡62只,慢羽母鸡58只)进行试验。结果表明,快慢羽公鸡间8~20周体重、体斜长、胫围、胸宽、胫长,8周、20周耻骨间距,20周胸角差异不显著。快慢羽母鸡间8~20周胫围、胸深、胫长,8周、20周耻骨间距,20周胸角差异不显著;快羽母鸡10周、14周体重,10~16周胸宽与骨盆宽,10~20周体斜长与龙骨长显著大于慢羽母鸡。在育成前期快羽鸡生长较快,而育成期后期慢羽鸡生长较快,快慢羽鸡生长发育时间的差异并不影响成年后鸡的体重与体型。     

伴性羽速基因对蛋鸡生产性能的影响

试验材料采用海兰W36商品代杂慢羽公鸡与来航型慢羽纯系母鸡杂交。对它们的F_1代快、慢羽母鸡性能进行比较,进一步探讨遗传背景一致的伴性羽速基因对蛋鸡生产性能的影响。资料以公鸡家系为单位用最小二乘分析法处理(Harcy 1975),进行显著性检验。结果是,快慢羽鸡在育成期和产蛋期死亡率、18周龄体重、开产蛋重、300日龄蛋重、67周龄蛋重均差异不显著(P>0.05),6周龄体重慢羽鸡大于快羽鸡差异显著(P<0.05),开产日龄慢羽鸡比快羽鸡早3.4天,差异显著(P<0.05)。300日龄和467日龄产蛋数(H.H.)快、慢羽鸡有差异,但未达到统计上的显著水平。说明慢羽基因(K)对蛋鸡的主要经济性状的影响不大,羽速自别雌雄蛋鸡具有应用前景。     

21日龄CD163基因编辑猪血液生理 生化及免疫指标的测定和分析

探讨了CD163基因编辑对21日龄断奶仔猪前腔静脉血液中部分生理生化、免疫球蛋白及补体蛋白等指标的影响。结果表明:CD163基因编辑后,纯合子的淋巴细胞比率、中间细胞比率、红细胞平均体积均显著低于杂合子和阴性猪(P0.05);纯合子的粒细胞比率、粒细胞数显著高于杂合子和阴性猪(P0.05);杂合子的血小板总数显著高于纯合子和阴性猪(P0.05);纯合子的葡萄糖和胆固醇含量显著高于杂合子和阴性猪(P0.05);纯合子血液中IgG、IgA、IgE和IgM等4类免疫球蛋白的含量均显著高于杂合子和阴性猪(P0.05);纯合子血液中补体蛋白3和补体蛋白4与杂合子和阴性猪没有显著性差异(P0.05)。     

21日龄CD163基因编辑猪血液生理生化及免疫指标的测定和分析

探讨了CD163基因编辑对21日龄断奶仔猪前腔静脉血液中部分生理生化、免疫球蛋白及补体蛋白等指标的影响。结果表明:CD163基因编辑后,纯合子的淋巴细胞比率、中间细胞比率、红细胞平均体积均显著低于杂合子和阴性猪(P<0.05);纯合子的粒细胞比率、粒细胞数显著高于杂合子和阴性猪(P<0.05);杂合子的血小板总数显著高于纯合子和阴性猪(P<0.05);纯合子的葡萄糖和胆固醇含量显著高于杂合子和阴性猪(P<0.05);纯合子血液中IgG、IgA、IgE和IgM等4类免疫球蛋白的含量均显著高于杂合子和阴性猪(P<0.05);纯合子血液中补体蛋白3和补体蛋白4与杂合子和阴性猪没有显著性差异(P>0.05)。     

羽速基因对0～20周龄固始鸡生长发育的影响

对 0～ 2 0周龄固始鸡快、慢羽纯系生长发育的研究结果表明 :羽速基因对固始鸡早期的生长发育有一定的影响 ,初生重、2周龄、4周龄、8周龄慢羽系鸡体重高于快羽系鸡 ,且初生重和 4周龄体重达显著水平(P <0 .0 5 ) ;羽速基因对固始鸡育成公鸡体重有极显著影响 ,8周龄快羽系公鸡体重极显著小于慢羽系公鸡 (P<0 .0 1 )。但 1 0～ 2 0周龄 ,快羽系公鸡各周龄体重均极显著地大于慢羽系公鸡 (P <0 .0 1 ) ;羽速基因对固始鸡1 8周龄和 2 0周龄的育成母鸡体重有极显著影响 ,快羽系母鸡体重极显著地低于慢羽系母鸡 ,对 8～ 1 6周龄母鸡的体重无显著影响。     

