干冰用于鸡超低温冷冻精液短期保存和运输的可靠性评估

为解决液氮保存下鸡冷冻精液的异地运输难题,研究对北京油鸡冷冻精液在干冰（-79℃）中进行短期保存,分别保存0 h（对照组）、12 h、24 h、48 h和72 h,以模拟冷冻精液在干冰中的短期运输,并测定干冰不同保存时间的鸡冷冻精液精子质量和受精能力。结果显示：干冰保存后北京油鸡冷冻精液的精子活力、存活率、顶体完整率、质膜完整率和受精率均显著降低（P<0.05）,精子畸形率显著增高（P<0.05）,且随着干冰保存时间的增加,精子质量和受精能力逐渐下降。研究表明,干冰作为冷源对鸡冷冻精液的精子质量有较大的损害作用,使用干冰难以实现对鸡冷冻精液的有效短期保存和运输。     

鸡lncRNA-MSTRG.15568.9及其预测靶基因的表达

试验旨在了解在鸡睾丸中高表达的1个长链非编码RNA （long non-coding RNA,lncRNA）及其预测靶基因的时空表达规律,研究二者在鸡弱精子症中的调控作用。根据弱精子症和正常北京油鸡公鸡睾丸转录组测序筛选到的1个高表达的lncRNA （MSTRG.15568.9）,采用顺式（cis）作用模式预测其潜在靶基因SPAG4（sperm-associated antigen 4）,进一步采用实时荧光定量PCR方法进行表达量分析。分别选择3只0、5、20、30、45、60周龄正常北京油鸡公鸡,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同周龄公鸡睾丸中的表达量差异;选择30周龄3只正常公鸡,采集睾丸、肝脏和脾脏等8个部位组织样品,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同组织间的表达规律;选择45周龄弱精子症公鸡和正常公鸡各3只,对比MSTRG.15568.9与SPAG4基因在睾丸的表达量差异。结果显示,MSTRG.15568.9与SPAG4存在明显的时空表达差异,且二者表达趋势基本一致。在不同周龄的鸡睾丸组织中,MSTRG.15568.9和SPAG4的表达趋势相近,MSTRG.15568.9在20周龄的表达量显著高于0、5、30、45、60周龄（P<0.05）,0和5周龄表达量显著低于20、30、45和60周龄（P<0.05）;SPAG4在45周龄表达量最高,其次是20周龄（P<0.05）。MSTRG.15568.9和SPAG4在睾丸和肝脏中的表达量均显著高于脾脏、肾脏等组织（P<0.05）;在正常睾丸组织中的表达量均显著高于弱精子症睾丸组织（P<0.05）。综上所述,MSTRG.15568.9与SPAG4基因具有较明显的组织表达特异性,且MSTRG.15568.9可能调控SPAG4基因的表达,参与精子发生与精子活力调控;但其具体作用机制需要进一步探索。本研究可为鉴定与鸡弱精子症调节机制相关的功能基因提供参考。     

鸡胚胎期及生长发育早期对孵化绿光强度的反应

试验旨在探究孵化期单色绿光不同光照强度对鸡孵化和早期生长发育的影响。选用810个大小均匀的新浦东鸡种蛋,随机分为3组（n=270）,孵化期1~18.5 d分别在黑暗、低照度（20~50 lux）和高照度（200~300 lux）的LED单色绿光（λ=525 nm）条件下孵化,每天光照24 h,各组种蛋于第18.5天转至同一台无光出雏器中,各组温度和湿度等其他孵化条件始终保持一致。检测各组受精蛋孵化率、死胚率、初生重、10周龄体重、初生雏鸡及3周龄公鸡的血清激素浓度（甲状腺素、降钙素、生长激素、褪黑激素和骨钙素等）和血液生理生化指标（碱性磷酸酶、胰岛素样生长因子和钙等含量）。结果表明：各组种蛋的死胚数和死胚率差异较小;孵化的20.5 d低照度组和高照度组的受精蛋孵化率分别为黑暗组的2.3倍和5.2倍;孵化的21.5 d黑暗组的受精蛋孵化率为82.8%,低照度组和高照度组的孵化率分别比黑暗组高6.5%和1.9%;黑暗组的健雏率为98.6%,低照度组的健雏率比黑暗组低0.4%,而高照度组与黑暗组的健雏率接近;高照度组公雏初生重显著低于黑暗组（P<0.05）,而低照度组与黑暗组无显著差异（P>0.05）。母雏初生重趋势与公雏基本一致,高照度组母雏初生重显著低于其他两组（P<0.05）,其他两组之间无显著差异（P>0.05）;在10周龄,各组公鸡和母鸡体重无显著差异（P<0.05）;各组1日龄公雏血液生理生化和激素指标无显著差异（P>0.05）,3周龄公鸡高照度组和低照度组褪黑激素含量显著高于黑暗组（P<0.05）,其他指标无显著差异（P>0.05）。综上,在种蛋的孵化过程中,与黑暗条件下相比,给予适宜强度的单色绿光能够促进鸡胚发育,在不影响雏鸡健康的前提下使出雏时间提前,孵化期光照对后期生长发育影响较小。     

