沙门菌Ⅵ型分泌系统组装、结构特征和分泌调控网络的研究进展

Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system, T6SS)是革兰阴性菌中广泛存在的一种“分泌装置”和“杀伤机器”,其功能是将细菌毒素输送至原核或真核细胞中从而抑制/杀灭它们。T6SS在沙门菌致病过程中发挥着重要作用，能够独立编码5套T6SSs(T6SS-1～T6SS-5),分别由沙门菌毒力岛6(SPI-6)、毒力岛19(SPI-19)、毒力岛20(SPI-20)、毒力岛21(SPI-21)和毒力岛22(SPI-22)编码。T6SS参与沙门菌的种间竞争、生物被膜形成、金属离子摄取运输以及与宿主细胞相互作用，在沙门菌生活周期中发挥不可或缺的作用。本文主要综述沙门菌T6SS组装、基因组结构特征以及分泌调控网络最新研究进展，为深入研究沙门菌致病机制以及开发新的抗菌策略提供理论指导。     

中国珍禽——汶上芦花鸡

汶上芦花鸡起源于山东省汶上县,以其悠久的历史文化、独特的羽色和体型、高营养的肉蛋产品而驰名中外。汶上芦花鸡是＂山东省十大地方畜禽品种名牌＂,被山东省畜牧兽医局确定为全省36个畜禽遗传资源保护品种之一。2009年正式被国家工商管理总局商标局批准地理商标。2011年5月被国家畜禽遗传资源委员会编入《中国畜禽遗传资源志——家禽志》。     

中药复方灌注剂对奶牛乳房炎致病菌的体外抑菌效果及临床疗效

为了明确中药复方灌注剂对奶牛乳房炎常见致病菌的体外抑菌效果及临床疗效,试验选用蒲公英、紫花地丁、金银花、连翘、当归及瓜蒌等中药,按照一定比例组方,采用中药灌注液的常用提取方法水提醇沉法提取有效成分。采用牛津杯法和二倍比稀释法对奶牛乳房炎常见病原菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌进行体外抑菌试验,结果表明该中药复方灌注剂对上述致病菌均具有较好的抑菌效果。每天对患病奶牛乳区灌注该中药复方灌注液40mL,连续14d,发现其对隐性乳房炎有效率和治愈率达95.00%,对临床型乳房炎有效率达90.00%、治愈率达80.00%,用药后乳体细胞数低于20万个/m L,显著低于用药前乳体细胞数（P<0.05）,平均日产奶量提高约1kg,表明该中药复方灌注剂对奶牛乳房炎具备良好的治疗效果。     

鸡IL-2和新城疫病毒HN基因在毕赤酵母中的融合表达

为进一步研究IL-2对疫苗的免疫增强作用,本研究经PCR扩增分别获得鸡IL-2和新城疫病毒(NDV)HN基因片段,应用分子克隆技术获得含有融合基因IL2-HN的真核表达载体pPICZαA-IL2-HN,重组质粒pPICZαA-IL2-HN线性化后整合入毕赤酵母X-33染色体上,在甲醇诱导下表达融合蛋白,再进行SDS-PAGE、Western-blot检测。SDS-PAGE分析结果表明目的蛋白为分泌性表达,分子量约为100 ku,Western-blot结果表明目的蛋白具良好的免疫反应性。     

地膜蔬菜套复种栽培技术

地膜蔬菜的套复种栽培技术,能够充分发挥地膜的保温、保水、保肥等诸多优点,而且一次投入两茬受益。这项技术的应用,有效地提高了土地利用率和产出率,增加农民的收入。     

人α-防御素-3基因乳腺特异性表达载体的构建及在兔乳腺中的瞬时表达

为探索人α-防御素-3（HNP-3）基因在兔乳腺中特异性表达的可行性,将HNP-3基因与大鼠乳清酸蛋白（WAP）基因5′端调控区序列融合,定向克隆到PEGFP-1表达载体EGFP基因上游,在EGFP基因3′端加上His标签蛋白基因序列,构建了HNP-3基因乳腺定位表达载体pEGFP-WAP-HNP-S,将pEGFP-WAP-HNP-S与脂质体包裹后通过乳腺导管注射法转入妊娠母兔乳腺中,Westernblot和ELISA检测HNP-3融合基因在乳腺中表达和融合蛋白的表达水平,并用Ni亲和层析柱进行纯化。结果表明：分娩后初乳中即有分子质量为40kD的HNP-3融合蛋白表达,分娩后第4d达到高峰,表达量为265ng/mL。实验证明HNP-3融合基因在乳腺组织中能够特异性的表达。     

适宜于实验教学的动物组织总RNA提取的操作方法

为探索适宜于实验教学的动物组织总RNA的提取方法,采用氯仿处理实验器皿、耗材和水以降低外源性RNA酶对RNA的降解作用。结果表明,操作过程中合理利用氯仿能够有效降低外源性RNA酶的污染;与DEPC水处理效果相比,提取的总RNA均可用于分子生物学研究和RT-PCR扩增,但使用氯仿处理更为安全。     

