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基于E184L基因的非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高度接触性传染病。由于ASFV的感染机制极为复杂,基因型多,至今尚无有效疫苗用于防控,防止该病暴发主要依赖于早期快速诊断和控制。为建立一种高效快速、特异的ASFV检测方法,根据ASFV的E184L基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,建立了检测ASFV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,该方法设计的引物具有高度特异性,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数为0.992,对ASFV核酸最低检测限为1.51拷贝,且与伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等不存在交叉反应。建立的基于ASFV E184L基因实时荧光定量PCR检测方法能够快速、准确、特异地对ASFV核酸进行定量分析,丰富了ASFV的检测方法。 相似文献
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根据口蹄疫病毒基因组的5’非翻译区序列比较保守的特点,采用软件设计亚欧型(A、O、C及Asia-1型)FMDV通用的引物和探针,经对反应条件和反应体系进行优化,建立了亚欧型FMDV的实时荧光RT—PCR检测方法。研究表明,该方法检测阳性质粒模板的线性范围为1.9×10^7-1.9×10拷贝,最低可检测19个拷贝。通过对FMDV各血清型(A、O、C、Asia-1及SAT-1,2,3型)的检测,证实该方法对亚欧型FMDV具有良好的特异性,能有效区分亚欧型和南非型FMDV感染。本研究为亚欧型口蹄疫的快速诊断和流行病学调查提供了新的方法。 相似文献
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应用荧光RT-PCR检测亚欧型口蹄疫病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
根据口蹄疫病毒基因组的5’非翻译区序列比较保守的特点,采用软件设计亚欧型(A、O、C及Asia-1型)FMDV通用的引物和探针,经对反应条件和反应体系进行优化,建立了亚欧型FMDV的实时荧光RT-PCR检测方法。研究表明,该方法检测阳性质粒模板的线性范围为1.9×107-1.9×10拷贝,最低可检测19个拷贝。通过对FMDV各血清型(A、O、C、Asia-1及SAT-1,2,3型)的检测,证实该方法对亚欧型FMDV具有良好的特异性,能有效区分亚欧型和南非型FMDV感染。本研究为亚欧型口蹄疫的快速诊断和流行病学调查提供了新的方法。 相似文献
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我国近期猪瘟分子流行病学动态 总被引:12,自引:3,他引:9
利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)及测序技术 ,测定 2 0 0 2年分离于我国甘肃、湖南、海南、青海等省的 9株猪瘟野毒的E2基因序列 ,并与C 株疫苗毒进行同源性比较 ,绘制CSFV系统发生树。结果表明 ,近期分离于我国的 9株野毒与C 株核苷酸序列间的同源性在80 .7%~ 99.1 %,氨基酸同源性在 89.3%~98.9%。9株野毒分属于 2个不同的组群 ,其中 5株与我国经典的石门强毒和C 株疫苗毒同属于Subgroups1 .1 ,另 4株属于与C 株有较大差异的Subgroup2 .1。 相似文献
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醋酸甲羟孕酮人工抗原的合成与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】为建立醋酸甲羟孕酮(MPA)快速准确的免疫学分析技术,对MPA人工抗原的合成鉴定进行研究。【方法】将MPA肟化后与琥珀酸酐反应制得MPA半琥珀酸(MPA-HS),然后通过碳二亚胺法将MPA-HS与牛血清白蛋白(BSA)偶联合成人工抗原MPA-BSA,并采用紫外全波长扫描法、SDS-PAGE法、ELISA检测法和动物免疫试验对其进行鉴定。【结果】MPA与BSA的偶联比为8∶1时,合成的人工抗原MPA-BSA具有良好免疫原性与反应原性。【结论】成功合成了人工抗原MPA-BSA,为进一步的MPA免疫学分析技术研究奠定了基础。 相似文献
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醋酸甲羟孕酮(MPA)人工抗原的合成与单克隆抗体的制备 总被引:1,自引:0,他引:1
为研制检测醋酸甲羟孕酮(MPA)的免疫学检测技术进行MPA单克隆抗体的制备与鉴定,研究分别采用碳二亚胺法、混合酸酐法将MPA偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)上制备免疫原(MPA—BSA)与包被原聊PA—OVA),通过BALB/c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA和阻断ELISA筛选、有限稀释法克隆亚克隆获得分泌MPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、敏感性、亚类及稳定性进行鉴定。结果表明:成功合成2种人工抗原,MPA与BSA、OVA的偶联比分别为8:1、12:1;获得1株稳定分泌MPA单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株2G4H9,McAb腹水的间接ELISA效价为1:8×10^4,IgG1亚类,K型轻链,腹水抗体IC50为5.0ng·mL^-1,与甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和己烯雌酚交叉反应率为12.5%、〈0.01%、〈0.01%和〈0.01%。作者认为:MPA单克隆抗体特异性和敏感性良好,杂交瘤细胞株性能稳定,为进一步研究MPA相关免疫学分析技术奠定了基础。 相似文献
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SPR生物传感器快速检测醋酸甲羟孕酮的初步应用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
动物源性食品中残留的醋酸甲羟孕酮(medroxy progesterone acetate,MPA)对人类健康有潜在的危害。利用SPR生物传感器快速检测MPA,对抗原的固定条件、抗体的浓度及芯片再生条件进行了优化,同时对抗体的稳定性及特异性进行了分析。结果显示,该方法检测的最低限约为1 ng/mL。利用模拟标本进行平行测试表明,其与进口ELISA检测试剂盒结果基本一致。SPR生物传感器检测MPA,单个样品的检测时间小于5 min,非常适合现场的快速检测,具有广泛的应用前景。 相似文献
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牛干扰素单克隆抗体的制备与初步鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
通过IPTG诱导的大肠埃希菌表达重组牛干扰素-γ融合蛋白(BovIFN-γ),利用GlutathioneSepharose 4 Fast Flow亲和层析柱进行融合蛋白的纯化,纯化后的融合蛋白BovIFN-γ作为抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA筛选,有限稀释法克隆亚克隆获得分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、亚类及稳定性进行鉴定。获得一株稳定分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株A12E9,细胞培养上清和腹水效价可达1∶3 200和1∶160 000。 相似文献