牛流行热病毒人工感染牛外周血淋巴细胞T淋巴细胞亚类的分布研究

通过人工接种，使牛患牛流行热，并以流式细胞术分析了患牛高热期外周血中CD3^ 、CD4^ 、CD8^ 、γδT淋巴细胞和B淋巴细胞的分布情况。结果表明，高热期患牛外周血中CD4^ 细胞数明显升高，说明细胞免疫在牛流行热中的重要性；其它淋巴细胞亚类百分率无显著变化，但CD3^ 、CD8^ 和B淋巴细胞也有一定程度的提高；在反刍动物中起重要作用的γδT淋巴细胞则表现为下降，其作用尚需进一步探讨。本研究首次证明，BEFV可显著刺激牛外周血淋巴细胞CD4^ 的急剧增殖，证明牛流行热病程中细胞免疫可能起着重要作用。     

鸡IFN-γ重组鸡痘病毒对鸡传染性腔上囊炎MB43弱毒疫苗免疫鸡免疫应答的影响

将重组鸡痘病毒（rFPV—IFN-γ）与IBDMB43弱毒疫苗联合接种SPF鸡，研究重组鸡IFN-γ对IBD疫苗免疫效果的影响。结果显示，rFPV—IFN-γ和MB43弱毒疫苗联合免疫组（MB43＋rFPV-IFN-）＂）及rlFN-γ和MB43弱毒疫苗联合免疫组（MB43＋rIFN-γ）在免疫后第2周即可检出ELISA抗体，比MB43疫苗单独免疫组早1周。用IBDVGx株攻击后，MB43＋rFPV-IFN-γ组和MB43＋rIFN-γ组免疫鸡的脾只有个别淋巴细胞核浓缩、核崩解，少数滤泡萎缩变性坏死；胸腺损伤程度轻于MB43疫苗单独免疫组和非免疫对照组。免疫后1周，3个免疫组外周血CD8^＋T淋巴细胞含量均显著高于非免疫对照组，CD4^＋T淋巴细胞含量变化不明显；攻毒后第2周，3个疫苗免疫组CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量均显著升高，各组之间CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞含量无明显差异。证实，rFPV—IFN-γ和rIFN-γ可加强疫苗的细胞免疫和体液免疫应答。     

牛传染性鼻气管炎弱毒疫苗免疫抗体水平与保护效力的关系

利用微量血清中和试验和攻毒试验、牛传染性鼻气管炎弱毒活疫苗检测免疫后牛血清中牛传染性鼻气管炎病毒的抗体效价及其与保护效力的平衡关系。40头牛其中弱毒活疫苗免疫牛30头,对照牛（抗体阴性牛）10头,采用不同剂量免疫（10^3.5～10^6.5TCID50／mL）,按抗体效价高低将实验动物分,并用IBRV LN01／08强毒株攻击,将攻毒保护结果与攻毒时抗体效价结果平行比较分析,结果显示,当IBRV抗体效价高于1：6时,疫苗免疫可以对牛产生良好的保护效力,保护率在80％以上,低于1：6但高于1：3时,免疫苗抗体阳性牛攻毒后保护率近78％。试验结果显示牛传染性鼻气管炎活疫苗的抗体水平于保护效力之间存在一定的平行关系。     

鸡传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗对异源LTJ95Ⅰ株病毒攻击的免疫保护

将共表达鸡传染性支气管炎病毒（mv）S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒（rFPV—IFN-γ S1）接种4周龄SPF鸡,免疫3周后用同源（LX4株）及异源强毒株（LTJ95I）攻毒,评价重组疫苗对异源病毒的保护作用。结果显示,重组疫苗接种1周后,免疫鸡产生抗IBV的抗体;而且外周血中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞的含量略高于非免疫对照组;攻毒后,异源强毒株攻毒的免疫组CD4^＋T淋巴细胞呈下降趋势,并且该组低水平CD4^＋的状态一直持续到试验结束,而其他组CD4^＋T淋巴细胞均迅速上升,峰值达到14．5％;同源强毒株攻毒的免疫组CD8^＋T淋巴细胞呈高水平的表达,而其他组攻毒后均无明显变化;保护率结果显示,同源强毒株攻毒免疫组的发病率和死亡率为21．43％和0％,与其他各组相比均有显著差异;另外同源强毒株攻毒的免疫组病理损伤与异源强毒株攻毒的试验组相比明显减轻,其排毒时间和排毒量也均有所减少;强毒攻毒后所有试验组体重无显著差异。以上结果可以说明,重组疫苗能对同源强毒株产生较好的免疫保护,但不能对遗传关系较远的强毒株产生有效的免疫应答。     

