扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存的初探

[目的]研究包埋玻璃化法对扁桃休眠茎尖超低温保存的影响,为扁桃资源的超低温保存提供理论依据.[方法]采用不同预培养蔗糖浓度和预培养时间、不同装载液处理时间、不同玻璃化液处理时间及不同化冻方式对莎车14号扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存存活率进行比较.[结果]将低温贮藏的扁桃休眠茎尖剥成1～2 mm,用3;的海藻酸钠包埋,在含0.4 mol/L蔗糖的0.1 mol/L CaCl2溶液中固定30 min后形成包埋丸,用含有0.5 mg/L蔗糖的MS培养基预培养3d,放入装载液(MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)中处理20 min,0℃下用PVS2处理30 min后迅速投入液氮,超低温保存24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤20 min,转入含0.3 mg/L 6-BA和0.3 mg/L IAA的MS培养基中培养,存活率达45;.[结论]包埋玻璃化法能够提高莎车14号扁桃休眠茎尖超低温保存的存活率.     

月季茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

研究月季茎尖玻璃化法超低温保存技术,以期为月季茎尖超低温保存提供理论和实践依据.试验选用金奖章、粉玛雅、韩红、博共4个月季品种进行简单玻璃化法和玻璃化超低温保存试验.结果表明:简单玻璃化法保存时.不同品种的茎尖存活率差异显著,金奖章的茎尖存活率最高(55.3%);通过研究预培养、装载处理和植物玻璃化溶液PVS2脱水时间对粉玛雅茎尖存活率的影响,初步构建了月季茎尖玻璃化法超低温保存体系,即将长1.0cm的茎尖在含0.3mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5～6d后,取1.5mm茎尖,室温下A液(MS+2mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖)装载40min或B液[60%PVS2+40%(MS+0.15mol·L-1蔗糖)]装载30min,用PVS2(300g·L-1甘油+150g·L-1乙二醇+150g·L-1二甲基亚砜+0.4mol·L-1蔗糖+MS)于0℃下处理40min,然后液氮保存24h,在40℃水浴中化冻90s,用1.2mol·L-1蔗糖培养液洗涤,最后转入MS+6-BA1.0mol·L-1+IBA0.1mol·L-1上再培养,存活率高于53.3%.     

绿萝组织培养与快繁技术

[目的]研究绿萝组培快繁技术要点,为绿萝再生体系建立和工厂化生产提供技术支持.[方法]以绿萝叶片和无节茎段为外植体,以MS为基本培养基,探讨不同浓度的激素组合(1.0~3.0 mg/L 6-BA、0.1~0.3 mg/L NAA、0.1~0.3mg/L IBA)对愈伤组织诱导及其分化、不定芽诱导、生根培养等的影响.[结果]两种外植体均能产生愈伤组织,但茎段产生愈伤组织较快,产生不定芽也快.叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L.茎段诱导愈伤组织及其分化的最适培养基均为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2 mg/L,最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L.[结论]绿萝叶片和茎段可作为愈伤组织培养的较好外植体,茎段培养效果优于叶片.     

新疆紫草快繁技术研究

[目的]建立新疆紫草组培快繁技术体系.[方法]以新疆紫草无菌苗的茎尖为外植体,筛选适合茎尖萌发、增殖、生根的激素组合.[结果]茎尖最佳萌发培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L,其萌发率为100;.芽增殖培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L,芽增殖倍数为13.50倍,继代壮苗培养基为MS+NAA 0.3 mg/L +6-BA 0.5 mg/L,生根培养基为MS+NAA 0.1 mg/L,生根率为84;.降低6-BA浓度到0.05 mg/L可大幅降低玻璃化发生率.经过此培养基继代后,再在原生根配方中生根,生根率提高到95.32;.[结论]茎尖是新疆紫草快繁的最佳外植体.     

生姜芽的组培快繁

[目的]寻找生姜芽组培快繁的最佳方案。[方法]以MS为基础培养基,设计生姜芽组培快繁的两条途径,选择生姜芽组培快繁的最佳培养基配方。[结果]结果表明,茎尖→芽最适培养基为:改良MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L;茎尖→愈伤组织→芽,茎尖诱导愈伤组织的最适培养基为:改良MS+2,4-D 2.0 mg/L+KT 1.0 mg/L,愈伤组织诱导芽分化的最适培养基为:改良MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。采用超净工作台上用75.0%酒精30 s+10.0%NaClO 15 min+0.1%HgCl210 min+50 ug/L青霉素与台外消毒相结合对外植体进行表面消毒,去污效果最佳。[结论]对愈伤组织进行切割并继代培养后再诱导芽分化,可获得较大的增殖倍数。     

盆栽小菊茎尖剥离与试管苗培养试验

以小菊茎尖为外植体,MS为基本培养基,探究不同激素种类及浓度组合对小菊茎尖组织培养的影响。结果表明:诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6-BA3.0 ml/L+TDZ0.3 mg/L,诱导愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,分化率为76.7%;最适增殖培养基为MS+6-BA2.0 ml/L+NAA0.05 mg/L+IBA0.1 mg/L,增殖系数为8.67.     

