三种试剂盒检测猪口蹄疫O型抗体的对比试验

使用三种猪口蹄疫O型抗体检测试剂盒分别检测接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫抗体,以探讨三种抗体检测试剂盒的相关性。结果发现,猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒和猪口蹄疫O型液相阻断ELISA试剂盒都可检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗,两种试剂盒的相关性达90.8%,而间接血凝试剂盒不能用来检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗;猪口蹄疫O型液相阻断ELISA试剂盒和间接血凝试剂盒可用来检测猪口蹄疫O型灭活疫苗,两种试剂盒的相关性达93.7%,而猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒不能用来检测猪口蹄疫O型灭活疫苗。     

不同方法检测猪O型口蹄疫疫苗抗体效价与攻毒保护相关性研究

为评价不同检测方法检测的口蹄疫疫苗抗体效价与免疫保护率的相关性,使用O型液相阻断ELISA、正向间接血凝试验、VP1结构蛋白抗体ELISA三种检测方法对免疫不同类型O型口蹄疫疫苗的60头猪进行血清抗体跟踪测定,免疫21 d后,分别用OZK/93和O/(XJ/10-11/MYA/98)毒株进行攻毒保护实验.数据统计和分析结果显示,0型液相阻断ELISA试验测定的抗体效价与攻毒保护率存在着极显著的正相关性(P＜0.01),相关系数为0.75;正向间接血凝试验测定的抗体效价以及VP1结构蛋白抗体ELISA法测定的S/P值与攻毒保护率之间均不存在线性相关关系(P＞0.05).试验表明,O型液相阻断ELISA抗体检测方法可作为田间猪O型口蹄疫疫苗免疫效果的评价方法.     

猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立

根据猪口蹄疫O型流行毒株VP1序列设计出5条合成肽,以固相法合成并以此合成肽作为包被抗原建立猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性、重复性等进行验证。结果表明:该检测方法敏感性为96.0%,特异性为99.1%,批内与批间重复试验变异系数小于10.0%。比对试验结果显示,该检测方法与UBI猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒符合率为93.2%,与中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒符合率为85.7%。该猪口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法敏感性好、特异性强、稳定性高、操作简便,可用于检测O型口蹄疫抗体水平。     

猪O型口蹄疫合成肽疫苗及猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫效果对比试验

使用猪O型口蹄疫合成肽疫苗与猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫30-40日龄商品猪,免疫采用正向间接血凝试验、液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA检测免疫前和首次免疫后14d、28d、35d、42d、56d及二次免疫后7d、14d、28d抗体水平。同时,对接种疫苗的实验猪进行免疫应激观察。结果显示:注射合成肽疫苗试验猪未出现不良免疫副反应;采用正向间接血凝试验检测,两种疫苗免疫抗体合格率差异不显著;运用液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA进行检测,注射合成肽疫苗试验猪二免7d后抗体水平快速上升,抗体检测合格率达到73%-100%。与注射高效灭活苗组比较表明:合成肽疫苗临床使用的安全性较高,免疫抗体合格率明显优于猪O型口蹄疫高效灭活苗。     

四种试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体的对比试验

使用国产的4种猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒(VP1-ELISA)、猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒(LB-ELISA)、猪口蹄疫正向间接血凝试剂盒、猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒(O-ELISA)同时检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后的50份血清样品,阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%。同时使用农业部规定的3种试剂盒分别检测20份血清样品的抗体滴度发现,VP1-ELISA试剂盒和LB-ELISA试剂盒阳性符合率为95%,平均抗体滴度相差0.7,与IHA试剂盒符合率为55%,平均抗体滴度相差3.8,故LB-ELISA试剂盒可以用来评价合成肽疫苗免疫的抗体,而IHA试剂盒不能用来检测合成肽疫苗免疫的抗体。     

不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测

为更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果与合理的检测方法,浦口区兽医站在某猪场进行了此次试验。试验猪分3组,分别注射不同厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗、猪口蹄疫O型(OZK/93株+OS/99株)灭活疫苗,并采用猪O型口蹄疫VPI抗体检测试剂盒、口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验(HI)分别对使用上述口蹄疫苗免疫效果进行检测。结果表明,猪注射口蹄疫O型合成肽疫苗后,用猪O型口蹄疫VPI抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率达到100%;用正向间接血凝和液相阻断ELISA方法检测不到注射合成肽疫苗后产生的抗体效价。免疫猪口蹄疫O型(OZK/93株+OS/99株)灭活疫苗后,用VPI抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率只有40%;用HI方法进行检测,抗体阳性率为75%;用液相阻断ELISA方法进行检测,抗体阳性率为70%。     

