扁桃茎尖包埋玻璃化超低温保存条件研究

采用包埋玻璃化法对莎车18号扁桃茎尖超低温保存进行了研究。主要探讨低温锻炼、预处理浓度和预处理时间、装载时间和PVS2处理时间对莎车18号扁桃茎尖超低温保存后存活率的影响。结果表明,将低温锻炼4周的莎车18号扁桃茎尖切2 mm长用3%海藻酸钠包埋后,在含有0.3 mg/L蔗糖＋5%DMSO（二甲基亚砜）的MS培养基预培养1 d,装载液处理20min,在0℃条件下用PVS2处理50 min后迅速投入液氮,24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤2次,每次10 min,接种于含6-BA0.3 mg/L和IAA 0.3 mg/L的MS培养基上进行培养,暗培养15 d,转移至正常光下,存活率高达52%。     

月季茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

研究月季茎尖玻璃化法超低温保存技术,以期为月季茎尖超低温保存提供理论和实践依据.试验选用金奖章、粉玛雅、韩红、博共4个月季品种进行简单玻璃化法和玻璃化超低温保存试验.结果表明:简单玻璃化法保存时.不同品种的茎尖存活率差异显著,金奖章的茎尖存活率最高(55.3%);通过研究预培养、装载处理和植物玻璃化溶液PVS2脱水时间对粉玛雅茎尖存活率的影响,初步构建了月季茎尖玻璃化法超低温保存体系,即将长1.0cm的茎尖在含0.3mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5～6d后,取1.5mm茎尖,室温下A液(MS+2mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖)装载40min或B液[60%PVS2+40%(MS+0.15mol·L-1蔗糖)]装载30min,用PVS2(300g·L-1甘油+150g·L-1乙二醇+150g·L-1二甲基亚砜+0.4mol·L-1蔗糖+MS)于0℃下处理40min,然后液氮保存24h,在40℃水浴中化冻90s,用1.2mol·L-1蔗糖培养液洗涤,最后转入MS+6-BA1.0mol·L-1+IBA0.1mol·L-1上再培养,存活率高于53.3%.     

玻璃化法超低温保存香石竹种质资源的研究

以香石竹"云恋蝶"离体茎尖为试材,研究玻璃化法对香石竹茎尖的高体超低温保存.通过正交设计试验对影响存活率的主要因素(预培养培养基中蔗糖浓度、预培养时间、装载时间和PVS2处理时间)进行分析,结果表明,预培养1 d,预培养基中蔗糖浓度为0.5 mol/L,装载40 min,PVS2液处理40 min,液氮处理1 d,在40℃水浴化冻后的香石竹茎尖,成活率达44.13%,且超低温再生苗与其常温苗的生理生化指标无显著差异.本试验成功地建立了香石竹种质资源玻璃化法超低温保存的技术,为香石竹种质资源的长期保存提供了一条有效途径.     

包埋玻璃化法超低温保存灰杨休眠茎尖的研究

采用包埋玻璃化法,对灰杨休眠茎尖进行了超低温保存研究。将灰杨休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中的蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理时间对灰杨休眠茎尖存活率的影响。结果表明:含灰杨茎尖的胶球在0.8 mol/L的蔗糖溶液中培养24 h,可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4 mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(分子量4 000)+5%二甲基亚砜]在25℃处理20 m in,可以显著提高其存活率,在优化条件下存活率可高达58.3%。     

包埋玻璃化法超低温保存沙生柽柳休眠茎尖的研究

[目的]采用包埋玻璃化法,对沙生柽柳休眠茎尖成功地进行冷冻保存。[方法]将沙生柽柳休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理的时间对沙生柽柳休眠茎尖存活率的影响。[结果]含沙生柽柳茎尖的胶球在0.8mol/L蔗糖溶液中培养24h可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油＋45%（0.4mol/L）蔗糖＋10%聚乙二醇（分子量4000）＋5%二甲基亚砜]在25℃处理20min可以明显提高存活率,在优化条件下存活率可高达48.3%。[结论]蔗糖浓度和预培养时间是决定沙生柽柳茎尖存活率的关键因素。     

