猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30株感染的诊断与防控策略

2019年10月初，福建闽南地区某猪场出现疑似猪繁殖与呼吸综合征疫情，主要表现为25日龄断乳仔猪出现发热、采食量下降、扎堆、毛长、喘气等现象。为确定发病原因，将随机采集的血清样品165份送至国内某重点实验室进行猪瘟抗体、猪繁殖与呼吸综合征抗体和猪伪狂犬病野毒抗体检测，采集4份肺等病料对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒进行PCR检测，PCR产物送上海某公司进行基因测序。结果发现，送检的165份样品中，猪伪狂犬病gE抗体阳性率为0%、g B抗体阳性率为96.19%(101/105)，猪瘟抗体阳性率为84.24%(139/165)，猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率为92.73%(153/165)；病原学检测结果显示，未检出猪瘟病毒、伪狂犬病病毒，但猪繁殖与呼吸综合征病毒的检出率达100%；测序结果表明，4个样品的PCR产物序列均与NADC30毒株的同源性高达92%～93%。结果提示，该场暴发PRRS是类NADC30毒株感染所致，可采取与类NADC30毒株同源性高的疫苗接种和提高生物安全防控水平等方式对该病进行科学防控。     

2015-2017年山东地区CSFV、PRRSV和PRV的流行病学调查与分析

为了解山东地区生猪主要病毒性疾病的发生情况,掌握疫病发生及变化规律。本试验对2015-2017年山东省各生猪养殖场送检的病料和血清进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪瘟病毒(CSFV)3种病原抗原和抗体检测及遗传演化分析。结果显示:2015-2017年CSFV平均抗原阳性率为9.99%,抗体水平逐年提高,平均抗体阳性率为79.38%;样品序列测定结果显示,目前CSFV的主要流行毒株为2.1d亚型。PRRSV平均抗原阳性率为41.44%,平均抗体阳性率为83.28%,2015-2017年PRRSV抗原和抗体水平均趋于平稳趋势。2017年PRV平均抗原阳性率12.30%,gE平均抗体阳性率为30.95%,gB平均抗体阳性率为74.70%,2017年PRV野毒感染的风险有所提高。结果表明,虽然部分病毒性传染病的发生发展出现一些变化及风险,但仍处于可防可控的范围。该调查分析结果可为山东地区CSFV、PRRSV和PRV的流行和防控提供参考。     

2018年中国部分地区猪瘟病毒2.1d亚型新流行株的基因组特征分析

为了解中国猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）的分子流行病学及遗传变异情况，本研究应用RT-PCR方法对2018年采集自河南、河北、山东、黑龙江和辽宁5个省份的350份疑似CSFV感染的病料进行E2和NS5B基因扩增，并对PCR产物进行测序和序列分析。结果显示，350份样品中21份为CSFV阳性，共获得14株CSFV的E2基因序列和7株CSFV的部分NS5B基因序列。E2全基因、NS5B部分基因序列分析表明，21份阳性样品均属于近年来在中国流行的CSFV 2.1d亚型，且新发现的2.1d亚型CSFV与中国较早2.1d亚型CSFV毒株间同源性差异不大，新发现的2.1d亚型CSFV分离株在E2基因的6个氨基酸（R³¹、S³⁴、W¹⁸²、K²⁰⁵、K³⁰³、A³³¹）上具有相同的分子特征，E2蛋白中15个位点上的半胱氨酸均未发生变异。韩国2.1d亚型CSFV在E2蛋白上具有3个独特的氨基酸（N⁹⁷、K¹⁵⁹、R²⁰⁵）特征，并且发现了韩国毒株YC11WB可能作为2.1b和2.1d亚型CSFV过渡毒株的证据，流行于中国和韩国的2.1d亚型CSFV可能分别来自于本国早期2.1b亚型CSFV的衍化。本研究证实，2018年中国及周边国家CSFV较为活跃，且流行毒株依然以2.1d亚型为主，为中国科学防控CSFV提供了依据。     

