| 猪RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 王晓玲,蔺文成,刘芹防,崔尚金.猪RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J].中国预防兽医学报,2011,33(12). |
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| 作者姓名： | 王晓玲 蔺文成 刘芹防 崔尚金 |
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| 作者单位： | 1. 青岛农业大学动物科技学院,山东 青岛 266109;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 猪传染病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001
2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 猪传染病研究室,黑龙江 哈尔滨,150001 |
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| 摘 要： | 为建立定量检测猪Ⅰ型干扰素信号传导因子mRNA的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究针对猪Ⅰ型干扰素信号传导因子视黄酸诱导基因-1 (RIG-1)、Toll样受体-9(TLR-9)、干扰素调节因子-3(IRF-3)和干扰素调节因子-7 (IRF-7)的基因序列设计了特异性的引物和探针,分别构建了各自的阳性标准重组质粒,同时选择β -actin作为管家基因,建立了检测猪RIG-1、TLR-9、IRF-3、IRF-7的Taq Man荧光定量PCR方法.结果表明:所建立的检测方法荧光定量PCR扩增均无非特异性产物产生；检测下限均达1.0×101 copies/μL；批内及批间变异系数均小于3％.利用该方法对猪细小病毒(PPV)感染48 h的ST细胞中RIG-1、TLR-9、IRF-3和IRF-7mRNA的表达水平进行了检测.结果表明,RIG-1、IRF-3和IRF-7转录水平呈现上调趋势,而TLR-9转录水平呈现下调趋势.本研究建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,适于猪Ⅰ型干扰素信号传导因子的定量检测分析.
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| 关 键 词： | Ⅰ型干扰素 信号传导因子 荧光定量PCR 检测 |
Development of TaqMan quantitative real-time PCR assay for detection of porcine RIG-1, TLR-9, IRF- 3 and IRF-7 |
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| WANG Xiao-ling,LIN Wen-cheng,LIU Qin-fang,CUI Shang-jin.Development of TaqMan quantitative real-time PCR assay for detection of porcine RIG-1, TLR-9, IRF- 3 and IRF-7[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2011,33(12). |
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| Authors: | WANG Xiao-ling LIN Wen-cheng LIU Qin-fang CUI Shang-jin |
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| Institution: | WANG Xiao-ling1,2,LIN Wen-cheng2,LIU Qin-fang2,CUI Shang-jin2(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine,Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China,2.Division of Swine Infectious Disease,State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology,Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150001,China) |
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