CIAV VP1 C端基因片段克隆及其在大肠杆菌中的表达

将从组织病料中提取到的鸡传染性贫血病毒核酸经PCR扩增得到vp1基因,用DNAStar分析软件分析预测VP1的抗原表位,它们主要位于VP1氨基酸序列的第1～95、134～303、327～435位,分别命名为Ⅰ区、Ⅱ区、Ⅲ区.欲表达C端基因片段,含部分Ⅱ区和完整的Ⅲ区.把vp1基因克隆到表达载体pGEX-6p-1上,用BamHI消化重组表达质粒pGEX-vp1,回收含C端基因的大片段,自连转化大肠杆菌感受态细胞,得到重组质粒pGEX-vp1(C).重组菌经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果VP1 C端基因片段在大肠杆菌中成功表达,表达的融合蛋白以包涵体形式存在,分子量约为49kDa.蛋白纯化后作ELISA检测,可与阳性血清反应.本研究为研制应用重组抗原制备ELISA诊断试剂盒奠定了基础.     

J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立

本研究分离纯化了具有反应活性的J亚群禽白血病JL-2株gp85表达蛋白,并以其为抗原,开展了相关反应条件、特异性、重复性、敏感性、现地应用以及国外试剂盒符合率等方面的研究,初步建立了J亚群禽白血病ELISA诊断方法.     

2018—2019年南京某宠物医院2249例宠物猫疾病调查与统计分析

本文对2018年和2019年于南京市艾贝尔宠物医院龙江店就诊的2249例宠物猫病例进行调查与统计分析,以评估近年来南京地区宠物猫疾病的发生情况,同时补充国内猫疾病发生情况调查的相关资料。统计结果显示:内科疾病641例,占总病例数的28.50%,其中最常见的为消化系统疾病;外科疾病749例,占总病例数的33.30%,其中最常见的为软组织外科手术;产科疾病64例,占总病例数的2.85%,最常见的为难产;传染病322例,占总病例数的14.32%,最常见的为上呼吸道感染;寄生虫病190例,占总病例数的8.45%,最常见的为体外寄生虫感染;皮肤病283例,占总病例数的12.58%,最常见的为真菌性皮肤病。本次调查结果可在一定程度上提示近年来南京地区宠物猫疾病发生情况,并为宠物医生制定防控临床猫病的方案提供参考资料。     

猪脾转移因子提高LaSota株鸡新城疫弱毒疫苗的免疫保护率

旨在了解猪脾转移因子（TF）对新城疫病毒（NDV）弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量（10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份） LaSota疫苗株单独（单独免疫组）、LaSota疫苗株与TF联合（联合免疫组）免疫SPF鸡,14 d后以NDV F₄₈E₉强毒攻毒,同时设立对照组（非免疫攻毒）和空白组（非免疫非攻毒）,并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量（PD₅₀）如下：单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.000 8羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.000 5羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^-3羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著（P<0.01）;攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著（P<0.01）。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD₅₀;在抵抗NDV F₄₈E₉强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。     

2015—2020年国内饲料霉菌毒素污染调查报告统计分析

为了解我国近年来全价饲料及玉米、小麦、豆粕等主要谷物原料的霉菌毒素污染状况,收集“中国知网”以及“奥特奇”“奥迈”等生物科技有限公司2015年1月—2020年6月发布的30份调查报告,对相关数据进行统计分析。结果显示:我国大部分省区市饲料中存在霉菌毒素污染,其中华东地区最为严重,4种霉菌毒素检出率均较高;谷物原料中存在优势霉菌毒素,其中玉米中主要是伏马毒素B1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇,小麦更容易受呕吐毒素污染,而豆粕中霉菌毒素检出率较低;全价饲料中黄曲霉素B1、伏马毒素B1、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇均存在较高检出率和阳性值。结果表明,我国饲料及谷物原料霉菌毒素污染较严重,需要采用发酵、高压等去污技术和严格的法律法规加以管控。本研究为我国畜禽业用粮指导和霉菌毒素污染限量标准制定提供了数据支持。     

J亚群禽白血病JL-2株gp85基因的克隆与表达

本实验在分离鉴定J亚群禽白血病JL-2株的基础上,利用PCR方法扩增出包括gp85基因在内的长度为960bp的DNA片段.将其连到PGEX-6p-1载体上,构建了重组表达质粒PGEX-6P-1/gp85,对质粒进行序列分析并在IPTG的诱导下进行表达.SDS-PAGE分析结果表明,融合蛋白(54 Ku)在BL21中得到有效表达.表达产物占菌体总蛋白的31.8%.Western Blot结果表明,表达产物可与ALV-J阳性血清发生特异性反应.这些结果为进一步研究gp85蛋白的功能及研制ALV-J ELISA诊断试剂盒奠定了基础.     