鸽毛滴虫外泌体的分离鉴定及蛋白质谱分析

旨在研究鸽毛滴虫是否分泌外泌体及虫源外泌体的蛋白组成和功能,为探索外泌体在鸽毛滴虫寄生过程中的作用奠定基础。采集鸽毛滴虫感染个体口腔及咽部病灶处样本,进行分离培养及纯化,使用显微镜鉴定虫体形态,提取DNA并比对其序列,确定培养物是否为鸽毛滴虫虫株;通过对培养液上清进行超速离心,透射电子显微镜、Western blot技术和纳米颗粒追踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）鉴定培养液上清中是否含有虫源外泌体;最后通过Label-free技术分析虫源外泌体的蛋白质谱表达。结果显示,虫体具有明显的毛滴虫形态及特征,与鸽毛滴虫ITS1/5.8S/ITS2基因比对率达98%。从虫体培养液中提取的囊泡经透射电子显微镜观察具有明显的茶托样结构;NTA结果显示,粒径集中于125.1 nm,峰值粒径为132.3 nm,占比99.3%;CD63和TSG101等外泌体标记蛋白的条带明显,表明提取物为外泌体。质谱结果显示,烯醇酶、3-磷酸甘油醛-脱氢酶、磷酸甘油酸变位酶和延伸因子为表达量较高的蛋白质。GO功能注释显示外泌体蛋白富集到细胞内和胞浆等细胞组分,发挥GTP连接和GTP酶活性功能,参与小GTPase介导的信号转导与糖酵解等过程。KEGG通路富集表明,虫源外泌体蛋白主要富集于代谢途径、糖酵解/糖异生、抗生素的生物合成和次级代谢产物的生物合成等通路。本研究发现鸽毛滴虫可以分泌外泌体,并对虫源外泌体进行蛋白质谱分析,提示虫源外泌体中的蛋白质在寄生虫的能量代谢、信号转导及生物合成等过程中发挥重要作用。     

屎肠球菌和枯草芽孢杆菌对乳鸽生长性能、屠宰性能和免疫功能的影响

旨在研究单独添加屎肠球菌和枯草芽孢杆菌及二者混合添加对乳鸽生长性能、屠宰性能、免疫功能的影响,从而探究益生菌对乳鸽生长的调控机制。试验选取240只12日龄、体重接近的健康白羽王鸽,随机分成4组,分别为对照组、屎肠球菌组、枯草芽孢杆菌组、混合组,每组6个重复,每个重复10只乳鸽,试验期16 d。试验期结束时,每个重复随机选取2只乳鸽（共48只乳鸽）称重,测定其血清免疫指标、肌肉品质、肝组织抗氧化指标和生长相关基因表达量等。试验结果表明：1）与对照组相比,屎肠球菌组显著提高了乳鸽的平均日增重（P<0.05）,且显著高于其余各组（P<0.05）,而枯草芽孢杆菌组显著降低了乳鸽的平均日增重（P<0.05）;2）与对照组相比,3个处理组对乳鸽的屠宰率、半净膛率、全净膛率、腿肌率、胸肌率、腹脂率均无显著影响（P>0.05）,屎肠球菌组和混合组显著提高了乳鸽胸肌亮度（P<0.05）,混合组还显著提高了乳鸽胸肌红度（P<0.05）;3）与对照组相比,屎肠球菌组和混合组能显著提高乳鸽血清中IgG含量（P<0.05）,混合组能显著提高乳鸽胸腺指数和法氏囊指数（P<0.05）,除屎肠球菌组GLB显著高于对照组（P<0.05）外,3个处理组对乳鸽的其余血清生化指标均无显著影响（P>0.05）;4）与对照组相比,屎肠球菌组超氧化物歧化酶（SOD）活性显著提高（P<0.05）,混合组谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性显著提高（P<0.05）;5）3个处理组肝组织的GH、IGF-1基因mRNA表达水平均显著高于对照组（P<0.05）,枯草芽孢杆菌组GHR基因mRNA表达水平显著高于对照组（P<0.05）。综上所述,屎肠球菌可显著提高乳鸽平均日增重,而枯草芽孢杆菌显著降低了乳鸽的平均日增重;屎肠球菌能改善乳鸽肌肉品质,提高乳鸽抗氧化性能和免疫功能,从而促进乳鸽生长。     