BHV-1感染牛巨噬细胞对CD300a转录的影响

为探究抑制性受体CD300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用，分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株，并建立CD300a基因的荧光定量PCR方法，检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照组CD300a基因的转录变化。将β-actin基因作为内参，使用双标准曲线法计算攻毒组与对照组CD300a基因各时间段的相对表达量，分析CD300a在攻毒前、后的表达差异。结果显示，BHV-1分离株在MDBK细胞上出现典型细胞病变效应，测得其病毒滴度为10^7.23 TCID₅₀/mL。本研究建立的CD300a基因荧光定量PCR检测方法，CD300a基因和β-actin基因标准品的Ct值与模板浓度之间均具有良好的线性关系，溶解曲线均为特异单峰，最低检测限均为10拷贝/μL,具有良好的灵敏性，可以准确检测出BHV-1攻毒后巨噬细胞内的CD300a基因表达量。经计算，攻毒组CD300a表达量均高于对照组，其中，6,12,24 h的表达差异倍数显著高于0,72 h...     

牛病毒性腹泻-牛传染性鼻气管炎多价二联蜂胶灭活苗的研究

牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎是牛的主要传染病,采用我所分离的地方毒株,以蜂胶为免疫佐剂制成多价二联灭活苗,经免疫及攻毒试验、二联灭活苗保护率的中间试验等实验,表明该苗对牛的保护性良好。     

完成牛沙门氏菌病保护免疫的方法

静注或口服非致死量感染的都柏林沙门氏菌或长期接触排沙门氏菌动物的牛,经静脉攻毒后只有一半残存。灭活菌两次皮内注射的免疫牛,攻毒后得到较好的保护;同一方法免疫的犊牛,能抵抗口服感染并优于用灭活苗皮下注射的牛。如皮内注射灭活苗,3周后再静注都柏林沙门氏菌所制的活菌苗,能抵抗强菌剧烈的静脉攻毒。     

牛传染性鼻气管炎弱毒与牛病毒性腹泻弱毒抗原免疫干扰的研究

本试验使用3~6月龄健康易感牛9头(牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原、抗体均阴性),共分3组,每组3头犊牛。第1组首免肌肉注射IBRV-LNM弱毒疫苗株种毒,接种1周后,每头牛接种BVDV-SM弱毒疫苗株;第2组只接种BVDV-SM弱毒疫苗株种毒,接种时间同第1组;第3组为对照组,接种MDBK细胞培养液。接种BVDV-SM疫苗毒后每周采血至疫苗毒接种后28 d,测定接种后BVDV抗体效价,并采用BVDV-JL检验用强毒进行攻毒试验。结果表明,第1组与第2组试验动物血清中牛病毒性腹泻病毒抗体水平无明显差异,能够抵抗BVDV-JL强毒攻击达到免疫保护的效果,说明牛传染性鼻气管炎病毒IBRV-LNM弱毒疫苗株接种后在牛体内对牛病毒性腹泻病毒BVDV-SM疫苗毒不产生免疫干扰作用。     

牛传染性鼻气管炎病毒LNM株致弱疫苗免疫效力的研究

为检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体在免疫牛体内的产生及其消长规律,评价IBRV LNM株致弱疫苗的保护效力,并确定免疫持续期,本实验对免疫试验组牛每头颈部肌肉接种制备的IBRV LNM株致弱疫苗104.5 TCID50/mL,监测血清抗体效价,进行免疫期的确定。在疫苗免疫后的6个月、9个月和12个月分别抽取3头免疫组和两头对照组牛采用IBRV-LN01/08强毒株进行攻毒试验,每头牛的攻毒剂量为107.0 TCID50/mL。结果显示疫苗免疫后12个月时,中和抗体效价仍维持在1∶11以上。攻毒结果显示3个时间点强毒攻击后,疫苗对免疫牛均具有良好的保护力。研究表明IBRV弱毒疫苗可有效地保护免疫牛抵抗IBRV强毒株的攻毒,其免疫持续期最少为12个月。     

