北京油鸡快慢羽公鸡鉴定及羽毛发育、生长和繁殖性能的对比分析

试验通过开展快慢羽群体的鉴定,并对比其在羽毛发育、生长和繁殖性能方面的差异,旨在为北京油鸡种鸡选育和科学养殖提供数据支持。选用北京油鸡纯系公鸡,出雏时,按照主翼羽与覆主翼羽的羽长差值将其分为快慢羽亚群,其中快羽包括K1（主翼羽长于覆主翼羽>5 mm）和K2（主翼羽长于覆主翼羽2~5 mm）,慢羽包括M1（主翼羽与覆主翼羽等长或主翼羽长于覆主翼羽<2 mm）和M2（主翼羽短于覆主翼羽）和M3（主翼羽未长出）。1~7日龄每隔1 d测量1次主翼羽与覆主翼羽羽长,7~42日龄每隔1周测量1次;1~8周龄每周测量体重,9~18周龄每隔1周测定体重;10周龄时,观测公鸡全身羽毛发育情况;47周龄时,测定公鸡常规精液品质性状、精子动力学参数、受精率及孵化率。结果显示,快羽公鸡占北京油鸡公鸡总数的11.60%,慢羽占88.40%,慢羽又以M2型为主,有少量M1型和M3型。育雏育成期（1~18周）北京油鸡快慢羽公鸡各周龄体重均无显著差异（P>0.05）。在育雏育成期,慢羽公鸡主翼羽和覆主翼羽生长均慢于快羽公鸡。其10周龄时,背部和腿部羽毛生长完全的鸡的比例仅为44%,且不同类型的慢羽公鸡的比例也不一,其中等长型或微长型慢羽最高,超过90%,未长出型慢羽最低,仅为17%左右。47周龄时快羽鸡和慢羽鸡的常规精液品质无差异,但是快羽公鸡精子直线性显著高于慢羽鸡（P<0.05）,直线速率高于慢羽公鸡（P=0.06）,快羽北京油鸡公鸡受精率显著高于慢羽公鸡（P<0.05）,且入孵蛋孵化率和受精蛋孵化率有高于慢羽公鸡的趋势,但差异不显著（P>0.05）。本研究结果表明,快慢羽北京油鸡公鸡的羽毛生长和繁殖性能有一定差异,需要加强慢羽公鸡羽毛发育缓慢原因和鉴定方法的研究,也需加强慢羽公鸡精液品质选育。     

沐川乌骨黑鸡肌内脂肪沉积相关microRNAs的筛查与鉴定

试验旨在挖掘高肌内脂肪（IMF）含量和低IMF含量鸡胸肌中差异表达的microRNA（miRNA）（DEM）,以期从miRNA角度探究鸡IMF沉积的分子调控机制。以120只沐川乌骨黑鸡为研究对象,采用高通量测序分别完成3个IMF含量极高（H组）和极低（L组）鸡胸肌组织的miRNA测序,测序结果经生物信息学分析,鉴定H和L组中差异表达的miRNAs,随机选择6个miRNAs进行实时荧光定量PCR验证。IMF含量测定结果表明,每只鸡平均100 g胸肌中IMF含量为4.08 g,H和L组IMF含量存在极显著差异（P<0.01）;6个测序文库结果表明,每个测序文库获得Clean reads均超过10 000 000条,Clean reads占Raw reads的百分比>93%,21~23 nt的small RNA（sRNA）数量占总sRNA的百分比>50%,其中22 nt长度的sRNA所占比例最高,平均GC碱基含量为48.95%,获得的测序数据可靠;6个测序文库中sRNA注释为rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA以及重复序列的比例较低,分别为2.74%、1.85%、6.21%、1.58%、2.82%和2.81%;6个测序文库共鉴定已知miRNAs成熟体578个,miRNAs前体500个,鉴定差异表达的miRNAs 23个,其中H组中上调表达的miRNAs有16个,下调表达的miRNAs有7个;miRNA靶基因预测分析结果表明,23个差异表达miRNAs共预测靶基因628个;GO分析结果表明,共鉴定了30个显著富集GO条目,包括6个细胞成分、13个生物学过程和11个分子功能;KEGG富集分析表明,差异表达miRNA的靶基因显著富集于胰岛素信号通路、半乳糖代谢、脂肪细胞因子信号通路、鞘糖脂生物合成、糖酵解及淀粉和蔗糖代谢;实时荧光定量PCR结果表明,gga-miR-124a-3p、gga-let-7a-5p在H组中表达量极显著或显著高于L组（P<0.01;P<0.05）;gga-miR-19a-3p在H组中表达量极显著低于L组（P<0.01）,gga-miR-6553-3p和gga-miR-128-3p在H组中的表达量显著低于L组（P<0.05）,其表达趋势与测序结果一致。以上结果表明,差异表达的miRNA gga-miR-124a-3p、gga-let-7a-5p、gga-miR-6553-3p、gga-miR-128-3p和gga-miR-19a-3p参与脂肪生成,是鸡IMF含量调控重要的候选miRNAs,为阐释miRNA调控鸡IMF沉积分子机制提供理论基础。     