胡杨休眠茎尖的包埋玻璃化法冷冻保存研究

【目的】建立适合胡杨休眠茎尖的冷冻保存方法,对珍稀濒危植物胡杨种质资源进行保存。【方法】取深冬胡杨休眠茎尖,无菌处理后,包埋在3%褐藻酸钙胶球中,对包埋后的胶球进行蔗糖预培养,预培养后的胶球再用玻璃化保护液进行处理。研究预培养过程中蔗糖浓度、预培养时间及不同玻璃化保护液和处理时间对胡杨休眠茎尖存活率的影响。【结果】含有休眠茎尖的褐藻酸钙胶球在0.8 mol/L蔗糖溶液中预培养24 h,经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4 mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(4 000)+5%二甲基亚砜],于室温下处理30 min后再进行冷冻保存,可以获得较好的存活率。【结论】在优化的条件下,胡杨休眠茎尖存活率可高达77%,对保存后再生的幼芽进行遗传稳定性检测,未发现变异。采用液氮冷冻保存胡杨休眠茎尖是可行的。     

高山红景天(Rhodiola sachalinensis A.Bor)茎尖包埋-玻璃化法超低温保存与植株再生

使用包埋-玻璃化法对两种来源的高山红景天茎尖进行超低温保存研究,探讨蔗糖预处理、包埋过程中渗透处理和不同温度下玻璃化液PVS2处理的时间对超低温保存后茎尖存活率的影响.结果表明,茎尖依次在0.3、0.5、0.7、1.0 mol.L-1的蔗糖溶液中各预培养1 d后,转入1.0 mol.L-1的蔗糖溶液中继续培养4 d,然后使用附加2 mol.L-1甘油和1 mol.L-1蔗糖的包埋液渗透处理60 min,包埋珠在0℃处理180～210 min后投入液氮,48 h后用40℃水浴快速化冻3 min,用合有1 mol.L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,转入MS+6-BA 1 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1固体培养基中在22℃条件下进行暗培养,2 d后转移入光照培养,最高成活率接近100%,再生植株生长和分化正常.     

玻璃化法及小液滴玻璃化法对香石竹茎尖超低温保存效果的影响

[目的]探索更有效的香石竹茎尖超低温保存方法,为球宿根花卉的超低温保存提供相关技术支持。[方法]以香石竹茎尖为材料,研究预培养条件(蔗糖浓度、预培养时间)、玻璃化处理时间和玻璃化方法(常规玻璃化法、小液滴玻璃化法)对香石竹茎尖超低温保存效果的影响。[结果]在0.5 mol/L的蔗糖浓度培养基上预培养5 d香石竹茎尖成活率最高,为88.3%;玻璃化处理80 min成活率最高,可达86.7%;常规玻璃化法成活率及再生率在80%以上,小液滴玻璃化法成活率可达90%以上且全部再生,小液滴玻璃化法再生天数比常规玻璃化法少3~5 d。[结论]小液滴玻璃化法是一种有发展前景的超低温保存方法。     

库车小白杏的组织培养及玻璃化法超低温保存试验初探

[目的]采用玻璃化法对杏资源茎尖进行超低温保存.超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存的最好方法,保存后的材料遗传上较为稳定.[方法]以库车小白杏为试材,对茎尖(外植体)组织培养的培养基及激素浓度做了初步选择.[结果]选择MS +0.5NAA +0.2 6 -BA激素配方可使杏的茎尖最易形成愈伤材料,而选择MS +0.1 NAA +0.1 6- BA +0.1GA激素配方可使由茎尖获得的愈伤材料最易分化出根.[结论]用玻璃化法对组织培养获得的愈伤材料结合不同的低温保存时间、脱水处理时间与化冻方法进行比较试验可知,预冻温度- 30℃、玻璃化液保护剂脱水60 min、40℃水浴5 min解冻,可使超低温保存的材料复活率最高.     