辣根茎尖的组织培养

[目的]研究辣根茎尖组织培养,为其优良品种的快速繁殖提供新途径。[方法]分别就不同消毒时间对茎尖接种污染率的影响、不同激素配比的培养基对茎尖出愈率、分化率的影响、不同激素浓度对不定芽生根的影响进行了探讨分析。[结果]酒精消毒时间为35 s时外植体污染率和褐化率均较低;MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA培养基对茎尖形成愈伤组织的诱导率较高,为82.3%;MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基诱导茎尖分化率较高,达80%;MS+0.2 mg/L Kt培养基适合辣根不定芽的继代繁殖;MS+0.1 mg/L NAA为辣根不定芽生根培养基。[结论]该研究结果为辣根茎尖的组织培养提供了试验基础,为其优良品种的快速繁殖奠定了基础。     

莪术茎尖玻璃化法超低温保存技术

为莪术种质资源稳定保存提供一条新途径。以莪术组培苗茎尖为试材,用玻璃化法进行超低温保存后,于25℃用0.1%TTC溶液培养24 h后检测生活力。结果表明,切取2~3 mm长、继代培养60 d的莪术组培苗茎尖,避光条件下,用含0.3 mol/L蔗糖的MS固体培养基预培养7 d,室温下,茎尖用60%的PVS2装载液装载10 min,0℃用100%的PVS2玻璃化保护液对茎尖脱水处理30 min,快速投入液氮中进行超低温保存16 h;取出茎尖于40℃水浴中解冻2 min,室温下用US溶液洗涤20 min,立即用0.1%TTC溶液于25℃人工气候培养箱中培养24 h,莪术茎尖的生活力最高可达100%。表明该方法可用于莪术种质资源的保存。     

丽格海棠组织培养技术研究

[目的]通过组织培养方法,筛选丽格海棠不定芽诱导、继代培养和生根培养的最佳培养基,为丽格海棠的快速繁殖提供参考。[方法]采用丽格海棠叶片、叶柄、茎段为外植体进行不定芽诱导、继代及生根培养。[结果]MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+腺嘌呤8 mg/L是诱导叶片愈伤组织培养的最佳激素配比;MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+腺嘌呤8 mg/L是诱导叶柄的最佳激素配比;MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.4 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L是诱导茎段愈伤组织培养的最佳激素配比;MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2mg/L是诱导丽格海棠继代培养的最佳激素配比;1/2MS+IBA 0.1 mg/L+NAA 0.1 mg/L是诱导丽格海棠生根培养的最佳激素配比,叶片更适宜应用于组织培养。[结论]为丽格海棠织培养快速繁殖和遗传转化提供理论依据。     

生姜茎尖脱毒培养研究

以生姜茎尖为外植体进行培养,筛选诱导愈伤组织和芽分化的最佳培养基。结果表明,消毒时间对茎尖成活率影响很大,以0.1%HgCl2消毒10 min最为有效。不同的激素配比对生姜试管苗再生诱导有明显影响,诱导茎尖愈伤组织生长及分化的最适培养基为1/2MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,丛生芽继代培养增殖效果较好的培养基为1/2MS+BA2.5mg/L+NAA0.1 mg/L+KT1.0 mg/L。     

不同基因型甜高粱愈伤组织与丛生芽诱导条件优化

【目的】探讨不同培养基类型和激素配比对不同基因型甜高粱的愈伤组织和丛生芽诱导的影响,为建立高效稳定的甜高粱遗传转化体系奠定基础。【方法】以不同基因型甜高粱辽甜三号和北甜三号的成熟种子为外植体,在MS培养基中添加不同浓度2,4-D及2,4-D与NAA、6-BA或KT配比组合,对愈伤组织和丛生芽进行诱导;分别在B5、N6、MS和1/2MS培养基中添加不同2,4-D、NAA、6-BA组合,对愈伤组织进行诱导。【结果】适宜北甜三号愈伤组织和胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA,辽甜三号为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L NAA,可获得质量较好的愈伤组织,愈伤组织块大且色泽鲜艳。适于两个基因型甜高粱丛生芽诱导的最佳基本培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L 2,4-D,但不同基因型的诱导率有明显差异,以辽甜三号的诱导效果较好。【结论】不同浓度2,4-D与其他激素配比对两个基因型甜高粱的愈伤组织诱导有明显影响,以对辽甜三号的诱导效果较好;在MS、B5、N6、1/2MS基本培养基中,MS可作为愈伤组织诱导的最佳基本培养基。     