鸡传染性支气管炎诊断及综合防治

鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒感染引发的一种急性呼吸道疾病,为防范鸡传染性支气管炎发生流行,需要养殖户掌握该种疾病的具体发病特点,并构建针对性的防控措施,降低发病率,保证养殖安全。该文主要分析鸡传染性支气管炎的诊断和综合防控。     

鸡弱精症相关精浆蛋白组分析

旨在对鸡精浆蛋白组进行分析,筛选与弱精症相关的蛋白。本试验选择同批次孵化的宁都黄鸡公鸡进行精液品质检测,每隔3 d进行1次镜检,共进行3次。选择前向精子比例<20%,且直线前向精子比例<10%的个体作为试验样本,前向精子比例>80%,且直线前向精子比例>40%的个体为对照样本,每组各4只。利用液相色谱-质谱（LC-MS/MS）技术开展鸡精浆蛋白组学的研究,筛选与弱精症相关的差异蛋白。结果显示,宁都黄鸡弱精组的精子活力和密度极显著低于对照组（P<0.01）。两组间共筛选到差异表达蛋白78个,5个差异蛋白在弱精组中表现为上调,其余差异蛋白表现为下调。角蛋白9（KRT9）和硒蛋白P-2（SEPP2）仅在弱精组中检测到表达;4-羟基-2-氧戊二酸醛缩酶（HOGA1）、苯丙氨酸羟化酶（PAH）和卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）仅在对照组中检测到表达。经GO注释和KEGG通路分析,差异蛋白功能集中于新陈代谢、糖酵解、碳代谢和氨基酸合成等生物途径。本研究筛选的宁都黄鸡弱精症和正常公鸡精浆差异表达蛋白可作为今后鸡弱精症筛查和治疗的候选靶点,通过进一步功能分析与验证为阐明弱精症的发病机理提供依据。     