猪圆环病毒2型感染对仔猪免疫功能的影响

为研究猪圆环病毒2型(PCV2)对宿主免疫应答的动态影响,选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,随机分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分离攻毒后0、3、7、14、21、28和35 d仔猪外周血淋巴细胞和血清,用MTT法检测外周血淋巴细胞的转化率,并用ELISA法检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6和IL-10的表达变化。结果显示,脂多糖(LPS)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后各时间点均极显著降低(P0.01);植物血凝素(PHA)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后3、21和28 d极显著降低(P0.01),在攻毒后14 d显著降低(P0.05);与对照猪相比,攻毒猪血清中IL-6的含量在攻毒后各时间点均无显著变化(P0.05);IL-1β的含量在攻毒后7 d显著升高(P0.05),IL-10的含量在攻毒后35 d极显著升高(P0.01);IL-2的含量在攻毒后7 d显著降低(P0.05),在攻毒后21 d显著升高(P0.05),在攻毒后28和35 d均极显著升高(P0.01)。结果表明,PCV2能显著抑制仔猪外周血T、B淋巴细胞的转化能力,并能激活机体的固有免疫应答,但同时能导致适应性免疫应答的活化出现迟滞并在攻毒后期引起免疫调节紊乱。     

促卵泡素和促黄体生成素对儋州鸡生殖激素调控规律的研究

为研究促卵泡素（FSH）和促黄体生成素（LH）对儋州鸡体内其他生殖激素的调控规律,本试验通过改变FSH和LH在儋州鸡血液中的浓度,并采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）对处理前后儋州鸡血液中FSH、LH、催乳素（PRL）、孕酮（P）、雌二醇（E₂）的浓度进行测定。结果发现,注射外源性FSH和LH分别能提高儋州鸡血液中FSH和LH浓度;当儋州鸡血液中FSH或LH浓度显著升高时则均能引起PRL浓度显著降低（P < 0.05）,但当FSH和LH浓度同时显著升高时,PRL浓度显著升高（P < 0.05）;当儋州鸡血液中FSH浓度显著升高时,E₂及P浓度显著提升（P < 0.05）,且在高浓度LH的协同下提升幅度更大;当儋州鸡血液中LH浓度显著升高时E₂及P浓度升高但不显著（P > 0.05）。本研究结果表明,儋州鸡血液中FSH或LH浓度的提高均能降低PRL的浓度,并能不同程度的提升E₂及P的浓度,但FSH与LH浓度同时提高则能通过协同作用刺激E₂及P浓度的大幅提升,当E₂及P浓度过高时能通过刺激PRL的释放,负反馈调节血液中FSH与LH,并恢复血液中E₂及P浓度。     

Study on Regulation of Reproductive Hormones in Danzhou Chicken by FSH and LH

To investigate the regulation of reproductive hormones in Danzhou chicken by follicle-stimulating hormone (FSH) and luteotropic hormone (LH),the concentration of FSH and LH in Danzhou chicken blood were changed by different treatments and the concentration of FSH,LH, prolactin (PRL), progesterone (P), and estradiol (E₂) in the blood were determined using the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The results showed that exogenous FSH and LH could improve the concentrations of FSH and LH,respectively. When one of FSH and LH increased alone,the concentration of PRL was significantly decreased (P < 0.05),while it was significantly increased when FSH and LH were both increased (P < 0.05).The high level of the FSH could result the significant increase of E₂ and P (P < 0.05),and it would expand the increasing effect in cooperation with the high concentration of LH. While the high level of the LH could elevate the concentration of E₂ and P,but effect was not significant (P > 0.05).In conclusion,the study suggested that the increase level of FSH or LH could reduce the concentration of PRL in Danzhou chicken,meanwhile,it could increase the concentration of E₂ and P in varying degrees. However,both of the FSH and LH increase in the blood could result the significant increase of E₂ and P as the synergy. When the concentration of E₂ and P were too high,it could stimulate the release of PRL which could adjust the concentration of FSH and LH,and rebalance the concentrations of E₂ and P in the blood.     

