A型流感病毒分型基因芯片在流感病毒各亚型监测中的应用

为验证自行研制的A型流感病毒分型基因芯片方法在实际中的应用效果,了解A型流感病毒各亚型在我国不同地区和不同宿主中的分布情况,对我国20个地区、不同宿主源(鸡、鸭、鹌鹑、鸽子、猪、人等)拭子和组织样品共16 852份进行了检测。利用自行研制的A型流感病毒分型基因芯片方法,对样品进行RNA提取、多重不对称RT-PCR扩增、芯片杂交、洗涤和扫描分析;同时将基因芯片检测阳性的样品,用普通RT-PCR扩增后进行序列测定。结果显示:利用该方法检出阳性样品2 582份,总检出率为15.32%(2 582/16 852),共检测到H1N1、H2N9、H3N2、H4N6、H5N1、H7N1、H7N9、H9N2、H10N5、H16N3等10个亚型,且均与阳性样品测序结果一致。结果表明,该方法可准确检测不同地区、不同宿主中的A型流感病毒不同亚型。同时,该方法能在同一张芯片上准确鉴定A型流感病毒的多种亚型,解决了其他常规方法无法检测已发现和可能发生变异的所有亚型的棘手问题,从而为A型流感诊断和分子流行病学监测提供了一种新技术。     

纳米标记物新型免疫检测技术研究进展

纳米标记物新型免疫检测技术是近年来广泛应用于各个领域且发展迅速的一种简便、精准的现场检测技术,逐步推动着分子生物学的发展及人畜疾病的防控,成为了生物分析领域的重要内容,与之密切相关的纳米材料标记物在检测技术中起着主导作用。由于各种新型的纳米材料标记物的不断研发与优化分析,使得与之相关的检测技术广泛运用于食品质量检测、检验检疫、疾病防控等方面。随着生物分析领域的拓展,更多的标记物如纳米磁珠、镧系元素、上转换发光颗粒、纳米乳球、量子点等已被制备并应用于更多疾病诊断技术中。论文以结合近年来成功研究为基础归纳新型纳米材料标记物的特性方面的研究进展,剖析其多元性,以期为相关研究提供参考。     

小反刍兽疫实时荧光PCR检测方法的建立及应用

以小反刍兽疫病毒N基因序列为靶基因,通过设计引物及TaqMan探针建立快速检测小反刍兽疫的荧光PCR方法.在线BLAST分析结果表明:所设计的引物特异性强,可区分小反刍兽疫病毒及牛瘟病毒感染;所建立的方法检测线性范围为1～1×106拷贝质粒DNA,灵敏度可达10拷贝质粒DNA,是常规PCR法的100倍.应用所建立的方法对32份采自西藏疫区的组织样品进行检测,说明疫情在西藏没有扩散.     

牛结核病病原体研究进展

牛结核病是一种人畜共患传染病,人畜结核病的交叉传播是造成结核病广泛流行的重要原因之一。本病的传播流行直接影响着畜收业的发展,而且还会通过各种途径传染给人,给人类的健康也带来很大威胁。作者对结核病病原体的特点及分类进行了概述,并主要对牛分枝杆菌和结核分枝杆菌进行了基因组比较以及它们之间的区分和鉴定进行了综述。     

转基因牛多重PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测转基因牛的多重PCR方法,针对牛线粒体16 S rRNA基因(BOS mtD-NA16 S rRNA,BOS)、转基因动物常用标记基因新霉素磷酸转移酶基因(NPT Ⅱ)、人乳铁蛋白编码基因(human laetoferrin gene,hLF)、人-α-乳清蛋白编码基因(human α-lactalb...     

猪瘟病毒E2蛋白在酵母中分泌表达条件的优化

影响外源基因在毕赤酵母中表达的因素很多，除了基因序列本身的内在特性外，表达条件对外源基因的表达量的高低也有着极显著的影响。本文对猪瘟病毒E2基因在毕赤酵母中不同的时间、不同的诱导型、不同的pH、不同的诱导剂量等方面表达量的差异进行了详细对比研究。结果表明，诱导后72～96h，重组E2蛋白的表达量最高。与单纯甲醇诱导相比，甘油／甲醇诱导后的表达量明显提高。在pH7．5和pH8．0表达E2蛋白是比较合适的。甲醇浓度在3％左右时E2蛋白的表达量较高。     

精子生成基因的研究进展

随着分子生物学、分子遗传学技术的发展,近年的研究发现了精子生成基因候选基因(YRRM)和精子生成有关的基因家族(SOX)等基因,从分子水平揭示了精子产生的机制,本文总结了有关方面的研究成果.     

重组红火蚁毒素蛋白SoliⅣ致病机理的初步研究

作者通过研究重组红火蚁毒素蛋白Solenopsis invictaⅣ (SoliⅣ)对兔及外周血淋巴细胞的影响,探讨红火蚁毒素蛋白致病机制。通过分离兔外周血淋巴细胞进行培养,经不同浓度的重组红火蚁毒素蛋白SoliⅣ分别和细菌脂多糖(LPS)、刀豆蛋白(ConA)共同刺激后,MTT法测定淋巴细胞的增殖情况;体内试验：用重组蛋白SoliⅣ从兔背部皮下注入,观察兔的临床反应,定期采血,用ELISA方法测定兔血清中白介素 4（IL-4）和总IgE的变化。重组红火蚁毒素蛋白SoliⅣ浓度为25、50、75 μg/ml和LPS共刺激时,与单独LPS刺激对照组相比,淋巴细胞增殖活性显著增高（P<0.05）;浓度为15、25、50、75 μg/ml和ConA共刺激时,与单独ConA刺激对照组比较,淋巴细胞增殖活性显著增高（P<0.05）;重组SoliⅣ过敏兔的血清中IL-4和总IgE的水平升高,在20 h左右达到最高值。试验结果表明,一定浓度的重组红火蚁毒素蛋白SoliⅣ能引起体外培养的T、B淋巴细胞增殖,过敏体质兔在重组红火蚁毒素蛋白SoliⅣ刺激后能引起Ⅰ型变态反应。     

检科1号消毒剂带鸡消毒对鸡的急性与亚慢性毒性影响

为评价检科1号消毒剂对鸡只的急性刺激和亚慢性毒性影响，将AA肉鸡分成8个试验组，其中4个试验组用于急性刺激试验，4个试验组用于亚慢性毒性试验。急性刺激试验采用4个不同的喷雾浓度：空白对照（自来水）、喷雾使用浓度组（按说明书喷雾使用浓度）、5倍喷雾使用浓度组、10倍喷雾使用浓度组；亚慢性毒性试验采用喷雾1次加4个不同的饮水浓度：自来水、1倍饮水浓度、5倍饮水浓度、10倍饮水浓度。试验结果表明，检科1号消毒剂在使用浓度时对鸡只的急性刺激作用较小，对鸡只的血液学指标、组织学等方面几乎没有影响，对鸡只的增重亦没有显著影响。这表明检科1号消毒剂用于带鸡消毒是安全的。     

猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术扩增出猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区并克隆于PGEM-T easy载体上，测序结果表明插入的为猪瘟病毒E2基因抗原结构域，切出目的基因，将目的基因克隆到表达质粒pProEX—HTb中，获得重组质粒经PCR、酶切和序列分析鉴定E2基因抗原结构域插入的位置、大小和读码框均正确，SDS—PAGE检测表明受体菌经IPTG诱导后能表达E2基因抗原结构域蛋白，Westernblot检测表明受体菌诱导表达E2基因抗原结构域蛋白可与猪瘟阳性血清发生特异性反应。