观赏凤梨远缘杂种离体再生体系研究

[目的]建立一套观赏凤梨远缘杂种离体再生培养体系,为优质新种质的工厂化生产提供参考.[方法]以观赏凤梨V‘ Christiane’×G.dissitisflora远缘杂交种子为材料,研究不同激素组合和基因型对种子愈伤组织的诱导、芽分化和无菌苗生根的影响.[结果]在添加6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.2 mg/L的MS培养基上,株系Cd-40的增殖倍数最高,为20.43,其次为Cd-15、Cd-46.与MS培养基相比,在添加不同浓度NAA和6-BA的1/2MS培养基中,Cd-15愈伤组织增殖倍数为6.5~8.5.在含6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L的MS培养基上,Cd-8、Cd-15、Cd-40的平均芽分化率和平均芽分化数均最高,分别为98.49%和18.4个/块.在E4培养基中,Cd-15、Cd-40的愈伤组织分化率和分化芽均达最高值.Cd-40无菌苗在含NAA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+ 6-BA 0.25 mg/L的1/2MS培养基上生根效果最好,生根率高达99.0%,平均根数为2.41条/株.[结论]在添加生长素NAA的培养基中提高6-BA的浓度有利于芽的分化,NAA是观赏凤梨无菌苗生根效果较好的激素.     

花花柴组织培养与植株再生体系的优化

【目的】探讨植物生长调节剂、外植体及NaCl等因子对花花柴愈伤组织诱导、分化与植株再生的影响,并优化花花柴的再生植株体系,建立直接从茎端诱导丛生芽的植株再生体系。【方法】对生长约为2个月的花花柴植株进行不同的处理。采用不同浓度组合的细胞分裂素6-BA(6-Benzylaminopurine)和生长素NAA(α-Naphthaleneacetic acid)的MS(Murashige and Skoog)培养基(0.8%(w/v)琼脂粉)。【结果】最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 1.2 mg/L+NAA 0.6 mg/L;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA3.0 mg/L+NAA2.0 mg/L;从外植体直接诱导不定芽的最佳培养基是MS培养基;诱导根的最佳培养基是1/2MS+NAA mg/L。【结论】花花柴叶片是愈伤组织形成的最佳材料,NaCl胁迫对愈伤组织的诱导有一定的抑制作用。     

白玉蔗组织培养研究

[目的]以广西贵港市白玉蔗为材料,探讨影响白玉蔗离体培养的主要因素,建立其快速再生繁殖体系.[方法]以白玉蔗尾梢心叶为外植体,诱导愈伤组织并进行继代培养后,分别进行不同培养基和激素组合对白玉蔗愈伤组织芽分化培养、不定芽增殖和生根壮苗等影响试验.[结果]白玉蔗心叶切片供诱导愈伤组织是方便快捷的有效方法.心叶切片接人培养基(MS+2,4-D 3 mg/L,琼脂5g/L,糖30 g/L)30 d后,外植体迅速膨胀,边缘出现颗粒状、淡黄或黄色、质地均一的胚性愈伤组织或糊状的愈伤组织.诱导白玉蔗芽分化以培养基MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA0.2 mg/L的效果最佳;培养不定芽增殖以MS+6-BA 3.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.6 mg/L+糖30.0 g/L培养基的效果最佳.PVP和活性炭对防止组培苗褐变的效果有差异,1%活性炭能有效抑制白玉蔗增殖培养基中丛生芽的褐化.在生根壮苗培养中,最优培养基为MS+ NAA 0.6 mg/L+糖50.0 g/L+活性炭0.1%.[结论]通过正交试验设计,建立了白玉蔗的再生繁殖体系,为加快白玉蔗繁殖速度、提高繁殖系数、节约种茎提供有效途径.     

