Protective efficacy of an H5/H7 trivalent inactivated vaccine produced from Re-11, Re-12, and H7-Re2 strains against challenge with different H5 and H7 viruses in chickens

We developed an H5/H7 trivalent inactivated vaccine by using Re-11, Re-12, and H7-Re2 vaccine seed viruses, which were generated by reverse genetics and derived their HA genes from A/duck/Guizhou/S4184/2017(H5 N6)(DK/GZ/S4184/17)(a clade 2.3.4.4 d virus), A/chicken/Liaoning/SD007/2017(H5 N1)(CK/LN/SD007/17)(a clade 2.3.2.1 d virus), and A/chicken/Guangxi/SD098/2017(H7 N9)(CK/GX/SD098/17), respectively. The protective efficacy of this novel vaccine and that of the recently used H5/H7 bivalent inactivated vaccine against different H5 and H7 N9 viruses was evaluated in chickens. We found that the H5/H7 bivalent vaccine provided solid protection against the H7 N9 virus CK/GX/SD098/17, but only 50–60% protection against different H5 viruses. In contrast, the novel H5/H7 trivalent vaccine provided complete protection against the H5 and H7 viruses tested. Our study underscores the importance of timely updating of vaccines for avian influenza control.     

鸡流行性腹泻病原的分离鉴定及特性研究

用胰蛋白酶处理发病鸡的粪便和肠内容物，接种Marc145细胞，盲传数代后，从山东不同地区发生流行性腹泻的鸡群中分离到轮状病毒，并对分离的轮状病毒的生物学特性和理化特性进行了部分研究。结果表明病毒粒子的形态呈车轮状、大小为70-80nm；其病毒基因组的电泳图谱为5：1：3：2；病毒在Marc145细胞上传到第9代时的TCID50为10^-4.62／0．1mL；该分离株病毒对氯仿、乙醚有抵抗力；对pH3．0处理60min稳定；50℃ 30min能使其感染力下降10^2；1mol／L MgCl2不能增强其对50℃ 60min的抵抗力。动物回归试验中接种两周龄SPF鸡，24h后陆续发病，表现为持续性水样腹泻，与自然发病相同；剖检可见病鸡脱水、小肠内有大量的液体和气泡、肠粘膜变薄；组织学变化为肠绒毛上皮坏死、脱落，绒毛平均长度减少而隐窝深度增加，固有层中淋巴细胞浸润。其临床症状及病理组织学变化与自然发病相同。因此确定发生在山东鸡流行件腹泻的病原为轮状病毒．     

法氏囊活性肽在大肠杆菌中的克隆与表达

法氏囊活性肽（Bursin,BS)作为一种免疫增强剂，临床应用广泛，为了大量制备BS，按大肠杆菌惯用密码子合成BS基因。并用色氨酸将5个BS基因串联，克隆于质粒pU57的SmaI位点，经测序证明序列正确后，以PCR扩增，克隆于表达载体pBV220的EcoRI,HinDⅢ位点，温敏诱导表达，其表达水平占全菌总蛋白的13.4%。     

从腹泻金黄地鼠中分离出致病性大肠杆菌

从腹泻金黄地鼠中分离到 3株细菌 ,经染色镜检、生化反应鉴定和动物试验确证 :该菌为大肠杆菌。该试验为地鼠大肠杆菌的防制提供了流行病学资料与理论依据。     

免疫剂量和母源抗体对禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫效力的影响

利用表达 H 5亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素基因的重组鸡痘病毒 (r FPV- HA)以不同剂量免疫 1日龄 SPF鸡、有或无母源抗体 (FPV、AIV H5)的商品鸡 ,并于免疫后 2 1d利用同亚型 AIV通过肌肉注射进行致死性攻击 ,通过检测免疫后 HI抗体应答、比较攻毒后发病率和死亡率评价免疫剂量和母源抗体对 r FPV- HA免疫效力的影响。结果发现 ,免疫后 2 1d,15 %～ 2 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可检出 HI抗体 ,而含母源抗体商品鸡检测不到 HI抗体。利用H5亚型 AIV致死性攻击后 ,10 3～ 10 6 PFU的 r FPV- HA可保护 95 %～ 10 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡抵御强毒攻击 ,使之免于发病和死亡 ;而不同剂量 r FPV- HA接种的含母源抗体商品鸡有 80 %～ 90 %发病和死亡。结果表明 ,在较宽的免疫剂量范围内 ,r FPV- HA对 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可提供良好的保护 ,显示出一定的应用前景 ;母源抗体影响 r FPV- HA诱导的免疫应答 ,且提高免疫剂量亦不能克服其干扰作用 ,这提示在实际应用中需优化免疫程序 ,避免母源抗体干扰。     