猪瘟病毒一步法RT PCR检测方法的建立

本研究根据NCBI公布的猪瘟病毒石门毒株的E2基因序列，设计、合成了1对检测猪瘟病毒E2基因的RT-PCR引物。自疑似猪瘟病料及接猪瘟F114毒的PK-15细胞中提取总RNA，经一步法RT-PCR扩增E2基因。建立了猪瘟病毒E2基因RT-PCR检测方法，RT-PCR从26份疑似猪瘟病料中检出阳性病料24份，阳性检出率为92.3%；结果表明，建立的 RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性，可用于CSFV的分离鉴定、临床病料的检测和分子流行病学调查。     

河北省邢台市及周边地区猪流行性腹泻病毒流行情况调查及S1基因序列分析

为初步调查河北省邢台市及周边地区猪流行性腹泻(PED)分子流行病学情况，试验于2022年1月—12月从河北省邢台市及周边县(市、区)采集疑似感染PED猪肠道病料或新鲜粪便共206份，采用荧光定量PCR技术检测样品猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性率；同时采用RT-PCR法扩增部分PEDV阳性病料S1基因序列，根据S1基因序列特征分析毒株基因型和变异情况。结果显示：共47份样品为PEDV核酸阳性，平均阳性率为22.82%,其中腹泻仔猪、育肥猪和母猪样品PEDV检出率分别为27.05%、15.15%和20.83%;采用RT-PCR法共扩增6份PEDV阳性样品S1基因部分序列，进一步序列分析发现5个毒株属于PEDV变异株，1个毒株属于PEDV经典株。研究结果表明，河北省邢台市及周边地区PED流行情况较严重，且同时流行PEDV经典株和变异株，但PEDV变异株为优势基因型。     

猪圆环病毒2型和猪瘟病毒抗体检测与分析

目的检测临汾市某县猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)的抗体水平.方法分别从该县的企业、散户、大户的猪只中采集血清186份,应用ELISA方法检测抗体水平.结果 PCV2抗体阳性率平均为83.33%,CSFV抗体阳性率平均为54.83%.结论该县猪圆环病毒2型感染严重,猪瘟疫苗免疫抗体水平偏低,与猪瘟疫苗使用不当、猪圆环病毒2型感染存在一定关系.     

猪瘟病毒和不同型猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测方法的建立

为建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,针对CSFV和PRRSV的基因序列设计3对特异性引物,第1对引物扩增CSFV毒株NS2基因508bp片段,第2对引物扩增PRRSV美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因338bp/248bp片段,第3对引物扩增PRRSV欧洲型毒株ORF5基因614bp片段。经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV毒株和PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株及欧洲型毒株的多重RT-PCR方法。该方法可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)均无交叉反应;对CSFV和PRRSV 4种重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝/μL。对采集的106份临床疑似病料进行检测,结果CSFV和PRRSV变异株混合阳性4份,占3.77%(4/106);CSFV阳性7份,占6.60%(7/106);PRRSV变异株阳性17份,占16.04%(17/106)。结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法可以用于CSFV和PRRSV的临床快速鉴别诊断和流行病学调查。     

猪圆环病毒3型的检测及其全基因进化分析

本研究对2016年3月~2017年3月采集于上海市猪场的20份病料进行了病原体检测,并对检测到的圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)进行了全基因分析。检测结果显示:猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV)阳性病料1份,而猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)均为阴性;PCV3阳性病料2份,其中1份为PCV3和PRRSV混合感染。对这2株PCV3进行全基因测序和Blast分析,并绘制PCV3全基因、囊膜蛋白基因的遗传进化树,结果显示:与这2株病毒基因同源性最高的毒株为CN/Hubei-618/2016,同源性为99%;在全基因进化树中,这2株毒株和中国来源的PCV3毒株以及美国毒株PCV3/USA/MO2015(Gen Bank登录号:KX778720.1)在同一群中;在囊膜蛋白基因的进化树中,这2株PCV3属于PCV3a。     