北京油鸡快慢羽公鸡鉴定及羽毛发育、生长和繁殖性能的对比分析

试验通过开展快慢羽群体的鉴定,并对比其在羽毛发育、生长和繁殖性能方面的差异,旨在为北京油鸡种鸡选育和科学养殖提供数据支持。选用北京油鸡纯系公鸡,出雏时,按照主翼羽与覆主翼羽的羽长差值将其分为快慢羽亚群,其中快羽包括K1（主翼羽长于覆主翼羽>5 mm）和K2（主翼羽长于覆主翼羽2~5 mm）,慢羽包括M1（主翼羽与覆主翼羽等长或主翼羽长于覆主翼羽<2 mm）和M2（主翼羽短于覆主翼羽）和M3（主翼羽未长出）。1~7日龄每隔1 d测量1次主翼羽与覆主翼羽羽长,7~42日龄每隔1周测量1次;1~8周龄每周测量体重,9~18周龄每隔1周测定体重;10周龄时,观测公鸡全身羽毛发育情况;47周龄时,测定公鸡常规精液品质性状、精子动力学参数、受精率及孵化率。结果显示,快羽公鸡占北京油鸡公鸡总数的11.60%,慢羽占88.40%,慢羽又以M2型为主,有少量M1型和M3型。育雏育成期（1~18周）北京油鸡快慢羽公鸡各周龄体重均无显著差异（P>0.05）。在育雏育成期,慢羽公鸡主翼羽和覆主翼羽生长均慢于快羽公鸡。其10周龄时,背部和腿部羽毛生长完全的鸡的比例仅为44%,且不同类型的慢羽公鸡的比例也不一,其中等长型或微长型慢羽最高,超过90%,未长出型慢羽最低,仅为17%左右。47周龄时快羽鸡和慢羽鸡的常规精液品质无差异,但是快羽公鸡精子直线性显著高于慢羽鸡（P<0.05）,直线速率高于慢羽公鸡（P=0.06）,快羽北京油鸡公鸡受精率显著高于慢羽公鸡（P<0.05）,且入孵蛋孵化率和受精蛋孵化率有高于慢羽公鸡的趋势,但差异不显著（P>0.05）。本研究结果表明,快慢羽北京油鸡公鸡的羽毛生长和繁殖性能有一定差异,需要加强慢羽公鸡羽毛发育缓慢原因和鉴定方法的研究,也需加强慢羽公鸡精液品质选育。     

鸡弱精症相关精浆蛋白组分析

旨在对鸡精浆蛋白组进行分析,筛选与弱精症相关的蛋白。本试验选择同批次孵化的宁都黄鸡公鸡进行精液品质检测,每隔3 d进行1次镜检,共进行3次。选择前向精子比例<20%,且直线前向精子比例<10%的个体作为试验样本,前向精子比例>80%,且直线前向精子比例>40%的个体为对照样本,每组各4只。利用液相色谱-质谱（LC-MS/MS）技术开展鸡精浆蛋白组学的研究,筛选与弱精症相关的差异蛋白。结果显示,宁都黄鸡弱精组的精子活力和密度极显著低于对照组（P<0.01）。两组间共筛选到差异表达蛋白78个,5个差异蛋白在弱精组中表现为上调,其余差异蛋白表现为下调。角蛋白9（KRT9）和硒蛋白P-2（SEPP2）仅在弱精组中检测到表达;4-羟基-2-氧戊二酸醛缩酶（HOGA1）、苯丙氨酸羟化酶（PAH）和卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）仅在对照组中检测到表达。经GO注释和KEGG通路分析,差异蛋白功能集中于新陈代谢、糖酵解、碳代谢和氨基酸合成等生物途径。本研究筛选的宁都黄鸡弱精症和正常公鸡精浆差异表达蛋白可作为今后鸡弱精症筛查和治疗的候选靶点,通过进一步功能分析与验证为阐明弱精症的发病机理提供依据。     

