马流感病毒(A/Equine/Qinghai/1/94)神经氨酸酶基因的克隆与同源性分析

本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶(NA)基因序列，设计并合成一对特异性引物，经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株(A／Equine／Qinghai／1／94)NA基因，将片段连接到PGEM—T-easy载体并转化DH5a，提取阳性菌落的质粒经EcRol酶切和PCR鉴定其大小均为1．4Kb左右，对其测序并构建NA基因进化树。经过比较分析发现，我国马流感病毒青海株与A／Equine／Alaska/1／91、A／Equim／Tennessee/5／86和A／Equine／Algiers/72等关系较近，核苷酸同源率为98．2％—97．4％；与我国马流感吉林株(A／Equine／Jilin／1／89)关系较远，核苷酸同源率仅为72．0％；而与H7N7亚型马流感病毒A／Equine／Prague／1／56核苷酸同源率仅为38．0％。     

马流感病毒A/马/青海1/94株亚型鉴定及其HA基因序列特征

本试验用AI标准阳性分型血清对我国马流感病毒A／马/青海/1／94进行了血凝素(H)和神经氨酸酶(N)的鉴定，并与马流感病毒吉林株、黑龙江株、北京株及国际标准株A／切ukx／Mgxd／2／63进行了对比，结果显示，1944年在我国青海省暴发的马流感病毒的亚型为H3N8；以反转录。聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增该株的血凝素基因，并克隆到pGEM-Teasy载体上，采用双脱氧末端终止法测定该cDNA片段共1738个核苷酸序列，并推导出其编码的565个氨基酸的序列。利用Genbank blast和基因进化树分析软件分析各毒株之间的亲缘关系，发现A／马/青海/1/94与1992年香港马流感分离株存在较近的亲缘关系。     

马流感疫苗研究进展

马流感(Equine influenza,EI)是由正黏病毒科、流感病毒属的A型流感病毒中的马流感病毒(Equine influenzavirus,EIV)引起的马属动物一种严重的上呼吸道急性高度接触性传染疾病,多呈暴发性流行,传播迅速而且范围广泛.OIE规定马流感为法定报告动物疫病,我国将其列为三类传染病.     

黑龙江省一株马流感病毒的全基因组测序及同源性分析

通过采集一匹患病马的病料及后续的病毒分离、病毒核酸提取、RT-PCR、连接T载体等一系列分子生物学技术,对病毒核酸进行测序,经NCBI比对分析,获得一株H3N8亚型马流感病毒。将获得的毒株与我国分离的A/equine/Jilin/1/1989禽源性毒株、2002年美国肯塔基分离株A/equine/Kentucky/1/02（美洲谱系Florida亚型）、A/equine/Argentine/77（美洲谱系Argentine亚型）等有代表性毒株进行同源性分析,发现该毒株与Florida-2型马流感病毒基因片段的同源率最高。根据马流感病毒的命名规则,将这毒株命名为A/equine/Heilongjiang/1/2010。本次所分离到的黑龙江株马流感病毒,丰富了我国马流感病毒资源库,为我国马流感流行病学研究、诊断技术及疫苗研究提供了重要基础。     

宠物鸟H3N8亚型流感病毒HA基因的特征性分析

来自香港和世界各地的10株宠物鸟H3N8流感病毒的HA基因进行了全基因序列测定,用DNASTAR和Tree-View软件进行序列编辑,序列翻译,进化树绘制和分子演化分析.结果表明来自不同国家和地区的H3N8流感病毒的HA基因都非常相似,都形成一个独立的分支,属于欧亚亚系,同源率为95.9%～100%;香港2001年宠物鸟的毒株之间的同源率最高,分别为99.2%～100%.HA基因与A/Equine/Jilin/89(H3N8)的同源性为最高,在92.9%～93.6%之间.氨基酸分析表明只有A/Parakeet/Netherland/33/01的HA基因在97～99受体结合位点处有一个额外潜在的糖基化位点NKT;因此可见宠物鸟H3N8流感病毒的HA基因高度保守,HA基因均来自共同的祖先.     

禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因序列分析

采用RT_PCR技术,以A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)RNA为模板,扩增了1.73kb 的HA 全基因cDNA。将HAcDNA克隆后进行了序列测定,测序结果表明所扩增的1728 个核苷酸片段包含了完整的HA基因的开放阅读框架和上下游引物序列、蛋白质合成的起始密码子和终止密码子。核苷酸序列比较分析结果表明:A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1) 与A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)有11 个核苷酸差异,同源率99.4% ;与A/HongKong/156/97(H5N1) 有25 个核苷酸差异,同源率98.6 % ;与A/Chicken/HongKong/258/97 (H5N1) 有30 个核苷酸差异,同源率98.3% ;它们的氨基酸序列同源率依次分别为99 .2 % 、98.6% 和98.1% 。受体结合位点的氨基酸序列完全一致;HA裂解位点氨基酸序列也完全一致,各有5 个碱性氨基酸插入。这说明上述4 个流感病毒分离株可能来自同一个祖先,具有相同的毒力和相似的生物学特性。     

