冀南地区3种猪病毒病血清抗体的检测与分析

应用酶联免疫吸附试验（ELISA）对2009年1—12月采自冀南地区10个市县规模化猪场的421份血清分别进行猪瘟（CSF）、猪伪狂犬病（PR）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）抗体检测。结果表明,猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征抗体总阳性率分别为61.82%（251/406）、90.15%（293/325）、40.25%（128/318）,提示猪伪狂犬病的抗体总合格率较高,而猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征总阳性率均较低,应加强对其的监测和强化免疫。     

云南地区部分猪场猪呼吸道疾病综合征致病病毒感染的流行病学调查

为了解云南地区猪场猪呼吸道疾病的流行病学,从而为有效防制该疾病提供科学依据,利用ELISA和RT-PCR方法检测了春、夏、秋、冬四季,云南地区不同区域规模养殖场1 164份血清和全血样品中的猪瘟抗原、猪繁殖与呼吸综合征抗原、猪伪狂犬gE抗体、猪圆环病毒2型特异抗体。结果显示:猪瘟抗原阳性率为11.34%,猪圆环病毒2型抗体阳性率为50.86%,猪伪狂犬病病毒gE抗体阳性率为35.40%,猪繁殖与呼吸综合征抗原阳性率为44.51%。表明云南地区规模化猪场存在猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病野毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒感染,不同季节和猪群年龄阶段感染情况有一定差异性。     

清远市部分规模化猪场四种疫病的抗体检测与分析

为评价清远市部分规模化猪场猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪圆环病毒病(PCVD)和猪伪狂犬病(PR)疫苗免疫水平,从7家规模化猪场采集了322份血清样品,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测了猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和猪伪狂犬病病毒gB抗体和gE抗体。结果表明:猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和猪伪狂犬病病毒gB抗体阳性率分别为93.48%、89.13%、90.37%、92.24%,离散度分别为22.69%、56.61%、36.13%、31.12%。说明这7家猪场四种疫病疫苗免疫效果良好,其中有1家猪场怀疑伪狂犬野毒流行。     

粤西地区三种猪病毒病抗体检测与分析

为了评价粤西地区猪群的免疫情况,应用ELISA对2016~2017年采自粤西地区20个不同规模养猪场的409份血清进行猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征以及猪伪狂犬病抗体检测。检测结果表明,猪场猪瘟抗体平均合格率为65.31%,猪繁殖与呼吸综合征抗体合格率为67.65%,猪伪狂犬病抗体合格率为92.60%;不同存栏数的猪场猪伪狂犬病抗体合格率均较高,可达83.80%以上,其余2种抗体检测结果显示,猪场规模越小,抗体合格率越低。提示本次调查中猪伪狂犬病的抗体平均合格率较高,而猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征的平均合格率均较低,应加强对这两种疫病的监测与强化免疫。     

昆明集约化猪场几种繁殖障碍性疾病的血清学调查

应用抗体金标快速检测试纸条对昆明地区12个集约化猪场的236份血清进行了猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征以及猪圆环病毒感染的抗体检测。结果表明大部分猪场存在猪瘟、伪狂犬病的威胁,在所检测血清中猪瘟抗体水平在保护范围的（1：16-1：128）占27.4%（68/236）;猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒感染的抗体水平在保护范围（1：40-1：320）,分别占30.13%（66/208）、41.46%（86/212）和56.0%（44/84）。通过这次调查我们发现大部分猪场不重视免疫,缺乏科学的免疫程序,其中猪瘟、猪伪狂犬病仍然是昆明地区的主要繁殖障碍性疾病,应加强对这2种疾病的免疫预防工作。     

山东和河北部分地区四种猪病的血清学调查

[目的]了解山东和河北部分地区猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬、猪圆环病毒病的发病情况。[方法]用间接ELISA方法对144个规模化养猪场的2 008份猪血清进行抗体水平检测。[结果]两省猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬中和（gB基因）、伪狂犬病毒野毒感染（gE基因）、圆环病毒病的抗体平均阳性率分别为：89%~92%、87%、92%~95%、33%~40%和76%。各阶段猪群的猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬中和（gB基因）抗体阳性率普遍较高,都在80%以上;伪狂犬野毒（gE基因）抗体阳性率在14%~90%之间,其中流产母猪的抗体阳性率最高,为90%;1~4周的仔猪圆环抗体阳性率为76%（152/199）,4~10周的保育猪的抗体阳性率最低,为67%（327/489）。[结论]这四种猪病的抗体阳性率较高,免疫猪基本能得到保护,但在个别猪场仍有发病,可能与免疫失败、新流行毒株的出现、继发感染等因素有关。提示各大猪场要针对实际情况,制定出严格的综合性防控措施。     