八种中草药体外抑制大肠杆菌的效果观察

选取马尾松、田基黄、艾草、雷公根、芭蕉芯、浮萍、野菊花、番石榴叶8种中草药，采用常规中草药药敏试验打孔法和试管法对猪大肠杆菌（K88）、大肠杆菌（0157）进行体外抑菌试验。结果显示，艾草、野菊花、番石榴叶对大肠杆菌呈高度敏感，其中艾草对大肠杆菌抑菌力最强；马尾松挥发油对大肠杆菌呈中度敏感；田基黄、雷公根、芭蕉芯、浮萍对大肠杆菌无抑菌作用。     

抗禽流感病毒H5和H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制及应用

以禽流感题H5和H9亚型病毒分别免疫Balh／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0的骨髓瘤细胞融合，用血凝抑制试验(HI）检测细胞培养上清，结果获得了6株特异性单克隆抗体，其中抗禽流感题亚型病毒血凝素特异性单克隆抗体细胞株3株，分别命名为4B6、4A3、3H1；抗H9亚型病毒血凝素单克隆抗体细胞株3株，命名为6E6、6B6和5B4。这些单克隆抗体小鼠腹水HI效价为2^13-15，细胞培养上清抗体HI效价为2^7-8。研究结果表明，所有这些单克隆抗体仅与试验的相应题或ID亚型病毒株发生特异性反应，而不能与鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒、鹅腺病毒和鸡产蛋下降综禽征病毒(EDS76)等反应。实验室检测结果证明，应用这些单克隆抗体能在24h内迅速检测出相应的禽流感病毒。所有这些单克隆抗体将在禽流感的预警预报工作中发挥重要作用。     

安徽省鸡常见病毒性肿瘤病的检测与调查

应用已建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断技术对源自安徽省5个不同地区的46个鸡群的肿瘤病、抑制病疑似病、死鸡305羽进行检测。结果表明,马立克氏病的阳性率为39．34%(120/305),禽网状内皮组织增生征阳性率为8．52%(26/305),禽白血病阳性率为2．624%(8/305)；另对17群未进行MD免疫的肉鸡进行随机抽样检测,其中5个鸡群检测出马立克氏病病毒强毒,阳性率为29．41%(5/17),阳性群的平均检出率为24 %。     

鸡源株与人源株H9N2流感病毒血凝素受体结合位点氨基酸比较与分析

H19N2病毒可以感染多种禽类和哺乳动物，包括人类。流感病毒血凝素受体结合位点的氨基酸可以影响受体结合特性。为了解鸡源株与人源株H19N2病毒受体结合部氨基酸的差异，作者对二者进行了比较与分析，结果表明，鸡源株与人源株血凝素受体结合部位氨基酸的第137、183、190、226位点存在差异，鸡源株在这些位点分别为K、N、AorVorT、LorQ而人源株则分别为R、H、E、L。虽然尚不清楚这些位点的改变对病毒与细胞亲和力及宿主范围的影响，但由于H9N2在我国养鸡业的普遍存在，加强H9N2病毒的分子流行病学监测有重要意义。     

鸡致病性大肠杆菌I型菌毛交叉保护性研究及其结构基因 FimA 的序列分析

从山东省各地分离到107株鸡致病性大肠杆菌，选择了其中2株高致病性大肠杆菌，血清型分别为O78和OM，经增菌培养后提取菌毛制备为单价菌毛油乳苗，分别接种于1日龄和14日龄雏鸡，于4周龄攻毒。结果二者之间有一定的交叉保护作用。根据Genbank收录的人源大肠杆菌I型菌毛FimA基因和P型菌毛papA基因序列，分别设计了2对引物。通过PCR对上述2株大肠杆菌进行扩增，结果只有FimA的一对引物扩增出相应的条带，经测序证明为FimA基因。papA基因的引物未扩出任何条带，证明这2株大肠杆菌表达I型菌毛。通过对2株大肠杆菌结构基因FimA进行分析，发现二者具有高度的同源性。本研究的目的是探讨菌毛亚单位之间的交叉保护性与其菌毛的结构基因之间是否存在相关性。