重组白细胞介素-2提高口蹄疫疫苗免疫效果的试验

本试验观察了重组IL-2对经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗免疫效果的影响。其中对经产母猪的试验结果显示,重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫57天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶3018.1,而不注射重组IL-2的对照组平均间接血凝抗体滴度1∶1955.6,两组中所有抗体滴度均大于1∶64;对育成母猪的试验显示类似结果:重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫55天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶1361.8,且抗体滴度均大于1∶64,而对照组平均抗体滴度为1∶855.4,且其中抗体滴度小于1∶64的占7.1%。说明重组IL-2可以显著提高经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗的抗体滴度水平,同时也可提高育成母猪口蹄疫抗体整齐度。     

部分猪场猪瘟抗体有效保护水平的探讨

猪瘟抗体水平达到1∶16是免疫是否合格的判断标准,而作者通过对疑似猪瘟的猪分别进行猪瘟抗原和抗体测定,发现感染野毒的猪部分抗体水平在1∶16以上,有些甚至在1∶64以上,仍然感染发病,所以建议种猪猪瘟抗体免疫合格标准应提高到1∶64,其它猪应提高到1∶32。     

仔猪猪瘟超前免疫的研究

在仔猪猪瘟免疫程序的研究中,将超前免疫的第二次免疫时间从60d提前至45d,免疫剂量从1头份提高至4头份。在80d时,可使猪瘟抗体水平由原来的2提高到4.2(P<0.01)。因此建议:猪瘟的超前免疫剂量2头份,45～50d进行二免剂量4头份较为合适。(注:1本文的猪瘟抗体滴度用以2为底的对数log2表示,如抗体IHA滴度为1∶64,用log2表示,简写为6。2合格率:猪瘟抗体水平达到1∶16或1∶16以上的为免疫合格。)     

猪繁殖与呼吸综合征对猪瘟免疫效果的影响

本试验通过对三个猪场猪繁殖呼吸综合征 (PRRS)及猪瘟血清抗体的测定 ,提出PRRS可影响猪瘟的免疫效果 ;对PRRS阳性猪用猪瘟兔化弱毒疫苗加强免疫后 ,可明显提高猪瘟血清抗体水平 ,增强猪瘟的免疫效果     

猪繁殖与呼吸综合征对塞内卡病毒灭活苗免疫效果的影响

为探究猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)对塞内卡病毒(SVA)灭活疫苗免疫效果的影响,对PRRS阳性猪和PRRS阴性猪分别免疫相同批次、相同剂量的SVA灭活苗,检测首次免疫后7 d、14 d、21 d、28 d血清中和抗体效价,并在免疫后28 d对所有试验猪进行攻毒保护试验。结果显示,所有PRRS阳性猪的SVA血清中和抗体效价均小于1∶4,而PRRS阴性猪SVA血清中和抗体效价在二免后上升到较高水平。攻毒保护结果与中和抗体效价结果呈正相关,PRRS阳性组0/5保护,而PRRS阴性组试验猪达到5/5保护。这一研究表明PRRS会使SVA灭活疫苗免疫效果下降,为SVA及PRRS疫苗的研发及猪场疾病的防控提供了参考。     

不同日龄仔猪 注射猪瘟疫苗抗体滴度的试验

猪瘟又称"烂肠瘟",是由猪瘟病毒引起的猪的一种热性、致死性、高度接触性传染病,对养殖业影响颇大。为了提高猪瘟免疫效果,我们用正向间接血凝试验在亨发猪场对三组在不同日龄注射猪瘟疫苗的仔猪血清进行了检测。结果表明:A组、B组、C组最高抗体滴度分别为1∶32,1∶64,1∶128。试验中所用猪瘟血凝抗原效价为1∶1024,标准阳性血清效价为1∶2048。     

硒添加水平对氧化应激仔猪生产性能和免疫功能影响的研究

探讨硒添加水平对氧化应激仔猪生产性能和仔猪免疫功能的影响。48头断奶公猪（未注射猪瘟疫苗）平均分配到4个处理,即基础日粮组和0.2、0.4和0.6 mg/kg的硒添加组,每个处理6个重复,每个重复2头猪,试验期49 d。试验开始时,所有试猪腹腔注射10 mg/kg的敌快死诱导慢性氧化应激,试验21 d采血后,颈部皮下注射猪瘟兔化弱毒疫苗（2头份/头）。结果表明：添加硒可促进氧化应激仔猪生长和增强免疫功能,其中,以0.6 mg/kg组效果最为突出,表现为全期日增重提高,料肉比降低;淋巴细胞转化率、活性玫瑰花环率和总玫瑰花环率升高;IgGI、gA和IgM提高,猪瘟抗体滴度随着试验期的延长,几乎呈直线上升,在免疫后28 d,阳性保护率达到100%;IL-1β和IL-6下降。添加0.6 mg/kg硒可提高氧化应激仔猪细胞免疫和体液免疫能力,降低由氧化应激引起的细胞因子的异常上升,提高试猪生产性能。     

