MDV Meq-clustered miRNAs基因缺失BAC克隆株的构建及其体外增殖特性

为构建缺失马立克氏病病毒(Mareks disease virus,MDV)Meq基因簇microRNAs(Meq-clustered miRNAs的突变株,本研究在vv MDV GX0101细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)克隆的基础上,采用Red/ET同源重组技术将Meq-clustered miRNAs的编码基因进行缺失突变,经PCR鉴定及序列分析证明Meq-cluster miRNAs序列成功缺失后,提取Δmeq-miRNAs BAC DNA,转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒拯救,用SYBR GreenⅠqRT-PCR检测病毒体外增殖特性。结果表明成功拯救出缺失MDV Meq-clustered miRNAs基因的感染性BAC克隆株GX0101Δmeq-miRNAs,且该缺失株与亲本株GX0101BAC具有相似的增殖曲线,Meq-clustered miRNAs是MDV体外复制的非必需基因。MDV Meq-clustered miRNAs基因缺失感染性BAC克隆株的成功构建为进一步研究MDV Meq-clustered miRNAs在MDV致病和致肿瘤方面的作用奠定了基础。     

鸡RORα真核表达载体的构建及其在MSB1细胞中的表达

为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM_001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组织中提取总RNA,经反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增,将扩增的特异性RORα基因片段连接pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-RORα,再用SalⅠ和BamHⅠ双酶切克隆载体pMD18-T-RORα和真核表达载体pEGFP-N1,将酶切回收的RORα与pEGFP-N1片段进行连接,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-RORα,经PCR、酶切和测序验证准确性后,将其转染MSB1细胞,于转染后48h荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,并采用实时荧光定量PCR检测鸡RORα在MSB1细胞中的表达水平。结果显示,从构建的重组质粒pEGFP-N1-RORα中可扩增出大小约1 600bp的特异性片段,用SalⅠ和BamHⅠ可切出大小约4 700和1 600bp的两条带。实时荧光定量PCR结果显示,转染MSB1细胞48h后,与对照组相比,重组真核表达载体转染组中鸡RORα基因mRNA水平显著增加(P0.05)。表明本试验成功构建了鸡RORα的真核表达载体,该载体可在MSB1细胞中表达鸡RORα,为进一步研究鸡RORα对MSB1细胞增殖的影响奠定基础。     

沙门菌Ⅵ型分泌系统组装、结构特征和分泌调控网络的研究进展

Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system, T6SS)是革兰阴性菌中广泛存在的一种“分泌装置”和“杀伤机器”,其功能是将细菌毒素输送至原核或真核细胞中从而抑制/杀灭它们。T6SS在沙门菌致病过程中发挥着重要作用，能够独立编码5套T6SSs(T6SS-1～T6SS-5),分别由沙门菌毒力岛6(SPI-6)、毒力岛19(SPI-19)、毒力岛20(SPI-20)、毒力岛21(SPI-21)和毒力岛22(SPI-22)编码。T6SS参与沙门菌的种间竞争、生物被膜形成、金属离子摄取运输以及与宿主细胞相互作用，在沙门菌生活周期中发挥不可或缺的作用。本文主要综述沙门菌T6SS组装、基因组结构特征以及分泌调控网络最新研究进展，为深入研究沙门菌致病机制以及开发新的抗菌策略提供理论指导。     

动物药学专业多元化实践教学体系的探索

结合社会对动物药学人才培养的要求、学校人才培养定位及动物药学专业培养目标和专业特点,文章从实践教学环节、实践教学方法和实践教学环境等方面对动物药学专业多元化实践教学体系进行了设计与探索。     

乳酸杆菌和中草药合生元添加剂对肉鸡生长性能的影响

研究了乳酸杆菌与中草药合生元对1～35日龄艾维因肉鸡生长性能的影响。结果表明,合生元组在整个试验期的平均体重较对照组极显著提高(P<0.01),但周增重和日增重仅在0～3周差异极显著(P<0.01)。合生元组的周增重和日增重仅在第2周龄较乳酸杆菌组极显著提高(P<0.01),在0～3周龄,均较乳酸杆菌组和中草药组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。料重比,0～5周龄合生元组均比对照组、乳酸杆菌组、中草药组极显著降低(P<0.01),但各周龄合生元组与乳酸杆菌组无明显差异(P>0.05),合生元组与中草药组在3周龄和4周龄差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。     