基于表型和基因组信息评价北京油鸡保种群保种情况

旨在利用表型和基因组信息对北京油鸡随机交配保种群体近交系数、有效群体大小进行研究,评价北京油鸡保种群体保种情况。本研究以国家级北京油鸡保种场北京油鸡2019年随机交配保种群体40只鸡为研究对象,对表型记录进行整理,同时利用基因组SNP信息,使用PLINK软件分别计算基于ROH的近交系数（F_ROH）、基于纯合基因型的近交系数（F_HOM）、基于联合配子之间相关性的近交系数（F_UNI）;使用GCTA和R软件计算基于基因组关系G矩阵的近交系数（F_GRM）;使用SNeP软件估计北京油鸡历史世代的有效群体大小;使用NeEstimator软件估计基于连锁不平衡方法的当前世代的有效群体大小;使用R软件的PerformanceAnalytics包对F_ROH、F_HOM、F_GRM和F_UNI等不同算法所得近交系数进行相关性分析,评价北京油鸡的保种情况。结果显示,1979—2019年以来,北京油鸡保种群体凤冠、胫羽、五趾等典型的外貌特征明显且百分比稳定;保种群有效群体大小从98世代前的595逐渐降至13世代前的176;2019年北京油鸡随机交配保种群体F_ROH为0.079 8,与F_GRM显著相关（P<0.01）,且相关系数为0.45;除此之外,F_HOM与F_GRM,F_HOM与F_UNI以及F_GRM与F_UNI之间也存在较高的线性相关。北京油鸡1979—2019年以来近交系数增长缓慢,国家级北京油鸡保种场随机交配保种群体的保种工作是十分有效的。基于目前情况,本研究建议每年随机选取一定数量的北京油鸡随机交配保种群体的个体,进行全基因组二代重测序检测,有利于对保种状况进行动态监控,以便随时调整保种工作方案。     

鸡TRAF6和TIFA蛋白的序列分析与相互作用验证

旨在对鸡肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor（TNF）receptor-associated factor 6,TRAF6）和肿瘤坏死因子受体相关因子相互作用的具有叉形头相关结构域蛋白（TNF receptor associated factor（TRAF）-interacting protein with a forkhead-associated（FHA）domain,TIFA）进行序列分析,并进行蛋白质相互作用验证。本研究首先以鸡胚成纤维细胞提取的总RNA反转录产物为模板扩增鸡TRAF6和TIFA基因的CDS区,分别构建重组真核表达载体pCMV-HA-TRAF6和pEGFP-C1-TIFA;运用生物信息学软件ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、MegAlign和PSORTⅡ分别对鸡TRAF6和TIFA蛋白理化性质、二级和三级结构、氨基酸同源性、功能结构域保守性和亚细胞定位进行分析。将重组真核表达载体共转染细胞,通过荧光共定位和免疫共沉淀（Co-IP）试验验证鸡TRAF6和TIFA蛋白之间的相互作用。结果,成功扩增鸡TRAF6和TIFA基因,并构建其重组真核表达载体pCMV-HA-TRAF6和pEGFP-C1-TIFA。序列分析结果显示,鸡TRAF6和TIFA基因CDS区分别为1 638和564 bp,共编码545和187个氨基酸,分子量约为62和22 ku。蛋白质二级和三级结构分析结果表明,鸡TRAF6和TIFA蛋白均以无规则卷曲和α螺旋为主。氨基酸同源性分析结果发现,鸡与人和其他哺乳动物TRAF6和TIFA蛋白的同源性分别为76.4%~80.3%和49.7%~53.3%,而与非洲爪蟾的同源性分别为69.4%和49.7%,并且鸡TRAF6和TIFA蛋白的功能结构域存在多个氨基酸位点变异。亚细胞定位预测结果表明,鸡TRAF6和TIFA蛋白主要定位在细胞核。荧光共定位和Co-IP试验结果显示,鸡TRAF6和TIFA蛋白在细胞核中具有共定位,并且存在相互作用。本研究结果显示,鸡与人和其他哺乳动物以及非洲爪蟾TRAF6和TIFA蛋白的同源性及功能结构域保守性均较低,但鸡TRAF6和TIFA蛋白能在细胞核中发生相互作用,这可为进一步研究鸡TRAF6和TIFA蛋白相互作用调控鸡相关病毒复制的作用机制奠定基础。     

注水鸡肉品质变化研究

为了解注水鸡肉的品质变化情况,以市场购买的30只成年青脚麻鸡母鸡为素材,将其分为两组,一组为对照组,另一组对其两侧胸肌、腿肌和翅膀部位进行注水,设为试验组。对两组鸡肉品质相关指标检测研究结果显示:注水组鸡肉的重量显著增加(P<0.05),外观品质更加饱满、鲜亮、诱人,肉色显著提亮(P<0.05),剪切力、系水力、pH值、蛋白质含量、肌内脂肪含量、氨基酸含量和肌苷酸含量显著降低(P<0.05),蒸煮损失、TVB-N值、亚精胺含量、菌落总数和大肠菌群数显著升高(P<0.05);此外,在正常组中未检测出金黄色葡萄球菌,而在注水组检测到金黄色葡萄球菌。从各项指标的变化规律中可以看出,注水鸡肉无论是在营养品质还是在风味口感上都显著降低,而腐败速度以及安全风险则显著升高。     

