日本乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

采用日本乙型脑炎病毒单克隆抗体预包被酶标板,将纯化的日本乙型脑炎病毒(JEV)作为检测用抗原,利用包被捕获法建立了用于检测猪乙型脑炎抗体的间接ELISA法。采用建立的ELISA法对50份已知阴性血清样本检测,临界OD450nm值为0.343,ELISA与IFA对200份血清进行平行检测,总符合率为92.9%,与商品化的同类国产试剂盒的符合率为95%。与其他常见的猪病毒阳性血清抗体无交叉反应,2~8℃保存12个月稳定。研制的ELISA抗体检测试剂盒为临床JEV血清抗体检测及其疫苗的免疫效果评价提供了技术手段。     

免疫小鼠血清中猪圆环病毒2型抗体ELISA检测试剂盒的研究

为研制一种小鼠血清中猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）抗体检测试剂盒,以PCV2 Cap蛋白兔多抗作为包被用抗体,捕获纯化的PCV2 Cap蛋白,制备抗原检测板,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗小鼠IgG作为二抗,建立检测小鼠血清中PCV2抗体ELISA检测方法并制备试剂盒。采用所制备的ELISA试剂盒对50份已知阴性血清样本进行检测,临界OD450nm值为0335;采用ELISA试剂盒与IFA分别对100份血清检测,总符合率为96%,检测小鼠血清敏感性效价达1∶16000,与其他常见的猪病毒小鼠阳性血清无交叉反应,2～8 ℃保存15个月稳定,批内变异系数为2.28%～4.17%,批间变异系数为4.27%～6.02%,具有良好的敏感性、特异性、稳定性及重复性;采用ELISA试剂盒对不同来源疫苗免疫组小鼠血清进行检测,均显示良好效果。研究表明,本研究制备的ELISA试剂盒可用于小鼠血清中PCV2抗体效价检测。     

一株猫疱疹病毒Ⅰ型（FHV-1）的分离鉴定及攻毒模型建立

从一只临床表现为流脓涕、打喷嚏的猫身上分离出一株猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type Ⅰ,FHV-1),使用F81细胞进行分离,并通过PCR、透射电镜和糖蛋白D(gD)基因序列分析来鉴定病毒。通过PCR方法从猫的鼻分泌物中扩增出1125 bp的gD基因。序列分析表明,该分离株与从GenBank获得的其他FHV-1毒株属于同一家族。随后在接种猫鼻分泌物的F81细胞的培养上清中观察到有包膜和直径约120 nm左右的疱疹样病毒颗粒。将分离获得的FHV-1病毒感染2～3月龄蓝猫,成功建立动物实验模型,感染后的猫出现脓性的眼鼻分泌物,打喷嚏等临床症状,且一周内持续排毒。该分离株为FHV-1的病原学研究提供了重要的数据,也为猫鼻气管炎疫苗候选株的筛选和疫苗的研发奠定了基础。     

猪δ冠状病毒胶体金试纸条检测方法的建立

为建立一种方便、快捷、实用的检测猪δ 冠状病毒(PDCoV)方法,本研究利用原核表达猪δ 冠状病毒N 蛋白,以纯化的N 蛋白免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤细胞技术研制2株分泌PDCoV N 蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为E8、A10。2株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体敏感性及特异性良好,E8亚类为IgG2a,A10亚类为IgG1。以E8作为金标抗体,A10作为检测抗体,兔抗鼠作为质控线抗体,制备猪δ 冠状病毒胶体金检测试纸条,检测猪δ 冠状病毒敏感性为100TCID50,检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪δ 冠状病毒阴性对照均为阴性。本研究建立的胶体金试纸条检测方法敏感性及特异性良好。该检测方法的建立,为猪δ 冠状病毒(PDCoV)流行病学调查提供一种方法,同时为规模化养殖集团及基层兽医组织提供一种检测猪δ 冠状病毒产品。     