去势仔猪同时免疫猪瘟、口蹄疫、蓝耳病疫苗的效果研究

本试验随机选择30日龄健康仔猪30头,去势后分成3组:1组分别同时接种CSF、FMD疫苗,2组分别同时接种CSF、FMD、PRRS疫苗,对照组不免疫任何疫苗,观察免疫副反应。然后在免疫后30、60、90、120d时采血,用ELISA抗体试剂盒检测抗体动态效价。结果显示:2组和1组的免疫副反应较小可控;免疫后30～120d,FMD和PRRS阳性抗体的合格率都超过70%;免疫后30d,CSF阳性抗体合格率能达到70%,60d时CSF抗体合格率只有60%,90d及以后已无CSF阳性抗体。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株活疫苗抗体应答水平的观察

用本厂生产的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗及病毒液分别以不同剂量给PRRS阴性猪注射，并在不同时间采血测其相应的抗体水平，比较不同剂量抗体水平维持时间。结果表明，猪注射该疫苗后14d即可产生较高的抗体水平，并在21—35d达到高峰，42d略有下降，70d时抗体水平仍为阳性，104d仍有85％以上的猪抗体水平阳性。     

猪瘟兔化弱毒疫苗与猪圆环病毒2型灭活疫苗同时接种的免疫效果评价

为评价猪瘟兔化弱毒疫苗和猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗同时免疫效果,本实验采用猪瘟活疫苗(细胞源)和PCV2灭活疫苗(LG株)两种疫苗同时分点注射和混合注射35日龄仔猪,于免疫后间隔3周、5周、7周、9周采血,通过猪瘟病毒(CSFV)抗体检测试剂盒和PCV2抗体检测试剂盒进行CSFV和PCV2特异性抗体检测。结果显示,无论是两种疫苗同时颈部两侧分点分别注射,还是用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗后混合免疫,免疫后3周CSFV和PCV2抗体均呈阳性,CSFV抗体滴度和PCV2抗体滴度于7周和9周达到峰值,与各疫苗单独免疫对照组抗体产生时间和滴度无明显差异。实验表明,两种疫苗可以同时注射或采用PCV2灭活疫苗稀释CSFV活疫苗进行免疫,均不影响各自免疫抗体的产生。因此,可以将PCV2灭活疫苗作为CSFV活疫苗的稀释剂,采用一次性注射的形式同时接种这两种疫苗,为简化这两种病临床疫苗免疫注射方面提供了实验依据。     

规模化种猪场猪瘟免疫情况调研

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种以高热、出血为主要特征的烈性、高度接触性传染病,至今仍在中国广泛流行。接种疫苗是防控该病发生的最根本的方法,为了查清山西省规模化种猪场猪瘟疫苗免疫情况,课题组采用ELISA试剂盒,对8个地市42个规模化种猪场465头哺乳猪、456头保育猪、436头育肥猪、419头母猪进行了猪瘟免疫抗体检测。查明了哺乳猪抗体阳性率平均为70.11%,保育猪抗体阳性率平均为40.57%,育肥猪抗体阳性率平均为50.22%,母猪抗体阳性率平均为69.69%,证明被检猪群免疫抗体不理想,尤其是保育猪抗体水平较低。同时对12个规模化种猪场,4类不同免疫方法免疫猪瘟疫苗的133头哺乳猪、110头保育猪、105头育肥猪、135头母猪进行了免疫抗体检测。结果表明:乳猪在吃奶前超免猪瘟高效细胞苗6头份,21日龄时二免猪瘟高效细胞苗4头份,60日龄三免猪瘟高效细胞苗2头份,母猪产后21 d跟胎免疫效果最好,使保育猪免疫抗体阳性率达到89.29%,有些猪场使用该方法免疫后,使保育猪的死亡率有了明显的降低,生长发育逐渐走向正常;而采用仔猪在断奶后28日龄至35日龄时首免猪瘟普通细胞苗4头份,60日龄二免猪瘟普通细胞苗2头份,母猪产后28 d跟胎免疫的方法效果最差,不宜推广应用。通过对山西一些规模化种猪场猪瘟免疫情况的调研,基本查清了规模化种猪场猪瘟免疫效果和最佳免疫方法,可为养猪场防控猪瘟提供依据。     

Protective activity of the purified protein antigen of Erysipelothrix rhusiopathiae in pigs