冬凌草试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

对冬凌草[Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara.]试管苗茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究。结果表明:1～2cm嫩梢在培养基MS+0.5mol/L蔗糖上培养3d,切取2～3mm茎尖,室温(20℃)下装载液(60%PVS2)过渡30min,0℃下玻璃化液(PVS2)处理45min,投入液氮保存1d后,40℃水浴化冻,1.2mol/L蔗糖的MS培养基洗涤20min,接种于6-BA0.8mg/L、IAA0.05mg/L的MS培养基上,暗处理1周后转到正常光下,成活率达到86%,再生植株生长和分化正常。     

莪术茎尖玻璃化法超低温保存技术

为莪术种质资源稳定保存提供一条新途径。以莪术组培苗茎尖为试材,用玻璃化法进行超低温保存后,于25℃用0.1%TTC溶液培养24 h后检测生活力。结果表明,切取2~3 mm长、继代培养60 d的莪术组培苗茎尖,避光条件下,用含0.3 mol/L蔗糖的MS固体培养基预培养7 d,室温下,茎尖用60%的PVS2装载液装载10 min,0℃用100%的PVS2玻璃化保护液对茎尖脱水处理30 min,快速投入液氮中进行超低温保存16 h;取出茎尖于40℃水浴中解冻2 min,室温下用US溶液洗涤20 min,立即用0.1%TTC溶液于25℃人工气候培养箱中培养24 h,莪术茎尖的生活力最高可达100%。表明该方法可用于莪术种质资源的保存。     

桃叶卫矛茎尖超低温保存及再生

以桃叶卫矛(Euonymus bungeanus Maxim.)为材料,选用茎尖作为外植体进行超低温保存,以期探索桃叶卫矛种质资源保存的新途径。桃叶卫矛茎尖超低温保存中茎尖最适长度为2~3 mm;在预培养阶段,预培养液中蔗糖最适浓度为0.4 mol/L,最佳预处理时间为2 d;在装载液处理阶段,最佳装载时间为10 min;在PVS2溶液处理阶段,最佳处理时间为60 min;在卸载液处理阶段,最佳处理时间为10 min;当茎尖洗涤完毕后应将其接种于1.0 mg/L 6-BA的MS培养基上进行恢复培养,暗培养7 d后转入正常光照下进行培养,茎尖成活率可达70%以上。     

紫参薯的包埋玻璃化超低温保存

以紫参薯带芽茎段为材料,采用2%海藻酸钠和0.1mol/L氯化钙凝胶系统制备包埋珠,液氮保存,以茎段细胞活力和包埋珠成活率为指标筛选获得有关参数适宜水平,比较冻后再生苗与常温苗形态及生理指标.结果表明:紫参薯试管苗经4℃锻炼6d后,无菌条件下制备其带芽茎段包埋珠,接种到MS+2 mg/L KT+0.2 mg/L NAA+0.5mol/L蔗糖液体培养基中预培养1d,转入MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖溶液中室温下装载40min,在玻璃化保护剂PVS2中脱水40min,更新PVS2后迅即液氮保存,24h后置于37℃水浴中化冻5min,用MS+2mg/L KT+0.2mg/L NAA+0.8mol/L蔗糖溶液洗涤3次(每次10min),然后转入MS+2mg/L KT+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+1g/L活性炭固体培养基中,暗培养7d后转至光照下培养14d,该包埋珠成活率可达60%.冻后再生苗诸多形态和生理指标与常温苗差异不具有统计学意义.     

利用玻璃化超低温技术脱除草莓斑驳病毒(SMoV)的初步研究

以携带草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus)的‘红颜’草莓为材料,通过对玻璃化超低温脱毒技术中各程序的优化,建立适合‘红颜’草莓的茎尖玻璃化超低温脱毒体系。结果表明:1~2mm的茎尖在0.5mol/L蔗糖的预培养基预培养3~7d,室温装载处理60min,0℃玻璃化处理180min,液氮冷冻60min,40℃解冻2min,高糖溶液卸载20min后接种到MS+2.0mg/L 6-BA再生培养基上,成活率可达70%以上。再生培养60d后,随机选取20株再生植株,利用RT-PCR技术检测草莓斑驳病毒的脱毒效果,脱毒率为100%。利用该体系可以克服传统茎尖脱毒受茎尖大小的限制(0.1~0.3mm),并有效脱除草莓斑驳病毒。     

木薯茎尖包埋-玻璃化法超低温保存及植株再生

主要探讨装载时间、蔗糖浓度、预培养时间和PVS2处理时间对木薯种质超低温保存后成活率的影响.结果表明,长约1.5 mm的木薯茎尖用海藻酸钙包埋后,在含有2 mol.L-1甘油和0.4 mol.L-1蔗糖的装载液装载30～40 min,然后在含有0.5mol.L-1蔗糖的改良MS培养基上预培养2 d,0℃下PVS2处理4 h后快速投入液氮(LN),1 h后取出,在40℃水浴中化冻90 sec,用含有1.2 mol.L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,接种于恢复培养基中(MS 0.02mg.L-1NAA),暗培养3～5 d,转移至正常光下,最高成活率接近70%;再生植株生长和分化正常.     