南阳牛肌肉发育过程中IGF基因家族的表达变化研究

 IGF基因家族对肌肉发育起重要的调控作用,而目前对牛肌肉发育过程中IGF基因家族的表达变化研究还不充分。本研究利用荧光实时定量PCR技术分析了南阳牛3月龄到24月龄期间背最长肌组织中IGF,IGF受体和IGF结合蛋白基因的表达变化规律,发现IGF1,IGF2,IGF1R,IGF2R,IGFBP1和IGFBP3的表达量均呈现出明显的下降趋势,其中18月龄和24月龄时的表达量与3月龄时相比显著低（P<0.05）;IGFALS也呈现出下降的趋势,但表达量在各个时期没有显著的差异（P>005）;IGFBP2,IGFBP4和IGFBP6在6月龄时表达量上升,在12月龄和18月龄时表达量降低,在24月龄时表达量再次上升,但各个时期表达量均无显著差异（P>005）;IGFBP5表现出先升高而后降低的趋势,6月龄比24月龄时表达量显著高（P<005）,其他各月龄之间差异不显著。本研究对IGF基因家族在南阳牛肌肉发育过程中的表达变化进行了系统的研究,为进一步深入分析IGF系统在牛肌肉发育过程中的作用提供了有力的理论基础。     

母鸡持续受精能力的群体变异分析

旨在探究母鸡持续受精能力在品种间的差异和群体内的变异程度及相关性状之间的相关性,为制定合理的输精间隔和开展母鸡持续受精能力的选育提供理论依据。本研究以27周龄的白来航、哥伦比亚洛克、芦花和洛岛红4个品种健康的母鸡各158只为试验材料,连续输精2 d,第3天开始按照母鸡个体收集种蛋孵化,统计输精后4周内的种蛋受精情况,比较各品种输精后产蛋数、日/周受精率、4周平均受精率、最长受精天数和最大连产受精蛋数等性状,并计算部分性状间的相关系数。结果显示,4个品种输精后日受精率随着天数的增加而降低,但程度不同,白来航、哥伦比亚洛克、芦花和洛岛红日受精率大于90%的输精后最大天数分别为10、9、8和11 d。4个品种输精后前9 d种蛋的日受精率除了第4天(P=0.01)外均无显著差异(P0.05),第10～18天种蛋的日受精率除了第13(P=0.08)和16天(P=0.19)外均差异显著(P0.05),第19～28天无显著差异(P0.05);输精后品种间第1(P0.05)和4周(P0.05)的周受精率均无显著差异,第2(P=0.005)和3周(P=0.04)均差异显著;不同品种母鸡的产蛋数、4周受精蛋数、4周平均受精率、最长受精天数、最大连产受精蛋数、第1周受精蛋数、第2周受精蛋数、第3周受精蛋数和第2～3周受精蛋数均存在显著差异(P0.05),其中洛岛红的各个指标均最高;品种内个体间上述性状也存在变异,其中洛岛红变异较小,哥伦比亚洛克和芦花变异较大;母鸡受精能力相关性状间均为正相关,其中第2周受精蛋数(r=0.86,P0.000 1)、第2～3周受精蛋数(r=0.92,P0.000 1)与4周受精蛋数相关系数较大。本研究结果表明,不同品种母鸡持续受精能力存在差异,可制定品种特异性输精间隔;品种内母鸡持续受精能力存在较大变异,具有进一步选育的基础;第2周受精蛋数可以在保证准确性的前提下减少性状测定的工作量,相较而言是评估和选育母鸡持续受精能力的理想性状。     

SOX5蛋白对公鸡精子发生和精子活力的作用及其定位

本研究旨在探明SOX5蛋白在家禽睾丸发育中的表达规律,分析其在睾丸发育和精子活力调控中的潜在作用。采用RT-qPCR和Western blot技术检测0、5、15、40和60周龄北京油鸡公鸡睾丸中SOX5mRNA和蛋白的表达,并比较其在40周龄正常公鸡与弱精子症公鸡睾丸中的表达差异,通过免疫组化技术对SOX5蛋白在睾丸组织中的表达进行定位。结果表明,SOX5 mRNA和蛋白在不同周龄公鸡的睾丸中均有表达,且差异显著(P0.05)。SOX5mRNA和蛋白表达量趋势一致;随着周龄的增加,其表达呈现先上升后降低的趋势:0和5周龄SOX5蛋白主要在精原细胞和支持细胞中表达;15周龄SOX5蛋白在支持细胞、各级精母细胞、圆形精子细胞和成熟精子中均高表达;40周龄表达量有所降低。SOX5基因和蛋白的表达趋势与公鸡性成熟和繁殖机能衰退的趋势一致,即性成熟前后和繁殖高峰期表达量较高,在性发育前和生精机能减退时表达量较低。此外,40周龄弱精子症公鸡睾丸中,SOX5的表达显著低于正常公鸡(P0.05)。综上表明,SOX5的表达量与公鸡睾丸发育水平和精子活力存在一定的相关,可能对其具有重要调控作用。