We purified the protein antigen (P64), which contains 66 and 64 kDa proteins, from the alkaline extract (AE) of whole cells of Erysipelothrix rhusiopathiae strain Agata (serovar 5) to determine the protective activity of the antigen against E. rhusiopathiae infection in pigs. The serum titre of antibody against P64 rapidly increased in pigs immunized with 500 and 100 micrograms of P64 and reached maximum values at 3 weeks after the first immunization (1 week after the second immunization). However, the serum antibody titres were not increased in pigs immunized with 20 micrograms of P64 and in nonimmunized pigs. In the pigs immunized with live cell vaccine (acriflavin-fast attenuated strain Koganei 65-0.15), the serum titres of antibody against P64 also increased at 1-2 weeks after immunization. In a pig challenge test performed on immunized and nonimmunized pigs, all nonimmunized pigs showed typical clinical signs of swine erysipelas (fever, erysipeloid, arthritis), while all pigs immunized with 500 and 100 micrograms of P64 and live cell vaccine showed no clinical signs of this disease. In Western blot analysis, sera from pigs immunized with P64 and live cell vaccine strongly reacted with the 64 kDa protein. In contrast, the serum from nonimmunized pigs did not react with any proteins. From these results, it was suggested that a specific antibody against the 64 kDa protein could be increased in pigs immunized with P64 or live cell vaccine and that this anti-P64 antibody has a strong protective effect against E. rhusiopathiae infection in pigs.     

两种不同猪瘟疫苗对育肥猪的免疫效果比较

为比较猪瘟疫苗E2基因工程亚单位疫苗和猪瘟活疫苗对育肥猪免疫效果和生产成绩的影响,以便为规模猪场在选择猪瘟疫苗时提供参考。本试验从汉中某代养场选取了一批健康的断奶仔猪分成三组,A组免疫猪瘟E2基因工程亚单位疫苗（简称E2亚单位疫苗）,B组免疫猪瘟活疫苗（脾淋源）,C组为对照组不做猪瘟疫苗免疫。免疫60 d后各组随机抽取10、15和12份血样用猪瘟病毒抗体检测试剂盒检测猪瘟抗体水平。结果表明接种的两种猪瘟疫苗对育肥猪的免疫效果差异极显著（P<0.01）,其中E2亚单位疫苗相比于猪瘟活疫苗能够明显提高育肥猪抗体阻断率和降低离散度,并且有助于育肥猪的健康生长。     

猪瘟病毒石门株NS3蛋白的原核表达及其抗体检测间接ELISA的建立

为配合猪瘟新型疫苗的研发,建立了猪瘟病毒NS3蛋白抗体检测间接ELISA,以期达到有效区分新型疫苗免疫猪与自然感染猪(包括常规疫苗接种猪)的目的。以接种猪瘟病毒(CSFV)石门株的PK-15细胞为模板提取总RNA,经特异性PCR扩增获得长度为2 049bp的CSFV NS3基因,将其克隆至插入了具有自聚集自切割功能短肽的原核表达载体pET-32a(+),在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中优化表达CSFV石门株NS3基因。Western blot分析表明重组蛋白NS3具有反应原性。将纯化的重组蛋白NS3作为包被抗原建立检测CSFV NS3抗体的间接ELISA,以美国爱德士(Idexx)猪瘟病毒抗体检测试剂盒抗体检测结果为标准,对502份血清样品进行检测。结果表明,所建立方法的特异性为96.9%,敏感性为89.7%,总符合率为95.8%,为猪瘟新型疫苗的推广应用提供了血清学检测方法。     

The influence of maternal immunity on the efficacy of a classical swine fever vaccine against classical swine fever virus,genogroup 2.2, infection

In Thailand, where vaccination is routinely employed, there has been an increased incidence of chronic classical swine fever (CSF) outbreaks during the past decade. The major causative virus has been identified to be the moderate virulence, classical swine fever virus (CSFV) of the genogroup 2.2. An investigation was made into the efficacy of a CSF vaccine against this genogroup 2.2 challenge. Five-week-old pigs, grouped by their level of passive antibody titer were immunized with lapinized Chinese-strain CSF vaccine and challenged with CSFV genogroup 2.2, 13 days after vaccination. The group containing passive titers of lower than 64 at the time of immunization, had significantly higher number of CSFV-specific IFN-gamma secreting cells and was completely protected against the challenge. Interestingly, both cellular and antibody responses were inhibited in the pigs with the higher passive titer. Furthermore, following challenge, CSFV could be isolated from 50% of the pigs in this group. It was demonstrated that the CSF vaccine could induce complete protection in pigs, provided that the maternal derived titer at the time of vaccination was lower than 64. The result implied that an increase in CSFV outbreaks might be due to the inappropriate timing of vaccination as well as the nature of the CSFV genogroup 2.2.     