O型口蹄疫抗体金标检测试纸条判定标准的确立

本试验旨在迅速、准确检测口蹄疫阴性血清和阳性血清,确立O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准。通过3批次O型口蹄疫抗体金标检测试纸条,对180份猪、牛、羊口蹄疫阴性血清,197份猪、牛O型口蹄疫弱阳性血清,317份猪、牛、羊O型口蹄疫阳性血清,223份牛Asia 1、A型口蹄疫阳性血清,600份田间血清样品进行检测,同时用O型口蹄疫液相阻断ELISA和O型口蹄疫正向间接血凝2种方法检测相同的血清样品。对3种方法检测的结果进行分析,并且将试纸条的检测线和质控线的显色情况与O型口蹄疫液相阻断ELISA的抗体滴度相比较。确立了试纸条的诊断标准:试纸条抗体滴度1∶2-为口蹄疫抗体阴性;试纸条抗体滴度1∶8+为O型口蹄疫阳性血清。根据试纸条的显色结果与液相阻断ELISA的结果的关系,绘制了比色卡。试纸条的判定标准检测血清结果与液相阻断ELISA和正向间接血凝结果分别进行统计学分析,试纸条与液相阻断ELISA和正向间接血凝相关性分别为y=1.142x+0.7421,y=1.1845x+0.8623;相关系数(r)分别为0.9221和0.9033。结果显示,O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准的确立和比色卡的绘制,实现半定量分析,更加迅速、准确,适于实验室、基层兽医站和养殖场使用。     

口蹄疫灭活疫苗与合成肽疫苗免疫效果对比试验

使用猪O型口蹄疫高效灭活疫苗与猪O型口蹄疫合成肽疫苗免疫28~35日龄商品猪,采用正向间接血凝试验和VP1结构蛋白抗体ELISA检测免疫前和首次免疫后14 d、28 d、35 d、42 d、56 d及二次免疫后7 d、14 d、28 d抗体水平。同时,对接种疫苗的实验猪进行免疫应激观察。结果显示:注射两种疫苗试验猪未出现不良免疫副反应;采用正向间接血凝试验检测,两种疫苗免疫抗体合格率差异不显著;运用VP1结构蛋白抗体ELISA进行检测,注射合成肽疫苗试验猪二免7 d后抗体水平快速上升,抗体检测合格率达到73%~94.12%。O型口蹄疫灭活免疫抗体不适宜用此检测方法。     

O型口蹄疫抗体不同检测方法的检测结果比较分析

为更好开展O型口蹄疫免疫质量评估,客观评价不同抗体检测方法的相关性和特点,试验选择猪、牛、羊血清样品299份和2个规模猪场日常检测血清样品180份,采用正向间接血凝(IHA)、液相阻断ELSIA(Lp B)和VP1结构蛋白ELISA(VP1)三种方法进行0型口蹄疫免疫抗体检测。结果显示,采用IHA方法检测的免疫抗体更符合临床实际免疫变化规律。采用合成肽疫苗免疫的猪场不宜采用IHA方法检测抗体,但可采用Lp B和VP1方法检测,两种方法检测结果符合率较高。     

国内外口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA检测方法和1种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阻断ELISA检测方法,在检测牛血清时的敏感性和特异性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的有效试剂盒。采用国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA试剂盒和1种阻断ELISA试剂盒,对150份牛血清样品进行ELISA检测。同时对150份样品进行非结构蛋白抗体酶联免疫电转移印迹试验(EITB),以评估4种ELISA检测结果。结果 4种试剂盒的敏感性均达到100%,特异性分别为100%、95%、73%、99%。结论:国内生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒可以用于牛口蹄疫血清学筛选性试验。     

牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立

根据牛口蹄疫O型3个拓扑型VP1序列设计3条合成肽,以此为包被抗原建立牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性和重复性进行验证。结果显示,该方法敏感性为96.7%,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.1%~9.8%和3.5%~10.7%。与2种商品化试剂盒比较,符合率分别为93.5%和85.9%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、稳定性高,可用于牛口蹄疫O型抗体水平检测。     

两种口蹄疫抗体检测方法的操作体会

正免疫抗体效价检测,已成为现代动物疫病防控科学评价动物免疫接种效果的有效方法之一。正向间接血凝试验通常只用于O型口蹄疫抗体检测,该方法主要利用口蹄疫抗原来检测血清中是否含有口蹄疫抗体或判定抗体滴度能否达到免疫保护标准。液相阻断ELISA适用于O型、亚洲I型和A型口蹄疫抗体检测,其操作较正向间接血凝试验相对繁琐,但该方法精准性和稳定性高,既能评价口蹄疫免疫情况,又能检测口蹄疫病毒     

不同试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体的对比试验

使用口蹄疫O型正向间接血凝抗体试剂盒(IHA)和2个厂家生产的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒(VP1-ELISA)分别检测接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后不同时间的抗体合格率,以探讨3种抗体检测试剂盒的相关性。结果显示,IHA试剂盒与两种VP1-ELISA的符合率较差,分别为11.7%、12.5%,I HA试剂盒不能用于检测合成肽疫苗免疫抗体;VP1-ELISA试剂盒可以科学评价合成肽疫苗免疫抗体,两种VP1-ELISA试剂盒的平均符合率为93.6%,但是VP1-ELISA(UBI)试剂盒的稳定性高于VP1-ELISA(Z)试剂盒。     

