鸡lncRNA-MSTRG.15568.9及其预测靶基因的表达

试验旨在了解在鸡睾丸中高表达的1个长链非编码RNA （long non-coding RNA,lncRNA）及其预测靶基因的时空表达规律,研究二者在鸡弱精子症中的调控作用。根据弱精子症和正常北京油鸡公鸡睾丸转录组测序筛选到的1个高表达的lncRNA （MSTRG.15568.9）,采用顺式（cis）作用模式预测其潜在靶基因SPAG4（sperm-associated antigen 4）,进一步采用实时荧光定量PCR方法进行表达量分析。分别选择3只0、5、20、30、45、60周龄正常北京油鸡公鸡,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同周龄公鸡睾丸中的表达量差异;选择30周龄3只正常公鸡,采集睾丸、肝脏和脾脏等8个部位组织样品,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同组织间的表达规律;选择45周龄弱精子症公鸡和正常公鸡各3只,对比MSTRG.15568.9与SPAG4基因在睾丸的表达量差异。结果显示,MSTRG.15568.9与SPAG4存在明显的时空表达差异,且二者表达趋势基本一致。在不同周龄的鸡睾丸组织中,MSTRG.15568.9和SPAG4的表达趋势相近,MSTRG.15568.9在20周龄的表达量显著高于0、5、30、45、60周龄（P<0.05）,0和5周龄表达量显著低于20、30、45和60周龄（P<0.05）;SPAG4在45周龄表达量最高,其次是20周龄（P<0.05）。MSTRG.15568.9和SPAG4在睾丸和肝脏中的表达量均显著高于脾脏、肾脏等组织（P<0.05）;在正常睾丸组织中的表达量均显著高于弱精子症睾丸组织（P<0.05）。综上所述,MSTRG.15568.9与SPAG4基因具有较明显的组织表达特异性,且MSTRG.15568.9可能调控SPAG4基因的表达,参与精子发生与精子活力调控;但其具体作用机制需要进一步探索。本研究可为鉴定与鸡弱精子症调节机制相关的功能基因提供参考。     

鸡胚胎期及生长发育早期对孵化绿光强度的反应

试验旨在探究孵化期单色绿光不同光照强度对鸡孵化和早期生长发育的影响。选用810个大小均匀的新浦东鸡种蛋,随机分为3组（n=270）,孵化期1~18.5 d分别在黑暗、低照度（20~50 lux）和高照度（200~300 lux）的LED单色绿光（λ=525 nm）条件下孵化,每天光照24 h,各组种蛋于第18.5天转至同一台无光出雏器中,各组温度和湿度等其他孵化条件始终保持一致。检测各组受精蛋孵化率、死胚率、初生重、10周龄体重、初生雏鸡及3周龄公鸡的血清激素浓度（甲状腺素、降钙素、生长激素、褪黑激素和骨钙素等）和血液生理生化指标（碱性磷酸酶、胰岛素样生长因子和钙等含量）。结果表明：各组种蛋的死胚数和死胚率差异较小;孵化的20.5 d低照度组和高照度组的受精蛋孵化率分别为黑暗组的2.3倍和5.2倍;孵化的21.5 d黑暗组的受精蛋孵化率为82.8%,低照度组和高照度组的孵化率分别比黑暗组高6.5%和1.9%;黑暗组的健雏率为98.6%,低照度组的健雏率比黑暗组低0.4%,而高照度组与黑暗组的健雏率接近;高照度组公雏初生重显著低于黑暗组（P<0.05）,而低照度组与黑暗组无显著差异（P>0.05）。母雏初生重趋势与公雏基本一致,高照度组母雏初生重显著低于其他两组（P<0.05）,其他两组之间无显著差异（P>0.05）;在10周龄,各组公鸡和母鸡体重无显著差异（P<0.05）;各组1日龄公雏血液生理生化和激素指标无显著差异（P>0.05）,3周龄公鸡高照度组和低照度组褪黑激素含量显著高于黑暗组（P<0.05）,其他指标无显著差异（P>0.05）。综上,在种蛋的孵化过程中,与黑暗条件下相比,给予适宜强度的单色绿光能够促进鸡胚发育,在不影响雏鸡健康的前提下使出雏时间提前,孵化期光照对后期生长发育影响较小。     