抗猪细小病毒单克隆抗体的制备

为了建立一种快速准确的猪细小病毒(PPV)病诊断体系,本研究制备了抗PPV的单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株.将PPV免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,用ELISA方法筛选,得到8株分泌抗PPV MAb细胞株,这8株MAb亚类均为IgG1,轻链均为κ型.交叉实验等特异性分析发现这些MAb只特异地与PPV发生反应,而不与猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)等发生交叉反应.将杂交瘤细胞注射BALB/c小鼠制备的腹水抗体效价介于1:2 560～1:20 480之间.Western blot结果显示,8株MAb中2株针对VP1发生反应,5株针对VP2、VP3发生反应,但其中有1株呈阴性反应,该MAb可能识别的是PPV的构象表位.     

模拟超高温法检测原料奶中蛋白质稳定性的研究

采用模拟超高温法检测原料奶中蛋白质的稳定性,以此来评价原料奶的质量。抽取原料奶A类13份、B类30份和C类128份,分别置于模拟超高温试验机上,在138℃的条件下处理6min,出现絮片者为阳性,蛋白质不稳定;无絮片者为阴性,蛋白质稳定。结果显示,A、B和C类原料奶的阳性数量分别为0、6和33。说明A类原料奶与阴性的B、C类原料奶都可以用于生产纯牛奶,阳性的B和C类原料奶可以用于生产酸奶。     

猪繁殖与呼吸综合症病毒单克隆抗体的制备和鉴定

以猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）作为免疫原,免疫BALB／c小鼠,经间接ELISA、IPMA和IFA试验进行杂交瘤筛选,共获得2株能分泌针对PRRSV单克隆抗体（简称单抗）的杂交瘤细胞株,分别命名为3D10和4H11,3D10亚类为IgG1,4H11亚类为IgG2b,单抗腹水的间接ELISA效价均达到1．0×10^7,染色体数目介于90～110之间。2株单抗与猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应,IPMA和IFA结果显示单抗均能与接种于猴肾细胞（Marc145）的PRRSV发生特异性反应,证实抗PRRSV单抗具有良好的特异性和敏感性,为PRRSV抗原表位分析及相关抗原抗体诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

用狂犬病毒单克隆抗体预包被酶标板,将纯化的狂犬病毒作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于犬狂犬病病毒抗体的检测。通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于犬狂犬疫苗的免疫效果检验。利用研制的试剂盒与RFFIT、商品化同类试剂盒对30份犬血清进行平行检测,总符合率分别为90%和93.33%,与其它几种常见犬病毒抗体阳性血清无交叉反应。试剂盒批内、批间变异系数分别为1.45%～5.79%和2.35%～7.21%,2～8℃保存12个月稳定。基于用单抗预包被后再包被检测抗原,本试剂盒检测样品抗体的灵敏度和稳定性得以显著提高,因此适合于不同来源狂犬疫苗人工免疫犬血清的RV抗体水平监测。     

猪细小病毒的分子特征、流行现状、诊断与疫苗

<正>猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)属于细小病毒科细小病毒属,除了引起母猪的繁殖障碍性疾病外,PPV也与猪渗出性皮炎和断奶仔猪多系统衰弱综合征(Post-weaning multistemic wasting syndrome,PMWS)有关。该病毒最早由Mary和Mahncl于1966年发现,     

血清1型鸭甲型肝炎病毒实时定量PCR检测方法的建立与初步应用

为建立了一种可检测血清1型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-1）的实时定量PCR方法,根据GenBank中DHAV-1 5,非编码区的保守区,设计合成1对引物和1条TaqMan探针,以构建的重组质粒作为标准品,绘制标准曲线,并对所建立方法进行了特异性、敏感性和可重复性试验以及临床病料检测初步应用。结果,该方法与血清3型鸭甲型肝炎病毒、鸭瘟病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、呼肠孤病毒、传染性支气管炎病毒等无交叉反应性;最低可以检测到10copies/μL;组内和组间变异系数均小于3%;临床病料的检测结果与测序检测结果一致。结果表明,所建立的实时定量检测方法具有特异、敏感、稳定等优点,可用于DHAV-1的快速检测与定量分析。