玻璃化法超低温保存甘薯茎尖

对甘薯离体茎尖玻璃化法保存技术进行了初步探究。结果表明,预培养2 d,100%的PVS2溶液0℃处理30 min,液氮冻存2 d,40℃快速化冻后用附加蔗糖1.2 mol/L的MS液体培养基洗涤20 min,接种在MS 6-BA1.5 mg/L NAA0.1 mg/L GA30.05 mg/L培养基上的茎尖成活率最高。     

甜樱桃砧木吉塞拉离体茎尖玻璃化法超低温保存研究

为保持甜樱桃矮化砧木吉塞拉的遗传稳定性和避免种质遗传资源丢失,以玻璃化法超低温冷冻保存过程中涉及的主要因子设计正交试验,摸索适合吉塞拉的最佳保存体系;设计单因子试验,观察不同单因子对吉塞拉超低温冷冻保存的影响。结果表明,取生长90 d的组培苗于4℃低温锻炼3周或4周,剥取茎尖放于含0.3 mol/L蔗糖的预培养液中预培养1 d,在装载液中渗透30 min,用PVS3玻璃化试剂0℃处理60min后投入到液氮中保存24 h,取出后经40℃水浴快速化冻1 min,卸载液洗涤两次,每次10 min,后置于恢复培养基上,茎尖的存活率最高且遗传稳定性好。本试验成功建立了甜樱桃矮化砧木吉塞拉的玻璃化法超低温保存技术,为甜樱桃种质资源的长期保存提供了一条有效途径。     

树莓茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

为了建立适于树莓茎尖的超低温保存技术程序,试验以树莓茎尖为试材,对树莓玻璃化法超低温保存进行了研究。结果表明适于树莓的超低温保存技术流程是先低温驯化21d,在含0.8mol/L蔗糖的固体培养基预培养4d,再经玻璃化液(PVS2)处理120min后浸入液氮,解冻后茎尖存活率达75%。     

菠萝茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

以菠萝为试材,建立试管无性系,进行玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,约2.0 ～3.0 cm的菠萝茎尖于含有0.Smol/L蔗糖的培养基上预培养l～2d,剥取含1～2片叶原基(1.0～2.5 mm长)的茎尖,室温(25℃)下用LS装载液预处理50min,再用PVS2溶液于0℃下处理40 min,换入新鲜的PVS2溶液后迅速投入液氪,保存24h后在40℃水浴中迅速化冻90 s,用1.2 mol/L的蔗糖培养液洗涤2次,每次10 min,然后转入含0.3 mol/L蔗糖的MS培养基上,暗培养48 h后转入含BA 0.5 mg/L的MS培养基上,暗培养1周后转移到正常光下,4个菠萝品种(澳大利亚卡因、夏威夷、巴厘、台农16号)的成活率分别为96.5％、95.3％、78.6％、87.7％,再生率分别为93.2％、92.6％、76.7％、87.7％.再生植株生长和分化正常,其形态上与对照一致,生根后可移栽成活.     

罗汉果茎尖玻璃化法超低温保存初探

对罗汉果试管苗茎尖玻璃化法超低温保存进行了初步研究。结果表明,切取继代15 d生长健壮的罗汉果试管苗茎尖,长2~3 mm,在25℃下用60%PVS2(玻璃化保护液)预处理40 min,再用100%PVS2在0℃处理50 min,更换新鲜PVS2后投入液氮保存24 h,于40℃水浴中快速解冻2 min,用MS+410.8 g/L蔗糖的液体培养基洗涤40 min,滤纸吸干后接种到MS+1.0 mg/L6-BA+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L GA3+0.7%琼脂粉+45 g/L蔗糖的固体培养基上,25℃暗培养7 d,转入正常光下培养。1周时的存活率最高可达94.56%。