乌鸡卵清白蛋白基因cDNA的克隆及同源性分析

乌骨鸡是原产中国的观赏和药用珍禽 ,在中国的饲养历史悠久。金水乌鸡是湖北省农业科学院以江西泰和鸡为主 ,按照白羽丝毛乌骨鸡的十大特征 ,进行闭锁性继代选育获得的一个特有品种。卵清白蛋白是鸡蛋中蛋白质的主要成分 (占总蛋白的 5 4 % ) [1 ] ,其合成与分泌严格地受激素包括雌激素和孕酮的调节[2 ] 。目前 ,鸡卵清白蛋白的基因结构及功能已较为清楚 ,为 7个外显子的分离基因[3] ,转录后经内含子的切除 ,连接成为成熟的ｍＲＮＡ。由于卵清白蛋白基因只在输卵管细胞中表达 ,因此 ,该基因在输卵管蛋白质合成与分泌中具有主要的调控作用。…     

不同毒株马立克氏病病毒囊膜糖蛋白gI基因的克隆与序列分析

根据马立克氏病病毒（MDV）国际标准株GA的基因序列，设计全盛一对引物，通过PCR技术，分别以弱毒株814和广西分离强毒株G2株基因组为模板，扩增获得预期大小的PCR产物，将PCR产物和pUC18分别经BamH I株和Sma I酶切后，连接、转化TG1，筛选获得了814－gI和G2-gI的基因克隆，将所得克隆进行测序，并将它们与已发表的MDV其他毒株gI的序列进行比较分析，获得了它们的同源性，绘制了系统发生树。     

鸡新城疫病毒洛阳分离株HN基因的克隆和序列分析

应用RT PCR技术从新城疫病毒洛阳分离株中扩增HN的cDNA片段,并将其克隆至pMD18 T载体进行核苷酸序列测定。结果表明:新城疫分离株HN基因片段长度为1716bp,编码571个氨基酸;推测出的氨基酸序列中有5个糖基化位点,12个半胱氨酸残基;与国内外的14株新城疫毒株HN基因相比,核苷酸和氨基酸同源性分别为66.4%~98.5%和87.8%~98.3%;与标准毒株Lasota和Clone30的亲缘关系较远,核苷酸和氨基酸差异性较大,而与天津分离株和云南分离株的亲缘关系较近,基本属于同一基因群。     

猪泛素C端水解酶L1基因的克隆与序列分析

从人泛素C端水解酶L1(UCH_L1)基因出发,在dbEST数据库中同源搜索,找到1条与人UCH_L1基因编码氨基酸同源性较高且在香猪背最长肌中表达的EST(BM194679).通过电子克隆和进一步RT-PCR试验验证,获得猪UCH_L1基因全长cDNA序列,其全长 1 105 bp,开放阅读框(ORF)位于60～728 bp,编码223个氨基酸.同源性分析结果表明,与人、鼠UCH_L1基因cDNA编码区(CDS)同源性分别为91.2%和86.5%,蛋白质序列同源性均为96.6%.对该基因编码蛋白的结构和功能预测显示含有2个典型的疏水性区域,不含有信号肽,存在1个UCH_L1(pfam01088)保守结构域和多个磷酸化位点,属UCH_L1蛋白家族,故将该基因命名为猪泛素C端水解酶L1基因(登录号AY495532).     

1株野鸭源禽流感病毒全基因的分子克隆和测序

从2004年8月采自黑龙江扎龙自然保护区的野鸭咽喉和泄殖腔拭子中监测到并成功分离出1株禽流感病毒。经亚型鉴定确定为H4N6型禽流感病毒。命名为A／maliard／ZhaLong／88（H4N6）。携带该病毒的野鸭外观健康，为隐性带毒。对此株禽流感病毒基因组的8个节段进行全序列扩增并测序，并与GenBank上发表的不同来源的H4亚型禽流感病毒进行核苷酸及氨基酸序列的同源性比较，分析了遗传变异关系及此株病毒的潜在致病力特点。     

不同地域来源的家蚕微孢子虫DNA特异片段序列及同源性分析

利用碱裂解方法抽提到山东株系的家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,N .b)的基因组DNA ,通过PCR技术扩增得到了N .b的一段特异的DNA片段 ,经测序发现 ,该片段大小为 317bp。将其与日本株N .b和广东株N .b的序列比较得知 ,山东株N .b和广东株N .b ,山东株N .b和日本株N .b ,以及广东株N .b和日本株N .b之间的序列同源性分别为 94 .0 0 %、96 .2 1%、92 .11%。进一步聚类分析发现 ,山东株N .b和日本株N .b之间的亲缘关系更接近     

番鸭细小病毒弱毒株VP2基因的序列分析

将番鸭细小病毒强毒株MDPV－Q经番鸭胚传代，获得致弱株MDPV－26，应用PCR技术扩增MDPV－26株的VP2基因片段，将扩增后的VP2基因重组到pMD 18-T质粒载体上，并对插入片段进行序列测定，将测定结果及由该结果推导的氨基酸序列分别与MDPV－Q株及国外已发表的MDPV相应序列进行同源性比较及分析，结果表明，MDPV－26与强毒株MDPV－Q的VP2基因序列及与国外分离株均具有很高的同源性。     

番鸭呼肠孤病毒MW97106C蛋白基因克隆及其在E．coli中表达

应用RT～PCR扩增出番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC基因，序列分析表明σC基因核苷酸数为810bp．编码269个氨基酸，相对分子量为29．4ku，DNAstar软件分析MW9710株的σC核苷酸序列和法国番鸭呼肠孤病毒89026株有93％的同源性，而与禽呼肠孤病毒的同源性仅在21％～25％之间，表明番鸭呼肠孤病毒是一类不同于禽呼肠孤病毒的新病毒。将σC基因片段亚克隆到原核表达载体pET32a中．经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达，Western—blot进一步验证了表达产物与番鸭呼肠孤病毒阳性血清反应．表明σC基因表达产物具有免疫原性，为下一步研制番鸭呼肠孤病毒诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定基础。     

犬腺病毒纤突蛋白基因功能区的比较分析

根据GenBank中已发表的CAV纤突基因序列，设计合成4对8条引物，用已建立的PCR方法，对犬2型腺病毒沈阳分离株第5代强毒经蚀斑克隆驯化的第60代毒弱毒（SY-V60）和犬1型腺病毒长春犬株（CCC-V6）的纤突基因进行了扩增，PCR产物经纯化后进行基因序列测定，测定结果经拼接后得到一个由1632和1629个核苷酸组成的纤突蛋白全基因序列，分别编码543和542个氨基酸。犬2型腺病毒（SY-V60）与犬1型腺病毒（CCC-V6）的纤突基因的同源性达到80.48%。犬2型腺病毒（SY-V60）与犬1型腺病毒（CCC-V6）纤突基因的同源性达到80.48%；根据犬的腺病毒与人2型腺病毒纤突蛋白的序列同源性比较结果，推测了犬腺病毒纤突蛋白的尾（tail)、轴（shaft)，结（knob)三个功能区的氨基酸序列，2个型之间的尾区同源性为76.9%；轴区同源性为78.59%；其结区同源性为83.24%，而同型毒株之间结和尾区同源性较高，轴区同源性较低。