重庆某种猪场猪瘟、口蹄疫、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征抗体的ELISA检测

利用ELISA方法,对重庆市渝北区某种猪场种公猪、保育猪、育成猪、后备种猪、基础母猪不同类型和生长阶段猪群的猪瘟病毒抗体、O型口蹄疫抗体、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体、伪狂犬病抗体、猪伪狂犬病病毒gpI抗体、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体进行了监测和分析,结果表明:猪瘟、口蹄疫、猪伪狂犬病免疫总体水平较高,在上半年和下半年的抗体检测合格率均达到100%;猪繁殖与呼吸综合征病毒在上半年和下半年的抗体平均阳性率分别为9.8%和62%,抗体阳性率分别在95%～100%和40%～80%,由于该种猪场未曾免疫猪繁殖与呼吸综会征疫苗,表明猪繁殖与呼吸综合征病毒的感染程度较高,且在不同猪群普遍存在,应予以充分重视。     

规模化猪场主要疫病监测及防制

本试验采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、正向间接血凝试验（IHA）和乳胶凝集试验（LAT）对曲靖市 16个规模化猪场的2751份血清的8种猪病血清抗体进行了检测。检测结果显示,猪瘟病毒（HCV）、猪O型口蹄疫非结构蛋白（NS）、猪伪狂犬病病毒 gE基因（ADV gE）、猪细小病毒（PPV）、猪日本乙型脑炎病毒（JEV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV 2）和布鲁氏杆菌的血清抗体阳性率分别为0%、0%、22.28%、32.93%、52.99%、29.96%、21.88%和0%;猪瘟（HC）、猪O型口蹄疫（FMD）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）免疫血清抗体阳性率分别为59.43%、64.56%、48.55%。结果表明,所检测的规模化猪场未感染猪瘟、O型口蹄疫、布鲁氏杆菌病野毒,但存在不同程度地猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪日本乙型脑炎病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒感染;猪瘟、O型口蹄疫、猪繁殖与呼吸综合征总体免疫效果不佳。     

贵州省开阳县某猪场主要猪病的血清学抗体检测分析

为了解贵州省开阳县某猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪O型口蹄疫病毒、猪伪狂犬病病毒的免疫及感染情况,通过采用ELISA检测方法对猪场30份血清进行相关抗体检测。结果:(1)猪O型口蹄疫病毒、猪伪狂犬病毒gB、猪瘟病毒免疫抗体合格率均>70%,免疫效果较好。(2)猪口蹄疫3-ABC抗体阳性率为0,表明猪群无口蹄疫病毒感染。(3)猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫抗体合格率为26.7%,未达到国家农业农村部规定≥70%的要求,需加强免疫。(4)猪伪狂犬病病毒gE抗体阳性率为70%,表明猪群存在伪狂犬病病毒感染。结论:猪场需加强猪繁殖与呼吸综合征的免疫和防控,同时要做好猪伪狂犬病的检疫与净化工作。     

我国部分地区送检样品3种常见猪病血清学和病原学检测

为了解我国部分地区猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病3种常见疫病的流行情况,采用ELISA、聚合酶链式反应（PCR）和反转录PCR（RT-PCR）等方法,对2019年11个省（自治区）172个猪场送检的3 550份猪血清样品进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）及伪狂犬病野毒（PRV-gE）抗体检测,对9个省（自治区）72个猪场送检的371份病料进行抗原检测。结果显示：CSFV、PRRSV、PRV-gE抗体阳性率分别为82.75%、84.08%、31.86%,抗原阳性率分别为2.62%、26.15%、1.67%。保育猪群CSFV抗体平均阻断率最低,为44.62%,抗体整齐度差,CV为58.26%,且CSFV抗原主要在哺乳仔猪和保育猪病料中被检出,检出率分别为3.57%、3.00%;除育肥猪群外,其他各阶段猪群的PRRSV抗体S/P平均值为1.0~2.0,抗体整齐度整体较差,且平均抗原阳性率较高（26.15%）,其中保育阶段猪群病原检出率最高（37.68%）;育肥猪、母猪、公猪的PRV-gE抗体阳性率分别为36.82%、35.31%、15.65%,病原主要从死胎/木乃伊胎和哺乳仔猪病料中被检出,检出率分别为8.70%和2.99%。结果表明,PRRSV对我国猪场不同阶段猪群均有较大威胁;保育猪群CSFV抗体水平不理想,暴发疫情风险较高;公猪、母猪及育肥猪群普遍存在PRV感染,尤其是母猪。提议各猪场采取免疫、监测、净化等综合措施,加强这3类常见猪群疫病的防控。     