鸽毛滴虫外泌体的分离鉴定及蛋白质谱分析

旨在研究鸽毛滴虫是否分泌外泌体及虫源外泌体的蛋白组成和功能,为探索外泌体在鸽毛滴虫寄生过程中的作用奠定基础。采集鸽毛滴虫感染个体口腔及咽部病灶处样本,进行分离培养及纯化,使用显微镜鉴定虫体形态,提取DNA并比对其序列,确定培养物是否为鸽毛滴虫虫株;通过对培养液上清进行超速离心,透射电子显微镜、Western blot技术和纳米颗粒追踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）鉴定培养液上清中是否含有虫源外泌体;最后通过Label-free技术分析虫源外泌体的蛋白质谱表达。结果显示,虫体具有明显的毛滴虫形态及特征,与鸽毛滴虫ITS1/5.8S/ITS2基因比对率达98%。从虫体培养液中提取的囊泡经透射电子显微镜观察具有明显的茶托样结构;NTA结果显示,粒径集中于125.1 nm,峰值粒径为132.3 nm,占比99.3%;CD63和TSG101等外泌体标记蛋白的条带明显,表明提取物为外泌体。质谱结果显示,烯醇酶、3-磷酸甘油醛-脱氢酶、磷酸甘油酸变位酶和延伸因子为表达量较高的蛋白质。GO功能注释显示外泌体蛋白富集到细胞内和胞浆等细胞组分,发挥GTP连接和GTP酶活性功能,参与小GTPase介导的信号转导与糖酵解等过程。KEGG通路富集表明,虫源外泌体蛋白主要富集于代谢途径、糖酵解/糖异生、抗生素的生物合成和次级代谢产物的生物合成等通路。本研究发现鸽毛滴虫可以分泌外泌体,并对虫源外泌体进行蛋白质谱分析,提示虫源外泌体中的蛋白质在寄生虫的能量代谢、信号转导及生物合成等过程中发挥重要作用。     

母鸡持续受精能力的群体变异分析

旨在探究母鸡持续受精能力在品种间的差异和群体内的变异程度及相关性状之间的相关性,为制定合理的输精间隔和开展母鸡持续受精能力的选育提供理论依据。本研究以27周龄的白来航、哥伦比亚洛克、芦花和洛岛红4个品种健康的母鸡各158只为试验材料,连续输精2 d,第3天开始按照母鸡个体收集种蛋孵化,统计输精后4周内的种蛋受精情况,比较各品种输精后产蛋数、日/周受精率、4周平均受精率、最长受精天数和最大连产受精蛋数等性状,并计算部分性状间的相关系数。结果显示,4个品种输精后日受精率随着天数的增加而降低,但程度不同,白来航、哥伦比亚洛克、芦花和洛岛红日受精率大于90%的输精后最大天数分别为10、9、8和11 d。4个品种输精后前9 d种蛋的日受精率除了第4天(P=0.01)外均无显著差异(P0.05),第10～18天种蛋的日受精率除了第13(P=0.08)和16天(P=0.19)外均差异显著(P0.05),第19～28天无显著差异(P0.05);输精后品种间第1(P0.05)和4周(P0.05)的周受精率均无显著差异,第2(P=0.005)和3周(P=0.04)均差异显著;不同品种母鸡的产蛋数、4周受精蛋数、4周平均受精率、最长受精天数、最大连产受精蛋数、第1周受精蛋数、第2周受精蛋数、第3周受精蛋数和第2～3周受精蛋数均存在显著差异(P0.05),其中洛岛红的各个指标均最高;品种内个体间上述性状也存在变异,其中洛岛红变异较小,哥伦比亚洛克和芦花变异较大;母鸡受精能力相关性状间均为正相关,其中第2周受精蛋数(r=0.86,P0.000 1)、第2～3周受精蛋数(r=0.92,P0.000 1)与4周受精蛋数相关系数较大。本研究结果表明,不同品种母鸡持续受精能力存在差异,可制定品种特异性输精间隔;品种内母鸡持续受精能力存在较大变异,具有进一步选育的基础;第2周受精蛋数可以在保证准确性的前提下减少性状测定的工作量,相较而言是评估和选育母鸡持续受精能力的理想性状。     