成都白鸡快、慢羽纯系的选育及羽型研究

1982年我室就成都白鸡羽型,快,慢羽纯系的选育、K(慢)、k(快)基因频率及杂种鸡羽速自别雌雄的准确率等进行了研究。按主翼羽和覆主翼羽生长状况,该鸡种初生雏羽型分为:快羽一型,慢羽三型。K(慢),k(快)基因频率分别为0.1602和0.8398。表型鸡经测交,纯繁选育出成都白鸡快,慢羽两个品系。以成都白鸡慢羽母鸡同快羽京白公鸡杂交,其杂种鸡羽速自别雌雄的准确率为99.13%。     

白色杜洛克×二花脸F_2资源群体中催乳素(PRL)和催乳素受体(PRLR)基因与母猪杀婴行为和产仔数关联性研究

【目的】研究PRL、PRLR基因在白色杜洛克×二花脸F2资源群体中的遗传变异及其与母猪杀婴行为和产仔数的关联性。【方法】PRL基因的g.1317TA、g.8905CT、g.9056CT位点,PRLR基因的g.1217CT、g.1283CA、g.1439GA、g.1528GA和g.1600TA位点采用SNaPshot法对资源群体所有F0、F1和288头F2母猪进行基因型判定,分别利用传递不平衡检测(TDT)和最小二乘法分析这些位点与母猪杀婴行为和产仔性状的关联性。【结果】TDT分析发现,PRL和PRLR基因所有检测SNP位点,无论基因型还是单倍型均与母猪杀婴行为无显著相关。与母猪产仔数相关性分析表明:PRLR基因5个SNP位点的基因型及单倍型与总产仔数、产活仔数、产死胎数、断奶仔猪数和断奶窝重均未达到显著相关;PRL基因的3个SNP位点与母猪的总产仔数和产活仔数达到显著相关(P0.05),单倍型ACC个体的总产仔数(P=0.0005)和产活仔数(P=0.001)极显著低于其它单倍型个体;单倍型TTT个体的产活仔数显著高于其它单倍型个体(P=0.003)。【结论】白色杜洛克×二花脸F2资源群体中,PRL、PRLR基因与母猪杀婴行为无关联性,PRL基因与母猪总产仔、产活仔数显著相关。     

大白母猪PTGS2基因内含子3的SNP检测及其与繁殖性状的关联分析

【目的】为揭示PTGS2基因多态性与母猪繁殖性状的关联。【方法】采用PCR产物直接测序法对401头大白母猪PTGS2基因第3内含子的SNP位点进行检测,结合1 786窝母猪繁殖性能记录,采用最小二乘模型分析了各多态位点基因型及其单倍型组合对5个繁殖性状的影响。【结果】大白猪PTGS2基因第3内含子区域存在3个紧密连锁的SNP位点:G227A、A392C和T409C,分别以等位基因G、A、T及其纯合子(GG、AA和TT)、GAT单倍型及GAT/GAT组合的频率最高,各位点杂合度在0.320 9～0.353 6之间,遗传多样性较为丰富;G227A位点的GA基因型、A392C位点的AC基因型、T409C位点的TC基因型及GAT单倍型具有显著提高母猪总产仔数、产活仔数和仔猪21日龄成活数的效应(P0.05或P0.01),AA、CC和CC基因型及GCC/GCC单倍型组合具有显著提高仔猪21日龄窝重的效应(P0.05或P0.01)。【结论】研究结果丰富了猪PTGS2基因的SNP标记,初步证实PTGS2基因对母猪繁殖性状有显著影响,但其具体效应可能会因品种(或猪群)及具体性状的不同而有一定差异。     