5种猪病多重PCR检测方法的建立

To establish a method for simultaneous detection of classical swine fever virus (CSFV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), pseudorabies virus (PRV), porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine parvovirus (PPV), a multiplex PCR was developed with a set of specific primers designed based on the conserved sequences of CSFV, PRRSV, PRV, PCV2 and PPV. Under the optimized conditions of multiplex PCR,five special fragments of 167 (CSFV),433 (PRRSV),305 (PRV), 559 (PCV2) and 882 bp (PPV) were amplified with a detection limit of 220, 1.6, 72, 400 and 370 pg, respectively. But the multiplex PCR amplification results of swine influenza virus （SIV）, Japanese encephalitis virus （JEV）, Streptococcus suis （SS） and porcine epidemic diarrhea virus （PEDV） were negative．The results showed that the multiplex PCR method was capable of CSFV, PRV, PRRSV, PCV2, PPV infection of single or mixed clinical samples for rapid diagnosis.     

广西德保县黑猪主要疫病病原学和血清学检测

为了解德保黑猪主要疫病流行状况和免疫效果,2018—2020年采集166个德保黑猪饲养场点的300份病死猪样品进行非洲猪瘟(ASF)、猪瘟(CSF)、口蹄疫(FMD)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪伪狂犬病(PR)、猪圆环病毒病(PCV-2)、猪支原体病(PPLO)、猪传染性胸膜肺炎(PCP)、猪链球菌病(SS)、猪流行性腹泻(PED)、猪传染性胃肠炎(TGE)等11种主要疫病的病原学检测,2017—2020年采集35个场点的临床健康德保黑猪血清样品840份进行FMD、CSF、PRRS抗体检测。结果显示:PCV-2样品平均阳性检出率为68.3%,PRRS、PR、PED、PPLO、SS等疫病的病原阳性检出率分别为1.7%、1.0%、1.0%、0.3%、0.3%;CSF平均抗体阳性率为95.8%,而FMD、PRRS平均抗体阳性率较低,分别为79.3%、73.2%,且各年份变化较大。结果表明,德保黑猪主要疫病防控效果较好,大部分疫病得到有效控制,但PCV-2感染仍较严重,这是导致德保黑猪发病死亡以及FMD、PRRS免疫效果不佳的主要因素之一,需要重点加强控制。     

2018年广西重要猪源病毒性疫病流行病学调查

为了解2018年广西猪群重要疫病流行情况,试验采集广西各地的病死猪组织样品及病猪腹泻拭子,应用多重实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,应用多重实时荧光定量PCR检测猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）及猪圆环病毒3型（PCV3）,应用多重RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRoV）。结果显示,所检测的694份组织样品中,CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV1、PCV2、PCV3的阳性率分别为11.10%、18.88%、7.20%、5.19%、2.45%、67.00%和5.76%;2种病原混合感染率为41.21%,3种病原混合感染率为4.32%,其中PRRSV和PCV2混合感染率最高。所检测的792份肠内容物及拭子腹泻样品中,PEDV、PDCoV、TGEV、PRoV的阳性率分别为9.72%、5.81%、1.77%和6.31%;2种病原混合感染率为5.30%,其中PEDV和PRoV混合感染率最高。结果表明,当前多种重要病毒性疫病仍在广西猪群发生和流行,并且多重感染普遍存在,应进一步加强监测和防控。     

2017-2020年浙江省猪主要病毒性传染病的流行病学调查与分析

为了解浙江省猪主要病毒性传染病的流行情况及变化规律,本试验对2017-2020年浙江省不同地区规模化猪场送检的血清和病料样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)4种疫病痛原和抗体检测.抗体检测结果显示:PRRSV、CSFV、PCV2、PRV...     

山东聊城地区规模化养猪场中重要病毒性传染病的流行情况调查与分析

为了解在非洲猪瘟背景下山东聊城附近规模化养猪场猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪流行性腹泻（PED）、猪瘟（CSF）、猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）感染和猪伪狂犬病（PR）等重要疫病感染情况及其免疫抗体保护状况,采用酶联免疫吸附试验对聊城附近的6个规模化养猪场的血液样品进行检测和分析。结果发现,PCV-2、PRRSV、CSFV、PRV-gB、PRV-gE的总体抗体阳性率分别为69.64%、87.76%、74.17%、87.10%、77.04%。由该试验结果可以得出,PCV-2、PRRSV、CSFV、PRV-gB的抗体阳性率与往年相比有上升的趋势,说明猪场已经开始重视疫苗防疫。但PRV-gE阳性率达到70%以上,PRV野毒感染仍存在较大隐患,需要引起重视。     