北京油鸡快慢羽公鸡鉴定及羽毛发育、生长和繁殖性能的对比分析

试验通过开展快慢羽群体的鉴定,并对比其在羽毛发育、生长和繁殖性能方面的差异,旨在为北京油鸡种鸡选育和科学养殖提供数据支持。选用北京油鸡纯系公鸡,出雏时,按照主翼羽与覆主翼羽的羽长差值将其分为快慢羽亚群,其中快羽包括K1（主翼羽长于覆主翼羽>5 mm）和K2（主翼羽长于覆主翼羽2~5 mm）,慢羽包括M1（主翼羽与覆主翼羽等长或主翼羽长于覆主翼羽<2 mm）和M2（主翼羽短于覆主翼羽）和M3（主翼羽未长出）。1~7日龄每隔1 d测量1次主翼羽与覆主翼羽羽长,7~42日龄每隔1周测量1次;1~8周龄每周测量体重,9~18周龄每隔1周测定体重;10周龄时,观测公鸡全身羽毛发育情况;47周龄时,测定公鸡常规精液品质性状、精子动力学参数、受精率及孵化率。结果显示,快羽公鸡占北京油鸡公鸡总数的11.60%,慢羽占88.40%,慢羽又以M2型为主,有少量M1型和M3型。育雏育成期（1~18周）北京油鸡快慢羽公鸡各周龄体重均无显著差异（P>0.05）。在育雏育成期,慢羽公鸡主翼羽和覆主翼羽生长均慢于快羽公鸡。其10周龄时,背部和腿部羽毛生长完全的鸡的比例仅为44%,且不同类型的慢羽公鸡的比例也不一,其中等长型或微长型慢羽最高,超过90%,未长出型慢羽最低,仅为17%左右。47周龄时快羽鸡和慢羽鸡的常规精液品质无差异,但是快羽公鸡精子直线性显著高于慢羽鸡（P<0.05）,直线速率高于慢羽公鸡（P=0.06）,快羽北京油鸡公鸡受精率显著高于慢羽公鸡（P<0.05）,且入孵蛋孵化率和受精蛋孵化率有高于慢羽公鸡的趋势,但差异不显著（P>0.05）。本研究结果表明,快慢羽北京油鸡公鸡的羽毛生长和繁殖性能有一定差异,需要加强慢羽公鸡羽毛发育缓慢原因和鉴定方法的研究,也需加强慢羽公鸡精液品质选育。     

白术、酸枣仁提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果研究

试验旨在研究菊科植物白术干燥根茎切片提取物(白术提取物)、鼠李科植物酸枣的种子提取物(酸枣仁提取物)单独和联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。通过微量肉汤法测定抑菌浓度和抑制率;用酶标仪测定相应OD值以检测核酸和蛋白质含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力及碱性磷酸酶(AKP)活力,以确定对细菌细胞膜和细胞壁的影响,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDSPAGE)凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白含量变化;用结晶紫染色法检测对细菌生物膜的抑制作用。结果表明：0.4 mg/mL白术、酸枣仁提取物单独及0.1 mg/mL二者联合作用对金黄色葡萄球菌均具有显著抑菌效果;与对照组相比,白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均使菌液上清液OD₂₆₀、OD₂₈₀数值和AKP活力显著增加,菌体LDH活力和总蛋白含量降低,抑制了生物膜的形成。说明白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均可显著抑制金黄色葡萄球菌,且联合作用抑菌效果显著强于各药物单独作用。     

