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用RT-PCR法,以1株h5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA.将cDNA克隆于pMD18-T载体,并对其进行测序.测序结果表明所克隆的1542个核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸.将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92.5%~95.9%,编码的氨基酸同源性为97.0%~98.4%.本研究通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系. 相似文献
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为建立蜜蜂黑色王台病毒RT-qPCR检测方法,以蜜蜂黑色王台病毒(BQCV)衣壳蛋白基因部分序列作为目的基因,构建标准质粒并作为模板,建立标准曲线,且对所建立方法的灵敏度和特异性进行分析。结果表明:所建立的RT-qPCR检测方法,扩增效率E=1 08%,可信度R2=0.997。该方法灵敏度高,最低检出量为101个拷贝;该方法特异性强,仅能检出BQCV,而不能检测出蜜蜂囊状幼虫病毒、畸翅病毒。以上结果表明已成功建立了针对BQCV灵敏、特异的RT-qPCR检测方法。 相似文献
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为了解云南省部分地区规模化猪场种公猪精液繁殖障碍病毒性病原的感染状况,应用PCR对2014年—2016年间云南省部分地区规模化猪场212份种公猪精液进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)5种与猪繁殖障碍有关的病原检测。结果表明,PPRSV阳性率为7.08%,CSFV阳性率为3.77%,PCV2阳性率为6.60%,PRV阳性率为3.30%,没有检测出PPV,PRRSV和PCV2的感染率呈上升趋势,其他疫病保持相对平稳态势。所有的混合感染样品中,均检测出了PRRSV,其中PRRSV和PCV2的混合感染最为常见。结果提示,控制猪场疫病发生的关键是控制PRRSV和PCV2的流行,有必要加强对种猪群的疫病病毒检测,推行种猪场主要疫病的控制与净化工作。 相似文献
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云南地区部分猪场猪呼吸道疾病综合征致病病毒感染的流行病学调查 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解云南地区猪场猪呼吸道疾病的流行病学,从而为有效防制该疾病提供科学依据,利用ELISA和RT-PCR方法检测了春、夏、秋、冬四季,云南地区不同区域规模养殖场1 164份血清和全血样品中的猪瘟抗原、猪繁殖与呼吸综合征抗原、猪伪狂犬gE抗体、猪圆环病毒2型特异抗体。结果显示:猪瘟抗原阳性率为11.34%,猪圆环病毒2型抗体阳性率为50.86%,猪伪狂犬病病毒gE抗体阳性率为35.40%,猪繁殖与呼吸综合征抗原阳性率为44.51%。表明云南地区规模化猪场存在猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病野毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒感染,不同季节和猪群年龄阶段感染情况有一定差异性。 相似文献
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PRRSV云南株的分离与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
从云南某猪场采取病料经RT-PCR检测为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS)阳性,将其处理后接种到猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞上。接种后3 d,猪肺巨噬细胞开始出现细胞病变(CPE);Marc-145细胞盲传3代后,细胞也出现了CPE。对出现CPE的细胞培养物,用RT-PCR法、间接免疫荧光试验进行检测,结果均为PRRSV阳性;细胞培养物经PEG初步浓缩后,接种到PRRSV阴性,PRV、CSFV抗体阳性的仔猪,15 d后猪只出现体温升高并伴有食欲减退,精神不振等症状。采血并用同上的RT-PCR法检测,结果为阳性;采血用同上的RT-PCR法检测,结果亦为阳性;用电镜对纯化后的病毒进行观察,可见有囊膜包裹的圆形病毒粒子,其直径约为50 nm;间接免疫荧光实验可见黄色荧光;TCID50测定其毒价为10-4.75/0.1 mL。该病毒对氯仿、紫外线、酸碱度变化(pH5.0或pH7.5)和热敏感;结果表明,已成功分离获得一株PRRSV云南地方流行毒株,命名为YN-1。 相似文献
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对昆明某犬场2例死亡犬的死亡原因进行实验室鉴定。采集犬肠内容物分别做细菌和病毒检测。细菌检测包括:犬肠内容物划线培养,纯化,分离,革兰氏染色,镜检,生化试验,血清试验,药敏试验。病毒检测包括:提取病料的总DNA,用犬细小病毒的特异引物进行PCR扩增,扩增产物经胶回收后克隆到pMD18-T载体,转化受体菌DH5α,挑取阳性克隆质粒进行序列测定,并与已知参考毒株序列进行比对,分析核苷酸的同源性。分离到一株有部分耐药性的侵袭性大肠埃希菌;检测到一株犬细小病毒,由引物P1/P2扩增的基因与参考毒株CPV-b同源性为98.58%,由引物P3/P4扩增的基因与参考毒株CPV-b同源性为92.1%。结果表明,2例死亡犬的死亡原因分别为侵袭性大肠埃希菌感染和犬细小病毒感染。 相似文献
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戊型肝炎病毒(HEV)研究多以灵长类动物为感染模型。由于灵长类动物价格昂贵,实验条件的控制和饲养管理较困难等原因,严重阻碍了HEV研究进展。本研究对应用树鼩(Tupaia belangeri)建立HEV感染模型的可行性进行了探索。从猪群中分离、鉴定HEV,经静脉注射途径感染树鼩,按计划采集粪便、血液以及器官组织,应用巢式RT PCR检测树鼩感染情况,观察感染后树鼩各器官组织病理学病化。结果发现,感染7d后血液、粪便、肝脏、小肠等样品可检测出HEV RNA,病毒血症持续约2周。组织病理学观察结果,人工感染HEV的树鼩肝脏可见静脉窦淤血、多发性淋巴细胞浸润、库普弗细胞增多等病变。研究结果表明树鼩对HEV具有易感性,感染后肝脏出现病毒性肝炎的病理学变化,具有作为戊型肝炎的感染模型的潜在价值。 相似文献
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通过皮下注射和饲料添加不同剂量二丁酰环腺苷酸(dbcAMP)进行饲养试验,研究其对猪生长和糖代谢调控的效果。结果表明:皮下注射1.0mg/kg和饲料添加20mg/kg为最佳调控剂量,在生长猪阶段,日增重分别提高13.61%和15.41%(P<0.05);料重比分别降低18.81%和19.10%(P<0.01);在肥育猪阶段日增重和料重比差异不显著(P>0.05)。肥育猪肝糖原含量分别降低27.32%和27.18%(P<0.05);肌糖原含量分别降低28.79%和31.79%(P<0.05)。血糖含量在生长猪和肥育猪阶段都明显提高(P<0.05)。证明dbcAMP对猪的生长性能和糖代谢有明显调控作用。 相似文献
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为了解动物源性金黄色葡萄球菌对市售常见的各种兽用抗生素药物的耐药情况,掌握并分析其耐药性,指导临床合理使用抗菌药物。本研究通过常规细菌分离鉴定患病动物炎性分泌物,对分离菌株进行生化试验、耐药性试验、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)鉴定和耐药基因鉴定,获得4株耐药金黄色葡萄球菌,2株为MRSA,2株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillinsusceptible S.aureus,MSSA);4株金黄色葡萄球菌均检测出tetA、aac(6')/aph(2')、sul1耐药基因,其中2株MRSA检测出mecA。MRSA与MSSA均表现出了多重耐药现象,其中MRSA比MSSA的耐药现象更为广泛。因此,要更加关注MRSA的流行情况,制定规范的用药行为,严控抗生素药物的滥用。 相似文献