马流感病毒A/Equine/Huabei/01/07(H3N8)对灵缇犬的实验性感染

为了解灵缇犬对马流感病毒A/Equine/Huabei/01/2007(H3N8)的易感性,将马流感病毒培养液以1.0 mL(含105.7EID50)经静脉途径接种4条灵缇犬,另以2.0 mL(含2×105.7EID50)经滴鼻、点眼方式接种3条灵缇犬。采用临床症状和病理学观察、免疫酶组织化学染色技术、病毒分离、HI抗体检测和流感病毒受体类型检测技术,对病毒在灵缇犬体内的感染情况进行了系统研究。结果表明,感染的7条犬在整个试验观察期间体温等临床指标均无异常变化,未见明显的肉眼和组织学病变。感染后5 d,4条感染犬的气管、支气管和细支气管上皮细胞内流感病毒M蛋白均为阳性,1条犬的咽拭子病毒分离结果为阳性,1条犬的马流感病毒H3亚型HI抗体阳性。感染后14d,剩余3条感染犬中有2条犬马流感病毒H3亚型HI抗体呈阳性。试验证明,目前流行的A/Equine/Huabei/01/2007(H3N8)病毒可以感染灵缇犬,但不导致灵缇犬出现明显的临床症状。灵缇犬的喉头、气管上皮细胞具有与马流感病毒结合的SAα2,3 Gal受体。     

马流感的防治

马流感是马流行性感冒（Equine Influenza）的简称,是由马流行性感冒病毒（简称马流感病毒,Equine Influenza Virus）引起马属动物的一种急性高度接触性传染病,在临床上以发热、咳嗽及流浆液性鼻汁为主要特征。多呈暴发性流行,发病率高而死亡率低。     

鸭源H5N1亚型高致病性禽流感病毒的分离鉴定及其HA和NA基因的生物信息分析

分离到1株 H5N1亚型高致病性禽流感病毒, 经序列测定发现HA蛋白裂解位点上插入多个连续的碱性氨基酸（PQREIRRKKR*G）,从分子上证实是一株高致病性禽流感病毒。核酸序列比较分析结果表明,分离的流感病毒HA基因与A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)同源率最高,达到98.8%;NA基因与A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1) 和A/chicken/Jiangsu/cz1/2002(H5N1)同源率最高,达到98.7%。氨基酸水平上,HA与A/duck/Viet Nam/Ncvd1/2002(H5N1)同源率最高,可达99.3%;NA与A/chicken/Jiangsu/cz1/2002(H5N1)同源率最高,达98.7%。HA与NA基因的潜在糖基化位点与作者所选参比毒株一致。通过遗传进化树分析结果表明,A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)可能是该毒株的来源株。     

H3N8亚型马流感病毒单克隆抗体的制备及鉴定

以灭活马流感病毒(EIV)A/Equine/Jilin/1/1989(H3N8)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合后,用血凝抑制试验(H1)和间接ELISA方法筛选获得3株(3C2、5G10和5A10)能稳定分泌H3N8亚型马流感病毒单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株.其中3C2和5G10为IgG2α,5A...     

猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究

为确定猪捷申病毒(Porcine Teschovirus,PTV)Swine/CH/IMH/03株免疫原性,本研究将该PTV分离株灭活后分别与氢氧化铝佐剂和Montanide ISA 50V2佐剂混合,制成油佐剂疫苗,并采用不同免疫程序接种实验猪后对病毒抗体进行检测。抗体检测结果表明:PTV Swine/CH/IMH/03分离株能够诱导实验动物产生较高抗体水平,并显著高于对照组;与氢氧化铝佐剂混合制成的佐剂疫苗免疫效果优于Montanide ISA 50V2佐剂;而且一次免疫组与二次免疫组没有明显差异。通过PTV Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究,为后续猪捷申病的预防工作提供技术支持。     

新城疫病毒分离株APMV1/chicken/China/JL-11/02的致病性研究

将在吉林省分离到的一株新城疫病毒APMV1／chicken／china／JL-11／02(基因Ⅶ型)蚀斑纯化后，与我国标准毒株F48E9分别接种42日龄无抗体SPF雏鸡和已获得LaSota疫苗、Clone30疫苗(基因Ⅱ型)抗体的高免雏鸡(抗体效价为1：64～1：128)。结果表明无抗体雏鸡感染JL—11和F48E9后，144h内全部死亡，病死鸡的大部分组织中都检测到病毒；但JL—11与F48E9对高免抗体鸡致死效果不同，JL—11的致死率为28．5％，F48E9的致死率为7．14％。由此可见，生产中常用的ND疫苗并不能完全保护目前流行株的攻击，这可能是养禽生产中高免抗体鸡群发生免疫失败的主要原因之一。为此建议应在传统疫苗免疫的基础上进行新型流行株灭活苗的加强免疫，以提高免疫效果，降低ND的发生率。     

