江苏部分地区猪圆环病毒2型的分子流行病学检测

根据猪圆环病毒2型（PCV2）基因序列,设计1对特异性PCV2的鉴定引物,利用PCR方法对65份疑似PCV2感染的病料进行检测。PCR检测为阳性的病料经处理后,接种无PCV污染的Dulac细胞进行间接免疫荧光检测。对各分离毒株的全基因组进行PCR扩增、测序和基因型分析。结果表明：共分离鉴定21株PCV2,均属2b基因型,其中有16株为1C群,5株为1A/1B群。研究显示PCV2b 1C群已在江苏成为流行毒株。     

口蹄疫病毒O型抗体直接竞争ELISA检测方法研究

目的建立一种敏感、特异、快速的O型口蹄疫病毒抗体检测方法。方法以O型口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1和HRP标记VP1兔抗血清为原料,通过方阵滴定试验确定ELISA的反应条件以及阈值,建立直接竞争ELISA检测方法 ,并运用该方法检测已知临床阴阳性样品。结果 VP1抗原包被浓度为50ng/μL;HRP标记抗血清工作浓度为1:2000;抑制率大于30%为阳性,抑制率小于30%为阴性;检测120阳性临床血清,阳性检出率为90.8%;检测120份阴性临床血清,阴性检出率为93.3%。结论研究建立的直接竞争ELISA方法操作简单,能够用于检测口蹄疫病毒O型抗体VP1抗体。     

真菌毒素胶体金检测试剂条质量研究

目的研究真菌毒素胶体金检测试剂条的质量。方法应用胶体金免疫层析技术开发一种快速检测饲料谷物中黄曲霉毒素B1(AFB1)检测试剂条。为使该检测试剂条质量性能指标满足GB 2761-2011《食品中真菌毒素限量》及《饲料卫生标准》要求,通过灵敏度、特异性、实验室高效液相色谱法(HPLC)一致性分析,评价真菌毒素胶体金检测试剂条的质量性能。结果研制的检测试剂条灵敏度99%、特异性97%、假阴性率1%、假阳性率3%、与实验室HPLC法显著性差异分析χ~23. 84,灵敏度高,特异性好。结论研究中的真菌素胶体金检测试剂条能满足食品安全相关国标要求,可用于谷物、饲料中真菌毒素的现场检测。     

O型口蹄疫病毒固相阻断ELISA抗体检测方法研究

以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5μg/m L;兔抗血清最佳工作浓度为16 000倍稀释,酶标二抗为8 000倍稀释;抑制率大于20%为阳性,抑制率小于20%为阴性;该方法与常见病原体无交叉反应,特异性和敏感性好,可以检测O型口蹄疫病毒VP1抗体,评价口蹄疫疫苗的免疫效果。     

鹅源坦布苏病毒SHYG株E蛋白生物信息学分析

为了探索坦布苏病毒E蛋白的抗原结构,以鹅源坦布苏病毒SHYG株E蛋白基因组序列为基础,用DNAStar、Antheprot等软件对E蛋白的二级结构、亲水性、表面可能性、抗原性指数、跨膜结构及等电点等进行预测,用I-TASSER分析E蛋白三级结构.结果表明坦布苏病毒E蛋白等电点为7.15;综合分析显示37～39、80～86、124～126、133～134、233～237、276、315～318、398～399位是可能的B细胞抗原表位,其中80～86、233～237、315～318、398～399位形成抗原表位可能性更高.抗原表位的预测为坦布苏病毒E蛋白的抗原表位的鉴定提供理论依据.     

禽流感病毒H7N9亚型三重荧光PCR检测方法研究

目的建立一套能够同时检测禽流感病毒H7N9经典毒株和新型变异毒株的多重荧光定量PCR方法。方法以禽流感病毒H7N9亚型HA保守基因、HA裂解位点和NA基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,建立三重荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性和敏感性验证。结果参考GenBank收录毒株序列设计引物;探针分别选用ROX、FAM、VIC为荧光基团;阈值设定原则以阈值线刚好超过阴性对照检测荧光曲线的最高点;试剂盒特异性好不受其他亚型流感病毒以及常见禽类病毒的干扰;灵敏度可以达到100~101个EID50。结论该研究建立的荧光PCR检测方法敏感特异,能够用于禽流感病毒H7N9毒株检测。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测中包被抗原的研究

目的研究不同的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原性蛋白对PRRSV抗体ELISA检测效果的影响。方法将PRRSV重组N蛋白、M蛋白和CGP5蛋白3种蛋白抗原单独包被,灵敏度分别为85.0%、60.0%、50.0%。为进一步优化ELISA检测方法 ,以N蛋白为主包被蛋白,M蛋白和GP5蛋白以不同的比例混合包被,研究最佳包被条件。结果当N蛋白、M蛋白和GP5蛋白以5ng:5ng:5ng/孔包被时,敏感性和特异性均达到100%,混包效果优于抗原性蛋白单独包被。为今后PRRSV抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。