6种中药成分对猪传染性胃肠炎病毒的体外抑制作用

【目的】为探讨连翘苷等6种中药成分抗猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）的作用机制,明确其体外抗病毒作用效果,为抗TGEV的药物筛选提供依据。【方法】利用动物细胞培养技术,采用MTT比色法和细胞病变(CPE)观察法相结合,测定连翘苷、连翘苷元、绿原酸、咖啡酸、丁香酚、丹皮酚6种中药成分不同浓度下对猪睾丸细胞（ST）的毒性作用,通过观察细胞CPE情况,确定药物对细胞作用的最大安全浓度;同时测定病毒的TCID₅₀,用细胞维持液配成100·TCID₅₀病毒悬液备用;将6种药物在最大安全浓度范围内连续2倍倍比稀释后,分别采用先感染病毒后加药、先加药后感染病毒、药与病毒混合后感染细胞3种不同作用方式进行体外增殖抑制试验,各试验组均设置正常细胞对照组和病毒对照组,每组设置3个重复,通过酶标仪测得630 nm处OD值,计算出不同作用方式下中药成分分别对TGEV的抑制率,筛选出抗TGEV活性较好的中药成分,并分别记录抗病毒效果最佳时药物的浓度;6n>种中药成分与病毒作用后,测定TGEVRT-PCR鉴定各个药物单体对病毒RNA合成的抑制情况,进一步明确各中药成分对TGEV的抑制作用。【结果】连翘苷、连翘苷元、绿原酸、咖啡酸、丁香酚、丹皮酚的最大安全浓度分别为320、200、80、125、100、200 μmol·L^-1;抗病毒效果最佳时药物的浓度分别为：160、100、20、62.5、25、100 μmol·L^-1。根据Karber法计算出初始TGEV的TCID₅₀为10^-6.25/0.1 mL;6种中药成分对TGEV在ST细胞上均有一定的增殖抑制作用,其中咖啡酸浓度为62.5 μmol·L^-1时与100·TCID₅₀病毒混合作用后的病毒增殖抑制效果最好,相互作用72 h时,细胞形态依然能够保持圆滑、无固缩、完整,且细胞间轮廓清晰,仅有少量细胞脱落、死亡;此时测上清病毒的TCID₅₀为10^-3.75/0.1 mL,结果显示咖啡酸组病毒含量比病毒对照组10^-6.45/0.1 mL差异极显著（P＜0.01）;通过酶标仪测得630 nm处OD值计算出抑制率能够达到84.4%,咖啡酸直接灭活病毒作用极其显著。其次是连翘苷、连翘苷元、绿原酸、丹皮酚及丁香酚,其病毒滴度分别为：10^-4.75、10^-5.55、10^-5.55、10^-5.65、10^-5.75/0.1 mL,但是这几种中药成分对病毒的抑制作用不够显著,抑制率大多在50%以下。另外,各中药成分对TGEV在ST细胞上的增殖抑制作用均为对TGEV的直接灭活作用最好,其次为对TGEV吸附阻断作用,最后为对TGEV的复制阻断作用。RT-PCR鉴定中药成分对病毒抑制作用,结果显示咖啡酸组条带与病毒对照组相比较暗,病毒效价较低,对病毒抑制作用效果显著;其次是连翘苷、连翘苷元、绿原酸、丹皮酚及丁香酚。【结论】6种中药成分在ST细胞上对TGEV均有一定的增殖抑制作用,其中咖啡酸直接灭活病毒作用最显著,有望被开发成抗病毒药物。     

新城疫病毒HN抗肿瘤机制研究进展

论述了HN抗肿瘤作用的机制,并对其发展前景作了展望。     

合生元对艾维因肉鸡生长性能和免疫功能的影响

此试验研究了合生元对1～35日龄艾维因肉鸡生长性能和免疫功能的影响。结果表明：合生元组在整个试验周期的平均体重均较对照组和中草药组极显著提高（P〈0．01）,但与芽胞杆菌组差异不明显（P〉0．05）。日增重仅在0～5周差异极显著（P〈0．01）,合生元组的日增重仅在第2周龄较茅胞杆菌组极显著提高（P〈0．01）,在0～4周龄,均较芽胞杆菌组和中草药组差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）。在料肉比方面,1～5周龄合生元组均比对照组、芽胞杆菌组,中草药组极显著降低（P〈0．01）,但各周龄合生元组与茅胞杆菌组无明显差异（P〉0．05）,合生元组与中草药组除了第5周龄无明显差异（P〉0．05）,其余各周龄均差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）。在免疫方面,合生元组的胸腺、法氏囊、脾脏指数均有不同程度的提高,新城疫效价较其它各组均极显著提高。