First recovery of A/equine/Fontainebleau/1/79 influenza viruses in Italy

In Italy epizootics of equine influenza often occur, but no virus isolation has been reported since 1971. This paper describes the antigenic and biochemical characterization of two equine influenza viruses isolated in Italy from 1985 to 1989. The virus isolates were shown to differ antigenically from earlier strains of the same subtype, A/equine/Miami/1/63 (H3N8). Monoclonal antibody analysis showed that the haemagglutinins of these strains were serologically indistinguishable from A/equine/Fontainebleau/1/79, a variant of A/equine/Miami, never isolated in Italy before. One of the two virus isolates was obtained from a horse immunized with a bivalent inactivated influenza vaccine, not containing A/equine/Fontainebleau/79 antigens.

The vaccine failure underlines the importance of antigenic relatedness between currently circulating viruses and vaccine strains. Therefore, to improve the protection afforded by equine immunization, the vaccine composition should be decided according to the results of a virological surveillance activity, systematically conducted among horses.     

鸭源流感病毒人工感染鸡的病毒抗原定位动态

研究了由南京地区分离的鸭源流感病毒A/duck/Nanjing/21/95（H9N2？）感染商品来航鸡后，各组织脏器中病毒分离情况和病毒抗原分布。结果表明，禽流感病毒（AIV）可以从肾脏、肺脏、脾脏和心脏中分离出来，接种后3d(PI3），病毒在组织中的分离率最高，且又以肾脏的分离率最高。病毒抗原主要分布在肾小管上皮细胞、呼吸系统单核细胞和少量上皮细胞的胞核内，PI3时病毒抗原的检出率最高。这些结果表明，肾脏是该毒株复制的主要部位，肾脏的病变是病毒直接损伤的结果，而且该株AIV具备在呼吸系统内复制的潜力。     

OPG/RANKL/RANK系统的生理功能

骨是一个代谢活跃的器官,在整个生命周期中都在进行不断的更新与重建。在骨形态发生和重建的过程中主要受到细胞因子和激素的调节,同时骨代谢也受到OPG/RANKL/RANK系统的调控。论文主要对骨骼生理结构与骨组织细胞之间的关系,骨代谢和骨的形成过程,OPG/RANKL/RANK系统的生理功能,OPG/RANKL/RANK系统的影响因子以及骨代谢紊乱所引起的疾病几个方面作一综述。     

H5N1亚型猪流感病毒A／Swine／Fujian／1／01感染性克隆构建及其对小鼠致病性研究

2001年从福建某猪场分离到1株H5N1亚型猪流感病毒(SIV)A/Swine/Fujian/1/01(SW/FJ/1/01).SW/FJ/1/01对小鼠具有强致病性,致死率为100%,为进一步研究SW/FJ/1/01对BALB/c小鼠致病性的分子基础,本研究构建了SW/FJ/1/01的8个节段重组质粒构成的反向基因操作系统,成功拯救了病毒(R-SW/FJ/1/01).R-SW/FJ/1/01和野生型SW/FJ/1/01对BALB/c小鼠致病性没有差别.SW/FJ/1/01反向基因操作系统的建立为进一步阐明H5N1亚型SIV对哺乳动物模型BALB/c小鼠的致病机制等方面的研究奠定了基础.     

发酵中药渣对犊牛生长发育和健康状况的影响

[目的]为研究发酵中药渣对犊牛生长发育、健康状况的影响。[方法]在宁夏固原市肉牛良种繁育示范园随机选取150头犊牛作为试验牛群,采用配对试验设计,试验分为对照组和发酵中药渣组。[结果]日粮中添加发酵中药渣,犊牛采食量增加0.09 kg,日增重增加0.09 kg,料重比(F/G)减少0.06 kg;体重多增加5.2 kg,提高4.4% ,体高、胸围、体斜长分别增长 4.2 cm、5.6 cm、4.4cm,分别提高了4.5%、5.1%、4.1%;试验组滨州筛第 1,2 层筛上物比例下降,说明犊牛消化能力增加,饲料消化率提高;血液总蛋白和白蛋白含量均显著高于对照组;谷丙转氨酶含量显著低于对照组;谷胱甘肽、过氧化物歧化酶、免疫球蛋白G含量显著高于对照组。[结论]在犊牛日粮中添加发酵中药渣可增加犊牛的采食量和日增重,提高饲料报酬,提高血清总蛋白,降低谷丙转氨酶水平,增加过氧化物歧化酶活性,提高犊牛免疫力。