2013-2014年广西省主要猪病毒性传染病流行病学调查

为掌握广西猪主要病毒性传染病流行情况,为猪传染病预防方案提供依据,本研究于2013年1月1日至2014年12月31日从广西省共收集410份样品,运用PCR及RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(PORV)、猪流感病毒(SIV)的感染情况。检测结果表明,PRRSV、PCV-2、CSFV、PRV、PEDV、TGEV、 PORV和SIV的平均感染率分别为35.12%、18.54%、1.17%、0.98%、10.00%、2.44%、0和1.22%;PRRSV和PCV-2混合感染率为6.83%;PRRSV在秋、冬季节呈现高感染率为36.67%、45.31%和63.64%、48.78%,而PCV-2在春、夏、冬季节呈现高感染率为44.44%、25.00%,11.29%、19.35%和39.39%、14.63%。PRRSV和PCV-2是混合感染的主要病原,它们互相之间或是与CSFV、PEDV、PRV、SIV及副猪嗜血杆菌、链球菌等混合感染,PRRSV和PCV-2将是今后广西地区猪病防控的重点。     

猪全血中多种病原流行病学监测的初步研究

本文利用PCR或RT-PCR技术连续两年对规模猪场采集的猪全血分别进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖障碍综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和日本乙型脑炎病毒（JEV）的检测,结果发现2008年猪全血中CSFV、PRRSV、PRV、PCV2的感染率为30.0%、50.0%、4.0%和30.0%,2009年猪全血中CSFV、PRRSV、PRV、PCV2、BVDV和JEV的感染率分别为19.8%、13.7%、1.1%、31.9%、0.7%和2.7%,这表明用猪的全血可进行猪瘟等6种疫病的监测和流行,为更深入研究疫病的流行病学奠定了基础。     

猪细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及抗原捕捉ELISA方法的建立

为制备猪细小病毒VP2蛋白单克隆抗体(McAb),建立检测猪细小病毒的抗原捕捉ELISA方法 (AC-ELISA),本研究以原核表达的重组VP2蛋白作为免疫原,免疫6周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA方法筛选,成功获得了2株能稳定分泌抗猪细小病毒VP2蛋白的McAb,命名为3C4、5F8。以多克隆抗体作为捕获抗体、单克隆抗体5F8作为检测抗体,通过双抗夹心ELISA各个反应条件的优化,建立检测猪细小病毒抗原捕捉ELISA方法。该方法与日本乙脑病毒(JEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)均不发生交叉反应;与RT-PCR相比较,符合率、敏感性和特异性分别为93.6%、90.9%、94.4%。本研究建立的猪细小病毒AC-ELISA有良好的重复性、敏感性和特异性,可应用于猪细小病毒感染的早期诊断。     

PCV2、PRV和PRRSV多重PCR方法的建立及其应用

根据GenBank登录的猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的参考基因序列,设计3对引物分别用于扩增PCV2的ORF2基因、PRV的gE基因、PRRSV的N基因的目的片段,通过优化反应中各个影响因素,建立了PRV、PCV2、PRRSV的多重PCR（mPCR）检测方法。敏感性和特异性的结果表明,该方法对这3种病毒的最低核酸检出量分别为32.5（PRV）、25.2（PCV2）、35.9pg（PRRSV）。该方法对猪流感病毒（SIV）、猪圆环病毒1型（PCV1）、大肠杆菌、猪瘟病毒（CSFV）、猪流行性腹泻病毒（TGE）等病毒的检测结果均为阴性。200份临床样品的多重PCR结果表明,PCV2感染率为80%（160/200）,PRV感染率为21%（42/200）,PRRSV的感染率为78%（156/200）。200份临床样品主要为PCV2和PRRSV混合感染,阳性率达56.0%（112/200）。该方法的建立对这3种病毒病的早期快速检测和指导临床实践具有十分重要的意义。     

PEDV、TGEV、RV多重RT-PCR检测方法的建立与应用

为了快速准确诊断猪流行性腹泻病毒 (PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)、猪轮状病毒(RV)引起的猪腹泻病,通过设计三对引物,建立了扩增PEDV、TGEV、RV的多重RT-PCR方法,用于临床上大量腹泻病料的鉴定。该方法特异敏感,能同时检测PEDV、TGEV、RV,而对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型病毒、乙型脑炎病毒、猪细小病毒等无扩增,检测的抗原稀释极限为107。用于35个猪场120份临床样品的检测,PEDV阳性率占37.5%,TGEV阳性率占0.75%,RV阳性率占1.25%。PEDV阳性病料测序结果分析表明,与近几年分离毒株亲缘关系较近,与经典毒株和疫苗株亲缘关系较远。结果表明建立的多重PCR方法特异性强、敏感度高,能用于临床诊断及流行病学调查。