猪细小病毒基因组特性的研究

<正>猪细小病毒(PPV)属于细小病毒科细小病毒属的成员。猪细小病毒病是由PPV引起的以胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身无明显症状的一种母猪繁殖障碍性传染病。1967年,Carteright等对猪的不孕、流产、死产等进行病原学研究时首次报道了本病,并从猪的流产胎儿中分离到PPV。目前,此病在世界范围内广泛流行,是造成母猪繁殖障碍的主要病因之一。探究猪细小病毒的基因组特性对临床上防治该病毒的感染起到了至关重要的作用。最近30多年来,猪群中一直使     

猪伪狂犬病病毒（PRV-JL 株）的分离与鉴定

从吉林某猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中分离出1株病毒，感染猪以后病理变化明显，经幼仓鼠肾传代细胞系（BHK-21）接种、毒价测定、病毒形态观察、PCR扩增及相关动物试验证实为猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒，并命名为PRV-JL。经BHK-21接种，病毒生长良好；毒价稳定，可达10-7.59/0.2 mL；电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观，无囊膜的病毒粒子直径约110-150 nm，有囊膜的成熟病毒粒子直径约150-180 nm；PCR鉴定该毒株为强毒，其gE序列与Genbank登录的PRV gE序列同源性为99%-100%；本研究构建了小鼠的感染模型，并进行了病毒载量检测，结果用不同剂量病毒培养物接种Balb/C小鼠，小鼠死亡明显，最初在其脑组织中检测到PRV病原，随后在肾、肺、心逐步检出，试验初步证实了PRV的脑组织嗜性。试验表明， PRV-JL是1株强毒，对易感动物具有高致病性，为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定基础。     

猪瘟疫苗在猪场的免疫评估

在生猪养殖过程中,猪瘟属于常见疾病,具有较强的传染性,所以疫苗免疫成为防控猪瘟的关键措施。制定科学合理的免疫程序对猪瘟防控尤为重要。但实际生产中,猪场免疫效果,并不是太乐观,需要不断优化免疫程序。利用先进的试剂盒技术来及时检测猪瘟疫苗的免疫效果,以便及时调整疫苗使用种类,不断优化免疫程序,减少经济损失。     

猪细小病毒灭活疫苗安全性试验及佐剂的筛选

本研究以猪细小病毒(PPV)现地分离株(BQ)第30代细胞培养毒株作为灭活疫苗研究用种毒,通过优化病毒增殖条件和培养方法,获得较高滴度的病毒传代细胞培养物用于PPV灭活疫苗的制备.PPV细胞培养毒株分别用甲醛和β-丙内酯进行灭活,对2种灭活剂灭活的病毒液分别用国产铝胶佐剂、进口矿物质白油佐剂以及法国赛比克公司的MONTANIDETM ISA 206、ISA15AVG、IMS251CVG 3种佐剂制备10种灭活疫苗,然后分别进行10日龄乳鼠、60日龄仔猪、不同妊娠阶段母猪的安全性试验及成年豚鼠的免疫效果对比试验.通过比较不同灭活疫苗的安全性和对成年豚鼠的免疫效果,初步确认甲醛灭活的病毒液与佐剂ISA15AVG的组合为PPV灭活疫苗的最佳灭活剂和佐剂组合.     

抗猪细小病毒单克隆抗体的制备

为了建立一种快速准确的猪细小病毒(PPV)病诊断体系,本研究制备了抗PPV的单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株.将PPV免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,用ELISA方法筛选,得到8株分泌抗PPV MAb细胞株,这8株MAb亚类均为IgG1,轻链均为κ型.交叉实验等特异性分析发现这些MAb只特异地与PPV发生反应,而不与猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)等发生交叉反应.将杂交瘤细胞注射BALB/c小鼠制备的腹水抗体效价介于1:2 560～1:20 480之间.Western blot结果显示,8株MAb中2株针对VP1发生反应,5株针对VP2、VP3发生反应,但其中有1株呈阴性反应,该MAb可能识别的是PPV的构象表位.     

猪RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立定量检测猪Ⅰ型干扰素信号传导因子mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪Ⅰ型干扰素信号传导因子视黄酸诱导基因-1 (RIG-1)、Toll样受体-9(TLR-9)、干扰素调节因子-3(IRF-3)和干扰素调节因子-7 (IRF-7)的基因序列设计了特异性的引物和探针,分别构建了各自的阳性标准重组质粒,同时选择β -actin作为管家基因,建立了检测猪RIG-1、TLR-9、IRF-3、IRF-7的Taq Man荧光定量PCR方法.结果表明:所建立的检测方法荧光定量PCR扩增均无非特异性产物产生;检测下限均达1.0×101 copies/μL;批内及批间变异系数均小于3％.利用该方法对猪细小病毒(PPV)感染48 h的ST细胞中RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA的表达水平进行了检测.结果表明,RIG-1、IRF-3和IRF-7转录水平呈现上调趋势,而TLR-9转录水平呈现下调趋势.本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适于猪Ⅰ型干扰素信号传导因子的定量检测分析.     

规模化猪场减少非活健仔数的综合措施

规模化猪场生产的成败取决于平均每头基础母猪年提供商品肉猪头数,其关键源头是平均每头母猪年提供的健仔数;如果一头母猪没有生产较多的健仔数,将直接影响肉猪的出栏数量。因此,     

用LSAB免疫组化染色法检测猪生殖-呼吸道综合征病毒抗原的研究

本研究在国内首次成功建立了辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素-生物素（LSAB）免疫组化染色法检测猪生殖-呼吸道综合征病毒（PRRSV）抗原。应用LSAB染色技术检测12头人工感染PRRSV美洲株（ATCCVR-2332）或国内分离株（B96-4，B96-5）的SPF仔猪组织细胞内的PRRSV抗原，阳性检出率为100％。LSAB免疫组化染色法操作简单、灵敏度高、特异性强，结果清晰、稳定、重复性好，是一种检测组织细胞内PRRSV抗原的有效方法。     

潜藏巨大散毒隐患

导读 由于自家苗在制备过程中不能对病毒进行彻底的灭活，因此在使用过程中很容易导致病原体的进一步传播，使传染原扩大。自家苗中未灭活的细菌或病毒达到一定数量，就可能造成这些病原体在动物群中的流行，而且这种流行属于人工感染后的流行，病原体的致病力比自然感染时更强，也更难以控制，由此形成恶性循环。自家苗灭活不全的另一个最大害处，就是导致猪群产生免疫耐受。低剂量的病毒感染是免疫耐受的重要诱因。如果用于制作自家苗的病料中含有少量猪瘟等能够引起猪群免疫耐受的病原体，这些病毒含量低至不足以引起疾病的流行，但却可能诱导猪群产生免疫耐受，使病毒在．猪群中持续存在，呈非典型流行或散发流行。[编者按]     

禽流感与养禽业发展and人类健康

禽流行性感冒 (简称禽流感， Avian Influenza,AI)被国际兽疫局定为 A类传染病，同时被列入国际生物武器公约动物类传染病名单，是由 A型流感病毒引起的禽类的烈性传染病，可表现为亚临诊到轻度的呼吸系统疾病、产蛋下降到急性致死性疾病等多种形式。在禽流感发现后的一百多年中，世界各地都有特定毒株引起的禽流感暴发和流行，造成了巨大经济损失。禽流感在我国鸡群出现的时间虽短，但已经并正在给我国养禽业造成巨大经济损失，很可能成为下个世纪威胁我国养禽业的头号大敌。禽流感历来被认为是人流感病毒发生变异的新基因来源， 1997年…