2015年山东省肉鸡饲料原料中重金属污染情况调查及风险评估

本试验旨在调查2015年山东省肉鸡饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的污染情况,评估饲料原料的污染风险。试验收集烟台市莱阳、威海市文登、青岛市莱西、潍坊市诸城、日照市莒县、临沂市沂水、德州市夏津等地不同饲料生产厂家使用的8种饲料原料,包括玉米、豆粕、麸皮、花生粕、棉籽粕、玉米蛋白粉、干酒糟及其可溶物( DDGS)和微量元素预混料,应用电感耦合等离子体原子发射光谱法( ICP-AES)检测镉、铅和铬元素的含量,应用原子荧光光谱法( AFS)检测砷和汞元素的含量,计算检出率、平均含量、超标率、最高含量与平均含量比值( HC/AC)和离散系数。结果表明：饲料原料中砷、铅、镉、铬和汞元素的检出率分别为32.29%、7.29%、12.50%、100.00%和100.00%;阳性样品中平均含量分别为0.21、1.27、2.12、3.48和0.02 mg/kg,超标率分别为0.00、1.04%、1.19%、54.76%和9.52%;微量元素预混料中砷、铅和镉元素,棉籽粕中铬元素及花生粕中汞元素的HC/AC最大,微量元素预混料中镉元素、花生粕中汞元素、豆粕中砷元素及棉籽粕中铅和铬元素离散系数最大。综上所述,肉鸡饲料原料中铬和汞元素污染严重;微量元素预混料中砷、镉、铬和铅元素、棉籽粕中铬和铅元素、花生粕和豆粕中汞元素易出现严重污染,因此建议制定预混料和饼粕类饲料中多种重金属元素的限量标准。     

补饲醋酸甲羟孕酮基础上分别进行前列腺素、N-甲基-D-天冬氨酸和来曲唑处理对母羊血浆繁殖激素水平的影响

试验旨在研究醋酸甲羟孕酮（medroxyprogesterone acetate,MPA）与前列腺素（prostaglandin,PG）、N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）和来曲唑（letrozole,LE）的不同配伍对母羊血浆繁殖相关激素水平的影响。选取3岁经产萨福克母羊39只,平均体重（75.51±11.55） kg,随机均分为3组,试验Ⅰ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+1 mL/只PG,试验Ⅱ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+600 mg/（d·只） NMDA,试验Ⅲ组饲喂基础日粮+34 mg/（d·只） MPA+14 mg/（d·只） LE,试验期18 d。结果发现,补饲MPA基础上进行PG处理,母羊血浆中FSH水平呈极显著升高（P<0.01）;补饲MPA基础上进行NMDA处理,母羊血浆中E2、MLT、FSH和LH水平均呈极显著升高（P<0.01）;补饲MPA基础上进行LE处理,母羊血浆中MLT、LH和T水平均呈极显著升高（P<0.01）。综合比较各生殖激素之间的关系及变化规律,在本试验条件下,建议MPA与NMDA和LE分别结合使用,可作为调控母羊繁殖性能的药品;且通过比较激素水平得出,MPA与NMDA组合效果最佳。     

Effects of Prostaglandin,N-methyl-D-aspartate and Letrozole on Ewes Plasma Levels of Reproductive Hormones were Evaluated on the Basis of Medroxyprogesterone Acetate Supplementation

This study was aimed to investigate the effects of the different compatibility of medroxyprogesterone acetate (MPA) with prostaglandin(PG), N-methyl-D-aspartate (NMDA) and letrozole (LE) on plasma related hormones levels of reproductive ewes. Thirty-nine and 3-year-old multiparity Suffolk ewes with average weight (75.51+11.55)kg were selected,and assigned into 3 groups,test group Ⅰ:Basis diet+34 mg/d MPA+1 mL/ewe PG, test group Ⅱ:Basis diet+34 mg/d MPA+600 mg/d NMDA, test group Ⅲ:Basis diet+34 mg/d MPA+ 14 mg/d LE, respectively, the trial period lasted for 18 days. The results showed as follows:On the basis of supplemental feeding MPA with PG treated,the levels of FSH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01); Treated with NMDA, the levels of E₂, MLT,FSH and LH in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively;Treated with LE, the levels of MLT,LH and T in plasma of ewes were extremely significantly increased (P<0.01), respectively. This study suggested that MPA+NMDA and MPA+LE could be used as medicines for regulate and control oestrus of ewes, and the effect of MPA+NMDA was the best.     