猪脾转移因子提高LaSota株鸡新城疫弱毒疫苗的免疫保护率

旨在了解猪脾转移因子（TF）对新城疫病毒（NDV）弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量（10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份） LaSota疫苗株单独（单独免疫组）、LaSota疫苗株与TF联合（联合免疫组）免疫SPF鸡,14 d后以NDV F₄₈E₉强毒攻毒,同时设立对照组（非免疫攻毒）和空白组（非免疫非攻毒）,并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量（PD₅₀）如下：单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.000 8羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.000 5羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^-3羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著（P<0.01）;攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著（P<0.01）。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD₅₀;在抵抗NDV F₄₈E₉强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。     

武定鸡和狄高鸡杂交F1代体尺性状与屠体性能分析

为促进武定鸡的选育,选取武定鸡和狄高鸡进行杂交,分析其杂交F1代的体尺性状与屠体性能,并进行相关性分析和多元回归分析。结果:F1代公鸡体尺性状表型值均高于母鸡,且体斜长、胸宽、龙骨长、髋骨宽、胫长、胫围差异极显著(P<0.01);F1代公鸡除了胸肌率极显著低于母鸡外(P<0.01),其余屠体性能均极显著高于母鸡(P<0.01)。F1代公、母鸡的体斜长、胸宽、胸深、龙骨长、髋骨宽、胫围均高于武定鸡;F1代公鸡屠体性能均高于武定鸡公鸡,其中半净膛率差异显著(P<0.05),活重、屠体重、屠宰率、全净膛率、胸肌率、腿肌率差异极显著(P<0.01);F1代母鸡的活重、屠体重极显著高于武定鸡母鸡(P<0.01),胸肌率、腿肌率显著高于武定鸡母鸡(P<0.05)。F1代屠宰性能间有21个极显著正相关(P<0.01),体尺性状间有14个极显著正相关(P<0.01),体尺性状与屠宰性能间有45个极显著正相关(P<0.01)。同时根据F1代体尺性状建立了预测活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重、腿肌重、翅重的回归方程。     

四君子汤和补中益气汤对雏鸡免疫新城疫疫苗的影响

阐明四君子汤和补中益气汤对雏鸡免疫新城疫疫苗的影响。试验选取体质量30~35 g的1日龄海兰白雏鸡150只,饲喂全价饲料,7 d后,将其平均随机分为对照组、四君子汤组和补中益气汤组。对各组雏鸡滴鼻、点眼免疫新城疫活疫苗,免疫2 d后,对照组雏鸡每天给予纯化水,四君子汤组雏鸡每天给予四君子汤,补中益气汤组雏鸡每天给予补中益气汤,按照0.4 mL/kg的剂量连续灌服给药3 d。分别于免疫后第0天、第7天、第14天、第21天和第28天,从各试验组中随机采集10只试验鸡的血液,分离血清,用血凝抑制法测定新城疫抗体效价;翼静脉无菌采血,观察淋巴细胞转化情况,计算淋巴细胞转化率;利用碳廓清法,计算巨噬细胞吞噬率;采用全自动血球分析仪检测外周血白细胞的数量。试验结果显示,四君子汤组和补中益气汤组雏鸡的新城疫病毒抗体效价、外周血淋巴细胞转化率、巨噬细胞吞噬率均较对照组显著升高(P<0.05),白细胞总数无明显变化(P>0.05)。试验表明四君子汤和补中益气汤对雏鸡免疫新城疫疫苗均具有免疫增效作用。