京星黄鸡103与北京油鸡屠体性能及肉品质比较

京星黄鸡103肉鸡配套系是目前唯一含有北京油鸡血缘的黄羽肉鸡培育品种（配套系）。本研究选取京星黄鸡103肉鸡商品代和纯种北京油鸡各120只（公母各半）,比较培育品种和纯种在屠体性能、肉品质和肌肉主要营养成分上的差异。试验鸡同批次孵化出雏,饲养管理条件和饲料营养水平均一致。分别于90和120日龄选取接近各组平均体重的鸡各20只屠宰,检测相关指标。结果表明,京星黄鸡103的生长速度显著快于北京油鸡纯种（P<0.05）,其中90日龄平均体重达1.48 kg,120日龄达1.88 kg,分别比纯种的高24.4%和24.5%;90日龄胸肌重和腿肌重比北京油鸡纯种分别提高24.5%和19.2%,120日龄的分别提高了30.7%和28.9%,但两品种间无显著差异（P>0.05）;90日龄京星黄鸡103胸肌肌内脂肪和粗蛋白质含量显著高于北京油鸡（P<0.05）;胸肌脂肪酸中以硬脂酸和棕榈酸等饱和脂肪酸和花生四烯酸、亚油酸和油酸等不饱和脂肪酸为主,品种之间无显著差异（P>0.05）。综上,京星黄鸡103商品代肉鸡与北京油鸡纯种相比生长速度较快,90日龄达中速型黄羽肉鸡标准,胴体载肉量提升,且基本保持了北京油鸡纯种的肌内脂肪含量高等优良肉品质特性。     

鸡lncRNA-MSTRG.15568.9及其预测靶基因的表达

试验旨在了解在鸡睾丸中高表达的1个长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)及其预测靶基因的时空表达规律,研究二者在鸡弱精子症中的调控作用。根据弱精子症和正常北京油鸡公鸡睾丸转录组测序筛选到的1个高表达的lncRNA(MSTRG.15568.9),采用顺式(cis)作用模式预测其潜在靶基因SPAG4(sperm-associated antigen 4),进一步采用实时荧光定量PCR方法进行表达量分析。分别选择3只0、5、20、30、45、60周龄正常北京油鸡公鸡,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同周龄公鸡睾丸中的表达量差异;选择30周龄3只正常公鸡,采集睾丸、肝脏和脾脏等8个部位组织样品,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同组织间的表达规律;选择45周龄弱精子症公鸡和正常公鸡各3只,对比MSTRG.15568.9与SPAG4基因在睾丸的表达量差异。结果显示,MSTRG.15568.9与SPAG4存在明显的时空表达差异,且二者表达趋势基本一致。在不同周龄的鸡睾丸组织中,MSTRG.15568.9和SPAG4的表达趋势相近,MSTRG.15568.9在20周龄的表达量显著高于0、5、30、45、60周龄(P0.05),0和5周龄表达量显著低于20、30、45和60周龄(P0.05);SPAG4在45周龄表达量最高,其次是20周龄(P0.05)。MSTRG.15568.9和SPAG4在睾丸和肝脏中的表达量均显著高于脾脏、肾脏等组织(P0.05);在正常睾丸组织中的表达量均显著高于弱精子症睾丸组织(P0.05)。综上所述,MSTRG.15568.9与SPAG4基因具有较明显的组织表达特异性,且MSTRG.15568.9可能调控SPAG4基因的表达,参与精子发生与精子活力调控;但其具体作用机制需要进一步探索。本研究可为鉴定与鸡弱精子症调节机制相关的功能基因提供参考。     