2021—2022年南京市野猪中8种病毒感染情况及PCV2全基因组遗传进化分析

野猪是多种重要动物疫病的天然宿主,为了解2021—2022年期间南京市野猪疫病感染情况、基因型及遗传变异特征,为野猪疫病的防控提供科学依据,在江苏省南京市共采集30头野猪的76份样品,其中30份全血样品、30份血清样品、6份粪便样品和10份组织样品(心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织的混合样品)用于开展猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的病毒核酸及抗体检测。不同样品PCR检测结果显示,30头野猪中有12头PCV3阳性,阳性率为40%;PCV2阳性率为6.7%;其余病原核酸检测均为阴性。在PCV2检测阳性的野猪样品中成功获得2条PCV2全基因组序列,且均属于PCV2d基因亚型。血清抗体检测结果显示,野猪PCV3、PCV2、PRV gB、PRRSV、PEDV和FMDV A型抗体阳性率分别为53%、30%、30%、3.3%、3.3%和6.7%;所有野猪CSFV、ASFV、PRV gE抗体和FMDV O型抗体检测均...     

广西田东县部分猪场四种疫病病原及三种疫病血清学的检测与分析

为了解广西田东县部分猪场猪瘟?高致病性猪繁殖与呼吸综合征(猪蓝耳病)、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病的流行情况，采用RT-PCR方法及PCR方法检测组织样品，对各猪场送检的162份组织样品进行猪瘟病毒(CSFV) 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)核酸检测。采用ELISA方法对送检临床健康猪群400份血清样品进行CSFV、HP-PRRSV、PRV-gE抗体检测。病原检测结果显示：病料CSFV核酸检测为阴性；HP-PRRSV、PCV2、PRV核酸总阳性率分别：6.79%、40.74%、1.23%;对不同猪群各种病原核酸阳性率分析发现，育肥猪HP-PRRSV阳性率最高，为11.53%,保育猪PCV2阳性率最高，为51.9%,种母猪PRV阳性率最高，为6.45%。抗体检测结果显示：CSFV抗体阳性率为87%,HP-PRRSV抗体阳性率77.5%,PRV-gE抗体阳生率为12.25%。本研究表明，CSFV免疫效果好，并有效地控制了该病在本区域的发生与流行。HP-PRRS、PCV2、PR这3种疫病仍在猪群中散发流行，需要加强防控...     

山东种公猪精液携带主要病原的检测

采用PCR技术,对2007年-2009年山东部分地区的38个猪场和人工授精站的生产公猪精液样品727份进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和猪细小病毒(PPV)5种主要病原的检测。结果检出CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2和PPV的阳性数和阳性率分别为18份(2.48%)、27份(3.71%)、7份(0.96%)、33份(4.54%)、9份(1.24%),有7份样品为2种以上病原混合感染,其中以PRRSV+PCV-2混合感染最多。结果表明精液传播病毒仍是当前母猪繁殖障碍的重要原因之一,应重点加强对种公猪的疫病净化和公猪精液管理,从源头控制传染源。     

2017-2020年浙江省猪主要病毒性传染病的流行病学调查与分析

为了解浙江省猪主要病毒性传染病的流行情况及变化规律,本试验对2017-2020年浙江省不同地区规模化猪场送检的血清和病料样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)4种疫病痛原和抗体检测.抗体检测结果显示:PRRSV、CSFV、PCV2、PRV...     

鲁豫冀交界地区重要猪病的流行病学调查

开展鲁豫冀交界地区重要猪病的流行病学调查对于控制和减少该地区重要猪病的发生具有重要意义。2016年3月—2017年10月从鲁豫冀交界地区采集了1 196份样本,采用ELISA检测试剂盒检测猪瘟（classical swine fever,CSF）、猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）、猪伪狂犬病（porcine pseudorabies,PR）、猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）抗体及抗原。结果表明,猪瘟抗体阳性率为82.94%（496/598）,抗原阳性率为2.56%（6/234）;猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率为81.94%（490/598）,出现繁殖障碍性疾病的病料中抗原阳性率为20.73%（51/246）;猪伪狂犬病的g B抗体阳性率为72.78%（484/665）,g E抗体阳性率为14.59%（97/665）;PEDV抗体阳性率为47.50%（95/200）,其中免疫群体的阳性率为63.30%,未免疫群体的阳性率为35.00%。该调查结果表明,在以上地区重要猪病的免疫情况不容乐观,有待于进一步加强相关疾病的免疫工作。     