杂合型伴性矮小基因对正常体型鸡脂肪沉积的影响

【目的】通过探究杂合型伴性矮小基因对鸡脂肪沉积的影响,了解其脂肪沉积动态变化的规律,为优质肉鸡和地方鸡种生产性能研究奠定基础。【方法】将正常体型的固始公鸡和广西瑶鸡公鸡（Z^DWZ^DW）分别与正常型母鸡（Z^DWW）和矮小型母鸡（Z^dwW）交配,将杂交后代在同一条件饲养。分别于60日龄、90日龄、120日龄从每个杂交后代中各选取鸡只100只（公母各半）,进行体尺指标的测定;分别于60日龄和90日龄从固始鸡的杂交群体中各选取鸡只10只（公母各半）,进行体脂含量动态变化的研究;另于120日龄从固始和广西瑶鸡的杂交后代群体中各选鸡只10只（公母各半）,进行体脂含量的测定;采用全自动生化分析仪测试血清生化指标;采用索氏抽提法测定胸肌、腿肌中肌内脂肪（IMF）的含量;通过制作石蜡切片,在显微镜下测定肌纤维直径和肌纤维密度。【结果】杂交后代个体体型均为正常型,固始鸡母本正常型群体的公、母鸡随日龄呈现了不同的脂肪沉积特性。母鸡的体脂指标包括腹脂重、腹脂率、皮下脂肪厚和肌间脂肪宽前期均保持在低水平,在120日龄得到显著提高,而公鸡的体脂水平一直维持在低水平;固始鸡母本矮小型群体公、母鸡随日龄表现了相似的脂肪沉积动态变化特性,120日龄公、母鸡的体脂沉积水平均显著高于60日龄/90日龄;母本矮小型群体公鸡（dw杂合子）表现了完全不同于母本正常型群体公鸡（DW纯合子）体脂变化的特性,其90日龄和120日龄的腹脂重、腹脂率、皮下脂肪厚和肌间脂肪宽均显著高于母本正常型群体公鸡。进一步整合120日龄固始鸡杂交群体和广西瑶鸡杂交群体的体脂数据发现,群体因素对腹脂重、肌间脂肪宽、皮下脂肪厚和胸肌肌内脂肪含量的效应均达到显著水平,特别是母本矮小型公鸡（dw杂合子）的腹脂重、腹脂率、肌间脂肪宽、皮下脂肪厚和胸肌肌内脂肪含量均极显著高于母本正常型公鸡（DW纯合子,P<0.01）。母本矮小型与母本正常型群体间在总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）含量、高密度脂蛋白（HDL）含量上均无显著差异。母本正常型和母本矮小型后代的肌纤维特性包括肌纤维密度、肌纤维面积、肌纤维直径均无显著性差异。【结论】杂合伴性矮小型基因改变了公鸡的脂肪沉积特性,显著提高了公鸡的腹部脂肪、皮下脂肪和肌间脂肪的沉积;改善了胸肌的肌内脂肪含量;而对血脂指标无显著影响;对肌纤维特性无显著影响。     

基于CRISPR/Cas9技术构建STING基因敲除猪肺泡巨噬细胞系及其对Ⅰ型干扰素转录的影响

【目的】阐明干扰素基因刺激因子(STING)在猪抗病原微生物感染中的作用机制,为猪传染性胃肠炎、流行性腹泻和猪伪狂犬病等病毒性疾病的科学防控提供参考依据。【方法】基于CRISPR/Cas9技术,在STING基因第4、第8外显子中寻找高分靶点并设计sgRNA序列,将退火的sgRNA与酶切的LentiCRISPRv2载体用T4 DNA连接酶连接以获得LentiCRISPRv2-STING-sgRNA慢病毒载体(STING-sgRNA);以不同的STING-sgRNA慢病毒载体组合及包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共同转染293T细胞,得到含sgRNA的慢病毒再转染3D4/21细胞;经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得单克隆细胞株,通过PCR、测序及Western blotting鉴定STING基因的敲除效果;并采用实时荧光定量PCR验证STING基因敲除对I型干扰素表达的影响。【结果】以不同的STING-sgRNA慢病毒载体组合与HA-STING过表达载体共同转染293T细胞,均能在细胞内对STING真核表达载体产生编辑效果,且以STING-sgRNA(1+5)慢病毒载体组合的编辑效率最高。以编辑效率最高的STING-sgRNA(1+5)慢病毒载体组合及包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共同转染293T细胞包装出慢病毒,再用慢病毒感染3D4/21细胞,结果获得1株STING基因大片段(4989 bp)缺失的3D4/21细胞株,Western blotting检测未发现STING蛋白,说明STING基因敲除3D4/21细胞(3D4/21-STING-/-)构建成功。与野生型3D4/21细胞相比,在转染副猪嗜血杆菌DNA刺激下,3D4/21-STING-/-细胞中的IFN-β基因转录水平显著降低(P<0.05)。【结论】采用CRISPR/Cas9技术能成功大片段敲除3D4/21细胞中的STING基因,而导致STING基因功能丧失;STING基因敲除会导致细胞在病原微生物DNA刺激时Ⅰ型干扰素转录障碍,也提示STING基因可能是猪抗病原微生物感染的关键因子。     

武定鸡快慢羽纯系选育及自别雌雄效果研究

 1992年根据武定鸡农大Ⅰ系26个父系家系6批出壳雏鸡2013只主翼羽和覆主翼羽的生长特点,将该鸡种初生雏鸡羽型分为:快羽-型、慢羽四型.表型慢羽个体占13.26%,快羽个体占86.74%,K(慢)、k(快)基因频率分别为0.0698和0.9302,经基因型测交和纯繁扩群.基本育成武定鸡快、慢羽两个纯系.用两系配套繁殖或用该鸡种的慢羽母鸡同红布罗快羽公鸡杂交,其雏鸡羽速自别雌雄的准确率平均为98.57%.