MDV对雏鸡血浆MDA含量与SOD活性的影响

为探讨丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在雏鸡马立克病(MD)发病过程中的作用,研究了雏鸡在人工攻毒后血浆MDA含量与SOD活性的动态变化.结果表明,攻毒组接种马立克病病毒(MDV)后第14天,血浆中MDA的含量显著高于对照组(P＜0.05),第7天和第28天高于对照组,第56天时基本接近;血浆中SOD活性在第7天时对照组显著高于攻毒组(P＜0.05),第14天和第28天高于攻毒组,但差异不显著.表明雏鸡在感染MDV后血浆中MDA含量显著升高,SOD活性明显降低,对雏鸡MD的发病诊断有重要的指导作用.     

牛、羊、人叠朊基因的克隆与分析

为了解我国哺乳动物叠朊基因Prnd的生物信息，本实验采用PCR方法克隆了秦川黄牛、甘肃土种绵羊和汉族人的Prnd，运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明，获得的三种哺乳动物的Prnd均位于1个单一的外显子内，与GenBank登录的相应序列具有高度同源性。秦川黄牛与甘肃土种绵羊Prnd的同源性为96．8％，推导氨基酸序列同源性为93．3％。汉族人Prnd与秦川黄牛和甘肃土种绵羊Prod的同源性均为80％，推导的氨基酸序列同源性均为76．3％。氨基酸一级结构分析显示3种Prod编码的叠朊均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPI锚结合区组成。二级结构预测表明，3种Prod编码的叠朊均由3个α-螺旋和2个β-片层组成。本研究获得的这3种主要哺乳动物的Prnd信息为一进步研究叠朊的结构与功能奠定了基础。     

苜蓿自交不亲和性研究

实验中探讨了苜蓿自交不亲和性和遗传特征。结果得出:1.苜蓿自交结荚百分率为0～92％,平均为27.6％。苜蓿自交不亲和性在群体中呈连续、偏态分布。2.苜蓿自交不亲和性反应主要发生在雌蕊组织下部(子房及子房腔)。3.确定自交不亲和或自交亲和性的判别函数方程为Y=-0.0804x_1—0.5228x_2+0.6117_3。4.苜蓿自交不亲和性受单位点、复等位基因控制,并具有CSI遗传特点。5.S基因与过氧化物同工酶基因(Prxl)为连锁,两者间重组值为27％。6.PSC的遗传力h~2=62％,选择无论对亲和性和不亲和性均为有效。根据本试验结果讨论了苜蓿SI的测度指标、授粉方式及不亲和性的数量差异问题,并探讨了紫花苜蓿与黄花苜蓿种的分类差异,认为两者理应属同一种或种内不同生态型。     

鬼臼多糖对免疫功能低下小鼠自由基产生酶活性的影响

采用环磷酰胺腹腔注射(50mg/kg)小鼠建立免疫抑制模型,观察鬼臼多糖(PEP)不同剂量(50,100,200mg/kg和400mg/kg)配合环磷酰胺应用后,对小鼠脾脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)及一氧化氮合成酶(NOS)水平的影响。结果表明,PEP能显著降低免疫抑制小鼠脾脏XOD、MPO的活性;对脾脏总NOS活性无显著影响,但400mg/kg多糖可降低小鼠脾脏诱导型NOS活性,提示PEP可通过降低免疫抑制小鼠体内自由基产生酶水平而起到抗氧化作用。     

我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测

为了解J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及其与禽网状内皮细胞增生症病毒(REV)、马立克氏病病毒(MDV)和鸡传染性贫血病病毒(CAV)的混合感染现象,本研究从宁夏、湖北、广东、山东、辽宁、吉林、黑龙江7个省的39个蛋鸡群收集临床表现和剖检病理变化疑似禽白血病的病料样品184份,采用PCR、病毒分离和IFA检测样品中ALV-J、REV、MDV和CAV。结果表明,7个省蛋鸡场均存在ALV-J感染,病料样品阳性率为60.9%,检测鸡群阳性率为82.1%,与REV、MDV、CAV的混合感染率分别为13.6%、24.5%、22.8%,其中存在较为严重的双重感染(29.0%)和3重感染(18.8%),甚至4重感染(1.7%)。研究结果表明,我国蛋鸡群中普遍存在ALV-J感染,而且与REV、MDV、CAV混合感染严重;提示ALV-J已经可以引起蛋鸡群发病,在临床诊断和致病性研究中,应考虑到多重感染的影响。