2015—2017年我国部分地区猪非典型瘟病毒的遗传变异分析

猪非典型瘟病毒（atypical porcine pestivirus,APPV）是一种能引起仔猪先天性震颤的病原。为了解我国APPV感染状况、基因组以及遗传变异特征,采用套式RT-PCR方法,对2015—2017年我国22个省（自治区、直辖市）93个猪场的285份血清样本进行了APPV核酸检测和E2基因序列分析;并对发病猪组织样本进行了APPV全基因组扩增与序列测定和遗传变异分析。结果显示,检测样本的APPV阳性率为25.26%（72/285,95% CI=20.3%~30.7%）,且阳性率逐年升高;猪场APPV阳性率为38.71%（36/93,95% CI=59.7%~94.8%）。扩增出的35条APPV E2基因的核苷酸序列相似性为83.4%~100.0%,推导氨基酸序列相似性为90.5%~100.0%。基于E2基因的遗传变异分析显示,APPV临床毒株可被分为4个亚群,大多数国内APPV临床毒株可归入亚群1,与美国的000515株遗传关系较近;少数临床毒株与Bavaria S5/9、NL1 Farm1等欧美毒株同属于亚群2;6条测定序列被划分至亚群3;亚群4的成员均来自广东;其中亚群3与亚群4均由国内APPV临床毒株构成。全基因组序列遗传变异分析表明,全球APPV毒株可归为2大分支,本研究中测序的毒株CHheb1701与所有国外毒株属于同一分支,且与GX04/2017遗传关系最近,与美国毒株000515同聚为一簇;而第二分支中的毒株均来自我国广东省。以上研究表明,我国猪群中APPV感染已较为普遍,毒株多样且变异广泛,同时,也提示毒株可能有不同的来源,为进一步开展APPV的防控及相关研究奠定了重要基础。     

广西德保县黑猪主要疫病病原学和血清学检测

为了解德保黑猪主要疫病流行状况和免疫效果,2018—2020年采集166个德保黑猪饲养场点的300份病死猪样品进行非洲猪瘟(ASF)、猪瘟(CSF)、口蹄疫(FMD)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪伪狂犬病(PR)、猪圆环病毒病(PCV-2)、猪支原体病(PPLO)、猪传染性胸膜肺炎(PCP)、猪链球菌病(SS)、猪流行性腹泻(PED)、猪传染性胃肠炎(TGE)等11种主要疫病的病原学检测,2017—2020年采集35个场点的临床健康德保黑猪血清样品840份进行FMD、CSF、PRRS抗体检测。结果显示:PCV-2样品平均阳性检出率为68.3%,PRRS、PR、PED、PPLO、SS等疫病的病原阳性检出率分别为1.7%、1.0%、1.0%、0.3%、0.3%;CSF平均抗体阳性率为95.8%,而FMD、PRRS平均抗体阳性率较低,分别为79.3%、73.2%,且各年份变化较大。结果表明,德保黑猪主要疫病防控效果较好,大部分疫病得到有效控制,但PCV-2感染仍较严重,这是导致德保黑猪发病死亡以及FMD、PRRS免疫效果不佳的主要因素之一,需要重点加强控制。     

Seroprevalence of economically important viral pathogens in swine populations of Trinidad and Tobago,West Indies