3种方法检测猪O型口蹄疫母源抗体消长规律的研究

为探究口蹄疫疫苗的最佳免疫日龄,明确猪口蹄疫母源抗体在体内的消长规律,良圻原种猪场在A猪场随机选取30头53日龄的保育猪,应用间接ELISA、液相阻断ELISA及间接血凝3种不同方法对其进行母源抗体的跟踪监测。结果显示,在53、63、83、93日龄,间接ELISA的阳性率都远高于其它两种监测方法,但3种监测方法的抗体水平都呈下降趋势,并在83日龄时抗体阳性率均下降至较低水平。通过试验初步确定首次免疫猪O型口蹄疫的最佳日龄为70日龄,且间接ELISA方法敏感性高于液相阻断ELISA及间接血凝。     

两种试剂盒检测牛羊口蹄疫O型抗体的对比试验

为了探索快速检测牛羊口蹄疫O型抗体的方法和准确性,使用HI、液相阻断ELISA两种试剂盒对牛、羊194份血清进行口蹄疫O型抗体检测,以探讨其相关性和特点。结果发现,液相阻断EILSA试剂盒对牛羊血清的检测灵敏度高,血清HI效价与液相阻断ELISA检测的效价不成正相关。液相阻断EILSA检测灵敏度明显高于正向间接血疑试验。     

不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测方法评估

为更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果与合理的检测方法,广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场在某肥育场进行了此次试验。试验猪分3组,分别注射不同厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型OS／99株灭活疫苗,并采用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验（HI）分别对使用上述口蹄疫疫苗免疫效果进行检测。结果表明,猪注射口蹄疫O型合成肽疫苗后,用猪0型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率达到100％;用正向间接血凝试验方法检测不到注射合成肽疫苗后产生的抗体效价。免疫猪口蹄疫O型OS／99株灭活疫苗后,用VP1抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率只有30％;用HI方法进行检测,抗体阳性率为60％。     

以合成肽为抗原检测O型口蹄疫病毒抗体 ELISA方法的建立和评价

作者以固相法合成特异性FMDV主要保护性抗原VP1上的表位肽,将其与载体蛋白BSA偶联,作为包被抗原,制备检测抗O型口蹄疫病毒(FMDV)抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核.结果表明该方法的敏感性为95.12%,特异性为100%.检测199份血清标本,与UBI FMD VP1试剂盒的符合率达到98.49%,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达到96.98%.该多肽ELISA试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控口蹄疫抗体水平.     

口蹄疫O型、AsiaⅠ型免疫抗体的检测

用口蹄疫O型和Asi aⅠ型双价疫苗对牛、羊进行免疫,于免疫后一个月和五个月,分别用口蹄疫O型和Asi aⅠ液相阻断ELISA型试剂盒进行抗体监测。结果牛在免疫后一个月,O型抗体水平≥1:128的占91.96%,免疫后五个月O型和Asi aⅠ型的抗体仍维持较好水平,≥1:128的比率接近50%,说明免疫效果较理想。同时对免疫后一个月血清的液相阻断ELISA法和正向间接血凝法(IHA)测定结果进行了比较,经统计学分析,其相关系数为r=0.8854,说明两种方法检测结果较相近,两者间有较好的相关性,且液相阻断ELISA法比IHA所测定的滴度普遍偏高。     

O型口蹄疫病毒固相阻断ELISA抗体检测方法研究

以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5μg/m L;兔抗血清最佳工作浓度为16 000倍稀释,酶标二抗为8 000倍稀释;抑制率大于20%为阳性,抑制率小于20%为阴性;该方法与常见病原体无交叉反应,特异性和敏感性好,可以检测O型口蹄疫病毒VP1抗体,评价口蹄疫疫苗的免疫效果。     

牛用口蹄疫AsiaⅠ-O型双价灭活苗与猪用口蹄疫O型灭活苗对猪的免疫效果比较试验

使用牛用口蹄疫AsiaⅠ-O型双价灭活苗与猪用口蹄疫O型灭活苗分别接种50d商品猪和怀孕90d种猪,免疫前和免疫后的3w及7w进行抗体水平检测。O型口蹄疫采用正向间接血凝试验、AsiaⅠ型口蹄疫采用液相阻断ELISA检测。同时对接种猪进行免疫应激观察。结果显示:猪使用牛用口蹄疫AsiaⅠ-O型双价灭活苗3W后口蹄疫AsiaⅠ的抗体水平十分低,最高只有5%,口蹄疫O型抗体合格率在35%以上;而注射猪用口蹄疫O型灭活苗的O型抗体水平合格率只有35%。而牛用口蹄疫AsiaⅠ-O型双价灭活苗两次接种后,Asia I和O型抗体水平均达到大于70%的要求。