EFSA更新关于饲料中使用芽孢杆菌的科学建议

<正>欧洲食品安全局(EFSA)于5月5日更新了饲料中芽孢杆菌风险评估方法。芽孢杆菌作为一种益生菌或其他饲料添加剂的来源广泛应用于动物饲料。但是某些种类的芽孢杆菌可以产生毒素,并导致人类的食源性疾病的发生。其产生的症状包括腹泻、恶心、呕吐。关于该菌的评估方法的导则签发于2011年,而新的导则更新了如何鉴别有害毒株的标准。EFSA建议大家通过体外细胞实验的方法评价菌株产生毒素的能力。EFSA的专家将对这些新的科学知识和信息进行评估。有只     

J亚群禽白血病病毒Hrb-1和JL-2株囊膜基因的克隆及遗传分析

采用特异性检测J亚群禽白血病病毒的RT-PCR方法，自哈尔滨市及吉林省患病鸡群中分离鉴定出2株J亚群禽白血病病毒，分别命名为Hrb-1和JL-2。2株病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖，获取其前病毒DNA。采用依据原型毒株HPRS-103 cDNA序列设计并合成的1对引物，进行PCR扩增，得到了JL-2和Hrb-1的囊膜基因。分别构建了重组质粒pMDl8-T-JL2／env和pMDl8-T-iirh-1／env。在对2株病毒囊膜基因进行序列测定的基础上，将囊膜基因中gp85和gp37的核苷酸序列及其推导氨基酸序列与国际上不同的参照毒株以及国内部分分离株进行了比较分析，结果表明，JL-2和Hrb-1分别与美国病毒株adol-hc-1和UD3有着较大的亲缘关系。     

牛奶中玉米赤霉烯酮和氯霉素二合一检测芯片的开发研究

为了开发出能同时检测玉米赤霉烯酮(ZEN)和氯霉素(CAP)的二合一免疫芯片,试验首先制备抗ZEN的单克隆抗体,并结合抗CAP多克隆抗体采用间接竞争ELISA方法进行芯片组装,最终确定定量标准曲线,并进行加标样品的检测。结果表明:共筛选得到3株抗ZEN的单克隆抗体(1C5、2B10、4F3),选择其中的1株杂交瘤细胞1C5制备小鼠腹水,抗体效价为5.12×10~4,半抑制浓度(IC_(50))为6.57 ng/mL。试验建立的免疫芯片对ZEN和CAP的最低检测限分别为2.84 ng/mL、9.49 ng/mL。在牛奶加标回收试验中,ZEN回收率为95.2%～109.8%,CAP回收率为95.1%～100.3%,回收率均较高,且与高效液相色谱(HPLC)法检测结果有良好的相关性,变异系数(CV)小于15.0%。说明该芯片能用于检测实际样品中的ZEN和CAP。     

J-亚群禽白血病JL-2株的分离鉴定

近年来，J-亚群禽自血病的暴发流行在国内时有报道，在本研究中，自吉林某患病鸡群分离出一株病毒，采用特异性引物，经RT-PCR扩增出长度为545bp的J-亚群禽自血病病毒特异性核苷酸片段；将病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖，获取其前病毒DNA，依据原型毒株RPRS-103 cDNA序列设计并合成一对引物，经PCR扩增得到包括gp85、gp37、E-element基因在内的近1．8kb的DNA片段，将其连到pMD18-T载体上，转化大肠杆菌JM109，培养后提取质粒分别用Hind Ⅲ，BamHI进行单酶切和双酶切鉴定，得到了阳性重组质粒pMD18-T-JL2／env，核苷酸序列测定结果表明，该片段为J-亚群禽白血病病毒囊膜基因，其中亚型特异性片段gp85和标准对照毒株HPRS-103的同源率为94％，所编码氨基酸的同源率为87％。