The objective of this study was to evaluate the seroprevalence and identify the strains of swine influenza virus (SwIV), as well as the seroprevalence of porcine parvovirus (PPV), transmissible gastroenteritis virus (TGEV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), porcine respiratory coronavirus (PRCV), porcine circovirus type 2 (PCV-2), and classical swine fever virus (CSFV) in pigs in Trinidad and Tobago (T&T). Blood samples (309) were randomly collected from pigs at farms throughout T&T. Serum samples were tested for the presence of antibodies to the aforementioned viruses using commercial ELISA kits, and the circulating strains of SwIV were identified by the hemagglutination inhibition test (HIT). Antibodies against SwIV were detected in 114 out of the 309 samples (37%). Out of a total of 26 farms, 14 tested positive for SwIV antibodies. HI testing revealed high titers against the A/sw/Minnesota/593/99 H3N2 strain and the pH1N1 2009 pandemic strain. Antibodies against PPV were detected in 87 out of the 309 samples (28%), with 11 out of 26 farms testing positive for PPV antibodies. Antibodies against PCV-2 were detected in 205 out of the 309 samples tested (66%), with 25 out of the 26 farms testing positive for PCV-2 antibodies. No antibodies were detected in any of the tested pigs to PRRSV, TGEV, PRCV, or CSFV.     

山东聊城地区规模化养猪场中重要病毒性传染病的流行情况调查与分析

为了解在非洲猪瘟背景下山东聊城附近规模化养猪场猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪流行性腹泻（PED）、猪瘟（CSF）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）感染和猪伪狂犬病（PR）等重要疫病感染情况及其免疫抗体保护状况,采用酶联免疫吸附试验对聊城附近的6个规模化养猪场的血液样品进行检测和分析。结果发现,PCV-2、PRRSV、CSFV、PRV-gB、PRV-gE的总体抗体阳性率分别为69.64%、87.76%、74.17%、87.10%、77.04%。由该试验结果可以得出,PCV-2、PRRSV、CSFV、PRV-gB的抗体阳性率与往年相比有上升的趋势,说明猪场已经开始重视疫苗防疫。但PRV-gE阳性率达到70%以上,PRV野毒感染仍存在较大隐患,需要引起重视。     

2016—2019年广西玉林市部分猪场主要病毒性疫病监测

为了解近年来广西玉林市规模猪场主要病毒性疫病的流行动态和免疫保护水平,分析疫情流行趋势和暴发风险,对2016—2019年采集自玉林市规模猪场284个场次的6954份血清样本,以及113个场次的1539份临床健康猪组织样本、249个场次自主送检的536份病死猪组织样本,进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)抗体和抗原检测,并对结果进行时间和区间分析。结果显示:2016—2019年,规模化猪场CSFV、PCV2、PRV-gB场群平均抗体阳性率以及个体平均抗体阳性率均在70%以上;PRRSV抗体阳性率总体偏低,但2019年抗体阳性率超过90%。北流市CSFV场群及个体抗体阳性率最低,与其他地区有差异(P<0.05);北流市、福绵区、玉州区的PRRSV场群抗体阳性率未超过70%,低于其他地区(P<0.05);各地区间PCV2抗体阳性率无统计学差异(P>0.05);福绵区PRV-gB抗体阳性率(<70%)与其他地区相比最低(P<0.05);在健康屠宰猪群及病死猪群组织样品中均检出上述4种病原,其中PRRSV、PCV2病原阳性检出率较高。结果表明,玉林市规模化猪场上述4种疫病的免疫抗体保护水平总体较高,但部分地区抗体水平偏低,且均存在猪群带毒现象,尤其是PRRSV、PCV2,存在疫病暴发风险。结果提示,各县(市、区)要根据本地养殖及疫病监测情况,制定科学合理的免疫计划,加强综合防控与监测,防止上述猪群疫病的发生与流行。本研究调查了广西玉林市猪群主要病毒性疫病的免疫保护水平及其病原流行特点,为该地区此类疫病防控提供了数据支持。     

山东省部分种猪场主要疫病免疫效果分析

为种猪场动物疫病净化工作基线调查,筛选了山东省14个种猪场,进行猪瘟、蓝耳病和伪狂犬病病毒抗体检测。结果发现,猪瘟群体免疫合格率为78.57%,个体免疫合格率为76.83%;猪蓝耳病群体免疫合格率为100%,个体免疫合格率为94.82%;伪狂犬病群体免疫合格率为78.57%,个体免疫合格率为87.05%。从总体情况看,蓝耳病的免疫效果良好,伪狂犬病和猪瘟的免疫在个别场存在免疫效果不佳的现象。