一品红茎段组织培养研究

以一品红(Euphorbia pulcherrima)中的深红一品红(AnnetteHegg)幼茎和腋芽为外植体,以MS为基本培养基并附加不同的生长激素,进行了愈伤组织诱导、愈伤组织分化出芽以及腋芽增殖的研究。结果表明茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.1 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L;愈伤组织分化出芽的最佳培养基为MS+6-BA 1.2 mg/L+NAA 0.2 mg/L;腋芽启动的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L。     

木薯良种GR891组织培养与快速繁殖技术

【目的】探讨木薯良种GR891的组织培养与快速繁殖技术。【方法】以越冬木薯种茎及其新长嫩茎的腋芽或顶芽为外植体,探讨不同消毒时间、6-BA和NAA浓度对木薯不定芽诱导或增殖、生根的影响。【结果】以带顶芽或腋芽的木薯幼嫩茎段作外植体进行不定芽诱导培养比较适宜;接种前采用0.1% 升汞消毒10~15 min,不定芽和愈伤组织诱导率均最高,分别为57.1%和61.9%。不定芽诱导培养基以MS+0.5 mg/L 6-BA最佳,不定芽诱导率最高（72.2%）,芽生长较好;丛生芽增殖培养基以MS+0.5~1.0 mg/L 6-BA为宜,其增殖倍数达3.0倍,并形成健壮的丛生芽;生根培养基以MS+0.3~1.5 NAA mg/L最佳,生根率可达90.0%以上。将生根苗移栽至混合基质（60%塘泥+40%河沙）中,约1周后可萌生新根,移栽成活率达95.0%以上。【结论】在MS培养基中添加低浓度6-BA,有利于不定芽的诱导和增殖;6-BA和NAA配合使用均不利于不定芽的诱导和增殖;不定芽的诱导和生长无需添加外源NAA。0.9 mg/L NAA对木薯不定芽生根效果较好,而6-BA对不定芽生根有一定抑制作用。     

三尖杉愈伤组织诱导及其分化的初步研究

以三尖杉茎尖、嫩叶为外植体,应用正交设计法对愈伤组织诱导及其继代分化进行了研究。结果表明,不同外植体灭菌的难易程度相差较大,叶片较茎尖容易;叶片用体积分数为75%的酒精浸泡30-45 s,经体积分数为0.1%HgCl2溶液灭菌12 min,效果最好;茎尖则用体积分数为75%酒精浸泡1 min,经体积分数为0.1%HgCl2溶液灭菌12 min,效果较好;诱导叶片、茎尖愈伤组织的最佳培养基配方为MS+NAA 1.0 mg.L-1+2,4-D 1.0 mg.L-1;愈伤组织在继代培养基上均能进行分化,其中结构紧密的茎尖愈伤组织在MS+6-BA3.0 mg.L-1培养基上继代培养能诱导分化形成不定芽。     

龙选蕉组培快繁技术

【目的】探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系。【方法】以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0～6.0 mg/L 6-BA、0.1～0.2 mg/L NAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养。【结果】相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象。在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA 3.0 mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常。【结论】次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS+ 4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。     

双单倍体南瓜后代子叶离体再生植株研究

【目的】探索一种快速扩繁南瓜双单倍体植株的技术,以扩大双单倍体植株的数量,提高其育种效率。【方法】以双单倍体南瓜后代子叶为外植体,在MS培养基中分别添加不同质量浓度的6-BA（1.0,4.0 mg/L）和NAA（0.05,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L）,筛选最佳组合;在此基础上,继续添加不同质量浓度的2,4-D（0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L）,筛选3种激素的最佳组合。在MS＋6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的不定芽诱导培养基上,研究其对不同苗龄子叶的诱导效果。将不定芽接种在含不同质量浓度NAA (0.05, 0.1, 0.2, 0.5 mg/L)的MS生根培养基上,比较生根率和根系生长势。【结果】在诱芽培养基中,添加2种激素时,以6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的MS培养基诱导率最高,为66.67％,分化系数为3.89;添加3种激素时,以6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L＋2,4-D 1.5 mg/L的MS培养基诱导率最高,达80.95％,分化系数为4.12。当子叶展开后苗龄为3 d时,不定芽诱导率相对较大,为77.42％。不定芽在MS+0.1 mg/L NAA培养基上生根效果最好,根系生长健壮,生根率达100%。【结论】双单倍体南瓜后代子叶离体再生的适宜激素质量浓度组合为MS＋6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L;以展开后3 d苗龄的子叶作为外植体诱导效果最好;MS+0.1 mg/L NAA是不定芽诱导生根的最适培养基。