环丙沙星完全抗原的制备和间接竞争ELISA检测方法的初步研究

为了研究检测环丙沙星(CIP)残留的间接竞争ELISA方法,试验采用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)一步法将环丙沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫原(CIP-BSA)和包被原(CIP-OVA),用免疫原免疫Balb/c小鼠制备血清多克隆抗体(CIP pAb...     

三聚氰胺的毒害作用及其残留检测

三聚氰胺是塑料工业中一种重要的有机化工中间产品,本文就三聚氰胺的理化特性、代谢机理、毒害作用以及残留检测方法等进行简要阐述.     

特布他林杂交瘤细胞株的建立及其单克隆抗体制备与鉴定

分别通过1,4丁二醚法和EDC法将特布他林偶联于载体蛋白BSA和OVA上,用BSA-TBL免疫BALB/c小鼠,经过3次免疫后,OVA-TBL包被后用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、高敏感性和高特异性的小鼠进行抗原进行冲击免疫;无菌手术取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合建立分泌TBL单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备TBL mAb,并对TBL mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果显示,免疫的6只小鼠血清抗体效价均达到10-4;融合后筛选出4C08-G5和3H3-A02共2株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1∶800和1∶1600,腹水效价分别为1∶2.56×105和1∶1.02×106;4C08-G5株分泌的抗体对TBL的IC50为5.25ng/ml,与瘦肉精、莱克多巴胺等其他β2激动剂交叉反应性小于3%。本试验获得了抗TBL mAb,为TBL残留免疫检测方法的建立奠定了坚实的基础。     

磺胺间甲氧嘧啶全抗原的制备研究

采用重氮化法，将半抗原磺胺间甲氧嘧啶（SMM）与载体牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联，制得磺胺间甲氧嘧啶全抗原SMM—BSA和SMM—OVA。通过其紫外扫描光谱、SDS—PAGE凝胶电泳试验，表明半抗原和载体成功偶联，免疫动物以后可以产生满意效价。这另进一步制备抗SMM抗体提供了良好的免疫原。     

青山羊选育简报

<正> 青山羊是经劳动人民长期选育而成的一个优良羔皮羊种,具有耐粗饲、抗病力强、性温顺、成熟早、繁殖力高等优点,尤其所产青猾皮,具有天然美观的波浪形花纹而著称于世。现将我选育青山羊的情况报告如下: 一、选育方法1.选择喂养种公羊户:在调查了解全社养羊情况的     

抗恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及竞争ELISA试剂盒的研制

利用合成的完全抗原(BSA-ENR)免疫小鼠,通过细胞融合技术和间接竞争ELISA筛选出了能分泌恩诺沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制恩诺沙星残留检测的竞争ELISA试剂盒(competitive ELISA ENR-Kit),并测定其性能。结果表明:筛选出的2株杂交瘤细胞,单抗亚类均为IgG1型,其中4G1-B3株的ENR mAb间接ELISA效价为1:1.024×106,亲和常数(Ka)为9×1010L/mol;竞争ELISA试剂盒的线性检测范围为0.05~101.6μg/L、灵敏度0.05μg/L、半数抑制浓度(IC50)1.1μg/L,与其他化合物的交叉反应率(CR%)均小于0.01%,鸡肉样、鸡肝样、鱼肉样和牛奶样的平均添加回收率分别为81.5%8、7.6%、84.3%和95%,不同基质添加恩诺沙星标准品做竞争ELISA对ENR-Kit检测结果影响小,试剂盒保存期6个月以上。结果说明该竞争ELISA试剂盒具有快速、敏感、特异、简便等特点,适用于ENR残留的快速检测。     

二氟沙星残留检测直接竞争ELISA试剂盒的研制及其性能测定

应用抗二氟沙星单克隆抗体（DIFmAb）杂交瘤细胞株建立直接竞争ELISA分析方法,研制出DIF残留快速检测试剂盒（DIF-Kit）并对其性能进行了测定。特异性试验结果表明与达氟沙星的交叉反应率为0.32％,与其它氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应,该方法对DIF的检测限可达到0.1µg/L,半数抑制浓度IC50为2.2µg/L,线性范围0.1～128µg/L, 平均批内和批间变异系数小于<15%。对牛奶、鸡肉分别添加0.4、2.0、10.0、50.0µg/LDIF标准品,平均回收率分别为89.3%和83.9%。DIF-Kit性能稳定,在4℃可保存6个月。DIF-Kit准确度高、重复性好、特异性强,适用于DIF残留快速检测的推广应用。     

二氟沙星单克隆抗体的研制及其免疫学特性的鉴定

采用改进的碳二亚胺法,将半抗原二氟沙星(DIF)与载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,,制备得到二氟沙星全抗原DIF-BSA和DIF-OVA。采用紫外（UV）,凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定; 用BSA-DIF免疫 BALB/C小鼠, 间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术制备二氟沙星单克隆抗体（DIFmAb）,并对其效价、亲和力和特异性等进行鉴定。结果表明,BSA与DIF偶联成功,分子结合比为1：4.7,筛选出1H10、2F12、4D8共3株敏感特异的杂交瘤细胞, 间接ELISA效价细胞培养上清分别为1:5.12×102、1：3.2×101、1：2.56×102,腹水效价分别为1：2.56×105、1：1.28×105、1：6.4×104。同种亚型分别为IgG1、IgG1、IgG2a,亲和常数（Ka）分别为2.94×1010 L/moL、1.72×1010 L/moL和1.35×1010 L/moL.亲和力最高的1H10对DIF的IC50为1.64ng/ml,单抗与其他氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应。通过试验获得高效价、敏感、特异的mAb,适用于动物性食品中DIF的残留检测的免疫学试验     

恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性

将恩诺沙星(ENR)偶联于载体蛋白BSA,形成完全抗原(BSA-ENR)并免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备分泌抗恩诺沙星的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法生产ENR单克隆抗体。结果筛选出4G1-B3,4G1-G1和4G1-B9 3株敏感特异的杂交瘤。3株单抗对ENR的半数抑制浓度(IC50)分别为1.04 ng/mL,2.44 ng/mL,4.24 ng/mL。4G1-B3与环丙沙星有0.02%的交叉反应,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%;4G1-G1和4G1-B9与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%。