贮精能力差异母鸡的贮精腺形态、激素水平及激素受体基因表达量的研究

旨在探究不同贮精能力母鸡的贮精腺形态、主要性激素水平以及激素受体基因表达量的差异,以期进一步揭示母鸡贮精能力差异产生的原因。本研究以27周龄158只的白来航母鸡和28只公鸡为试验材料,混精连续输精2 d,第3天开始按照个体收集种蛋孵化,根据输精后21 d内每天的种蛋受精情况统计个体受精率作为母鸡贮精能力;挑选高、低贮精能力极端个体各4只,分别为高、低贮精能力组;采血测定血清孕酮、雌激素、睾酮和催乳素激素浓度;解剖获取富含贮精腺的子宫阴道连接部组织,并沿纵向分为两份,一份制作石蜡切片并HE染色,用于贮精腺形态观察,另一份采用荧光定量PCR检测相应激素受体基因的表达量。结果表明,高、低贮精能力组子宫阴道连接部的黏膜面积、贮精腺数量、贮精腺密度均差异不显著（P>0.05）,但高贮精能力组母鸡的贮精腺平均横截面积显著高于低贮精能力组（P<0.05）;高贮精能力组母鸡的血清孕酮激素浓度显著高于低贮精能力组（P<0.05）,雌激素、睾酮和催乳素激素浓度在组间均差异不显著（P > 0.05）;与低贮精能力组相比,高贮精能力组睾酮受体基因和催乳素受体基因表达上调,雌激素α、β受体基因和孕酮受体基因下调,但未达显著水平（P>0.05）。结果提示,母鸡的贮精能力可能与贮精腺横截面积有关,此外,孕酮激素可能对诱导贮精腺中精子的激活起重要作用,从而影响母鸡持续受精能力。     

北京油鸡快慢羽母鸡鉴定以及羽毛发育、生长和产蛋性能的对比分析

试验旨在为北京油鸡品系选育、配套利用和科学养殖提供基础数据。选用北京油鸡纯系母雏534只,开展快慢羽群体的鉴定,并对比快慢羽母鸡羽毛发育、生长和繁殖性能的差异。北京油鸡保种群出雏时按照主翼羽与覆主翼羽的相对长度表型特征鉴别,将其分为快慢羽亚群,其中快羽包括K1（主翼羽长于覆主翼羽5 mm以上）和K2（主翼羽长于覆主翼羽2~5 mm）,慢羽包括M1（主翼羽与覆主翼羽等长或主翼羽长于覆主翼羽2 mm以内）、M2（主翼羽短于覆主翼羽）和M3（主翼羽未长出）。6周龄时通过PCR方法进行再次鉴定快慢羽。7 d内每隔1 d测量1次主翼羽与覆主翼羽羽长;7~42 d每隔1周测量1次;1~8周每周测定体重,9~18周每隔1周测定体重;产蛋期根据个体产蛋记录统计群体开产日龄、个体产蛋数以及连产相关性状等产蛋性能。结果表明,北京油鸡初生雏鸡快慢羽表型鉴定结果与通过PCR方法鉴定的结果一致,快羽鸡占总数的25%,慢羽鸡占75%,慢羽鸡又以M2为主,有少量M1和M3。21日龄以内快羽鸡的主翼羽羽长显著高于慢羽鸡（P<0.05）;28日龄时,M1和M2型慢羽鸡的主翼羽长度与快羽鸡差异不显著（P>0.05）,但是M3仍显著短于快羽鸡（P<0.05）。与慢羽鸡相比,快羽鸡70日龄后体重显著增加（P<0.05）,且开产日龄显著提前（P<0.05）,但是43周产蛋数较低（P<0.05）;快羽鸡除蛋形指数显著高于慢羽鸡外（P<0.05）,其他蛋品质指标均无显著差异。综上,快慢羽北京油鸡在生长和产蛋性能上有一定差异,在选育方向和生产管理中应有所差异化,包括加强慢羽品系早熟性即开产日龄的选育和调整快羽品系育成期饲料能蛋水平等。