表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒对猪的免疫效力评价

为了进一步验证含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒（rAdV—E2）在猪体上的免疫效力,将rAdV—E2按108TCID50／头接种猪2次,同时用野生型腺病毒wtAdV作为阴性对照,当抗体上升到一定程度后用致死剂量的猪瘟强毒石门株进行攻击。结果表明,rAdV—E2免疫组（n=5）所有免疫猪在加强免疫后均产生了猪瘟特异性中和抗体,并于加强免疫后3w达到峰值,攻毒后所有猪只抗体迅速升高,除了一头猪短期体温升高外,未出现任何其它临床症状;而野生型腺病毒wtAdV免疫组（n=5）猪只在攻毒前一直没有检出特异性抗体,攻毒后全部出现典型的猪瘟临床症状和严重的病毒血症,剖检时可见典型猪瘟病理变化。这表明构建的猪瘟病毒E2基因重组腺病毒rAdV—E2免疫猪后产生了很好的免疫效果,有望成为具有开发价值的活载体疫苗。     

猪瘟野毒感染抗体阻断ELISA检测方法的建立与初步评价

以猪瘟野毒E2蛋白为包被抗原、辣根过氧化物酶标记的猪瘟野毒单抗作为酶标抗体,建立检测猪瘟野毒抗体的阻断ELISA方法。猪瘟野毒E2最适包被浓度为0.03μg/mL,待检血清最适稀释度为1∶4,酶标猪瘟野毒单抗稀释度为1∶1 000。用建立的阻断ELISA方法检测369份临床阴性血清,计算阻断率,确定临界值,阻断率>40%为猪瘟野毒抗体阳性,阻断率≤40%为猪瘟野毒抗体阴性。用建立的ELISA方法检测84份血清,其中78份为免疫猪瘟疫苗的血清,6份为猪瘟病毒感染血清。结果显示,78份免疫血清均检测为猪瘟野毒抗体阴性,6份猪瘟感染血清均检测为猪瘟野毒抗体阳性。因此可初步判定该方法可用于鉴别诊断猪瘟病毒自然感染动物和C株疫苗免疫动物的血清抗体,并为临床检测猪瘟野毒抗体提供便捷、快速,精准的检测工具,对猪瘟的临床诊断、预防以及猪瘟净化工作具有非常重要的参考意义。     

猪瘟疫苗在猪圆环病毒2型阳性猪场的免疫效果观察

为了研究猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪瘟疫苗免疫效力的影响,对PCR证实为PCV-2阳性的试验猪进行猪瘟疫苗的免疫,分别在免疫后第1、3、7、14、21、28和63天对试验猪进行猪瘟病毒(CSFV)和PCV-2的抗体检测。检测结果表明PCV-2阳性猪在猪瘟疫苗免疫后均未能产生有效的CSFV抗体,从免疫猪的血液和内脏组织中也未能检测到CSFV核酸。虽然只能从1头PCV-2阳性猪的血清中检测到PCV-2抗体,但是却能从全部实验猪的淋巴结中检测到PCV-2的核酸。试验猪的病理组织学观察和白细胞计数也表明PCV-2阳性猪的淋巴结呈典型的PCV-2感染的病理变化,且白细胞数量显著低于健康猪。表明PCV-2的感染会对猪的免疫系统造成损害从而抑制猪瘟疫苗的免疫效果。     

三个厂家猪瘟活疫苗免疫效果比较试验

在同一条件下对3个厂家生产的猪瘟细胞源活疫苗进行了免疫效果评价试验,并与猪瘟传代细胞苗免疫效果进行比较。结果发现3个厂家生产的猪瘟细胞源活疫苗存在一定差异,2个厂家的免疫效果较好,1个厂家的免疫效果较差。猪瘟传代细胞苗免疫效果优于猪瘟细胞源活疫苗,猪瘟传代细胞苗免疫1次,抗体合格率高,持续时间长,猪瘟细胞源活疫苗要免疫两次才能获得比较好的效果。同时,我们发现高致病性猪蓝耳病活疫苗（JXA1-R株）对猪瘟抗体产生有一定影响。     

不同年龄猪群中猪瘟抗体监测及免疫效果分析

为制订合理的猪瘟免疫程序,本研究采用正向间接血凝试验(IHA)对某规模化猪场进行猪瘟免疫监测和分析。结果表明:猪瘟母源抗体的合格率、抗体效价平均值均存在随着仔猪日龄的增长而呈逐渐下降的趋势;35 d～40 d仔猪母源抗体的合格率达78.79%、抗体平均效价为5.97 Log2;仔猪35 d～40 d实施猪瘟首免,其一免抗体合格率和抗体效价均比20 d首免有所提高;同一窝仔猪的猪瘟母源抗体,有11%窝次的猪差距在3个～8个滴度;母猪猪瘟免疫抗体的合格率,一胎母猪稍低,其它经产母猪基本接近;猪瘟抗体效价的平均值随胎龄增加而升高,并且抗体的离散度则随胎龄增加而缩小。因此,在母猪实施与仔猪同时免疫的猪场,40日龄左右是较佳的首免日期。