合生元对艾维因肉鸡生长性能和免疫功能的影响

此试验研究了合生元对1～35日龄艾维因肉鸡生长性能和免疫功能的影响。结果表明：合生元组在整个试验周期的平均体重均较对照组和中草药组极显著提高（P〈0．01）,但与芽胞杆菌组差异不明显（P〉0．05）。日增重仅在0～5周差异极显著（P〈0．01）,合生元组的日增重仅在第2周龄较茅胞杆菌组极显著提高（P〈0．01）,在0～4周龄,均较芽胞杆菌组和中草药组差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）。在料肉比方面,1～5周龄合生元组均比对照组、芽胞杆菌组,中草药组极显著降低（P〈0．01）,但各周龄合生元组与茅胞杆菌组无明显差异（P〉0．05）,合生元组与中草药组除了第5周龄无明显差异（P〉0．05）,其余各周龄均差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）。在免疫方面,合生元组的胸腺、法氏囊、脾脏指数均有不同程度的提高,新城疫效价较其它各组均极显著提高。     

中药增免康对AA肉鸡生产性能、免疫功能及肠道酶活影响的研究

在基础日粮中添加1%的中药增免康,研究其对AA肉鸡的生产性能、免疫功能及消化道酶活的影响。试验结果表明,增免康仅在第2周龄有促生长作用(P<0.05);15日龄时胸腺指数、法氏囊、脾脏指数分别提高了27.42%(P<0.05)、77.50%(P<0.05)和35.06%(P>0.05);35日龄时分别为32.42%(P<0.05)、33.49%(P<0.01)和27.17%(P<0.05);新城疫效价提高了40.91%(P<0.05),血液中IgA提高了8.89%(P<0.01),但血液中的IgG与对照组无显著差异(P>0.05)。     

萨杜湖杂交羊生长性能、羊毛品质及血液生理生化指标测定

为研究萨福克羊×杜泊羊×湖羊杂交羊(萨杜湖杂交羊)生长发育情况及其对当地生态环境的适应能力,采用生产性能常规测定、显微测定和全自动血液生理生化分析仪分别测定了不同年龄阶段萨杜湖杂交羊的体重、体尺指标、羊毛品质(包括不同部位羊毛的净毛率、细度、有髓毛和无髓毛占比、自然长度和伸直长度等指标)和成年羊血液生理生化指标。结果表明:萨杜湖杂交羊早期生长速度较快,初生阶段及周岁时公羊体斜长均显著高于母羊(P<0.05);3月龄时公羊体高、体斜长和胸围均显著高于母羊(P<0.05);6月龄时母羊体重极显著高于公羊(P<0.01),成年时期公羊体重和体高均显著高于母羊(P<0.05);其余各生长阶段内,公母羊间体重及体尺差异不显著(P>0.05)。其成年时平均净毛率较低,为45.21%;长度适中:平均自然长度为4.55cm,伸直长度为6.22cm;细度良好,为17.60μm。公母羊血液生理生化指标及其同国内绵羊参考值相比存在一定的差异,其中母羊血小板总数(PLT)和血小板压积(PCT)均极显著高于公羊(P<0.01),公羊甘油三酯(TG)和白蛋白(ALB)含量显著高于母羊(P<0.05),其余各项指标均无显著差异(P>0.05)。综上所述,萨杜湖杂交羊在生长发育等方面都有不同程度的改进和提高,本试验结果可为该品种杂交羊进一步开发利用提供参考依据。     

禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达

根据GenBank已公布的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计1对IBV S1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1 566 bp IBV S1基因表达片段,5′端不含信号肽序列,3′端添加了终止密码子。用限制性内切酶SnaB和Not将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His Muts。将重组菌株在1%甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76 000,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。     

规模化猪场粪污高效脱硫菌的分离、筛选与鉴定

为降解规模化猪场污水中的S^2-,本研究从规模化猪场采集粪便污水样品20份,首先接种于含10 g/L Na2S的基础无机盐培养基中富集培养,然后涂布于分离培养基进行分离与纯化。对纯化的菌株采用对氨基二甲基苯胺分光光度法测定培养上清中S^2-含量,筛选菌株的脱硫能力。选择降解率较高的菌株进行生理生化鉴定和16S rDNA分子鉴定,并对扩增的序列进行同源性比较及进化树分析。结果表明:从20个样品中分离了14株菌株,筛选获得2株脱硫率较高的菌株JFF-2和JFF-3,脱硫率可达84.02%和86.12%;经16S rDNA序列分析表明,JFF-2菌与地衣芽孢杆菌的同源性为99.2%,JFF-3菌与粪产碱杆菌的同源性为98.7%,因此分别确定为地衣芽孢杆菌和粪产碱杆菌,与生理生化鉴定的结果一致。本研究获得了2株能够对畜禽粪便污水脱硫的菌株,为畜禽排泄物的进一步无害化处理提供了可能。