A型流感病毒分型基因芯片在流感病毒各亚型监测中的应用

为验证自行研制的A型流感病毒分型基因芯片方法在实际中的应用效果,了解A型流感病毒各亚型在我国不同地区和不同宿主中的分布情况,对我国20个地区、不同宿主源(鸡、鸭、鹌鹑、鸽子、猪、人等)拭子和组织样品共16 852份进行了检测。利用自行研制的A型流感病毒分型基因芯片方法,对样品进行RNA提取、多重不对称RT-PCR扩增、芯片杂交、洗涤和扫描分析;同时将基因芯片检测阳性的样品,用普通RT-PCR扩增后进行序列测定。结果显示:利用该方法检出阳性样品2 582份,总检出率为15.32%(2 582/16 852),共检测到H1N1、H2N9、H3N2、H4N6、H5N1、H7N1、H7N9、H9N2、H10N5、H16N3等10个亚型,且均与阳性样品测序结果一致。结果表明,该方法可准确检测不同地区、不同宿主中的A型流感病毒不同亚型。同时,该方法能在同一张芯片上准确鉴定A型流感病毒的多种亚型,解决了其他常规方法无法检测已发现和可能发生变异的所有亚型的棘手问题,从而为A型流感诊断和分子流行病学监测提供了一种新技术。     

37 ℃持续热应激肉鸡血气改变的动态分析

80只25日龄雄性AA肉鸡,随机分为对照组(21～24 ℃,相对湿度50%±5%)和试验组(37 ℃±0.5 ℃,相对湿度70%±5%),自由采食和饮水.在12 d的试验期间,动态检测血气指标、呼吸频率、直肠温度和生产性能的变化.结果显示热暴露初期呈现代偿性呼吸性碱中毒,其特点为动脉血二氧化碳分压(3.82±0.36)降低,pH(7.48±0.04)升高;中期呈现失代偿性代谢性酸中毒,其特点为血浆HCO-3浓度(19.00±2.55)降低,pH(7.37±0.06)显著下降(P＜0.05);后期酸碱平衡趋于正常.热应激后,肉鸡日增重和日采食量极显著下降(P＜0.01)、料肉比极显著升高(P＜0.01);呼吸频率极显著升高(P＜0.01);热暴露第1、5、7、9和12天体温极显著升高(P＜0.01).动脉血氧分压与呼吸频率呈极显著负相关(P＜0.01),与体温呈显著负相关(P＜0.05);血氧饱和度与体温极显著负相关(P＜0.01).表明37 ℃持续热应激的肉鸡呈现由代偿性呼吸性碱中毒转变为失代偿性代谢性酸中毒,最后趋于正常的动态变化过程.     

内皮素A受体拮抗剂BQ123对肉仔鸡股动脉压和肺动脉压的影响

为探讨内源性内皮素-1(ET-1)是否参与肉鸡血压的维持等生理调节活动,采用急慢性给予内皮素ETA受体的特异性拮抗剂BQ123,研究内源性ET-1对正常肉鸡股动脉压和肺动脉压的影响。结果表明:1)放免法检测2~6周龄正常肉仔鸡血浆(从(40.82±1.90)升高到(93.70±11.19)pg/mL)和肺匀浆内皮素(从(503.84±27.40)升高到(701.04±16.18)pg/g)的含量随日龄的增加有升高的趋势;2)急性翼静脉注射BQ123(0.4和2.0μg/kg)能够极显著降低肉鸡的股动脉收缩压、舒张压和肺动脉收缩压、舒张压(P<0.01),注射2.0μg/kg BQ123压力下降程度比注射0.4μg/kg大,肺动脉压达到最低点的时间比股动脉早;3)慢性给予BQ123能够使肉鸡肺动脉收缩压极显著下降(对照组(3.37±0.47)kPa,BQ123组(2.46±0.50)kPa,P<0.01),股动脉收缩压显著下降(对照组(20.95±1.17)kPa,BQ123组(18.85±2.05)kPa,P<0.05)。试验结果显示:急性和慢性注射ETA受体的特异性拮抗剂BQ123都能降低肉鸡股动脉压和肺动脉压,推测内源性ET-1参与了肉鸡血压的维持等生理调节活动。     

钙调素拮抗剂三氟拉嗪对犬肾上皮细胞增殖的影响

为探讨钙调素拮抗剂三氟拉嗪(TFP)对犬肾上皮细胞(MDCK)增殖的抑制作用及对细胞各周期时相的影响,采用细胞计数法、流式细胞术、[γ-32P]ATP掺入外源性底物的液体闪烁法和免疫组化技术,分别测定5、10和15μmol/L浓度的TFP对MDCK细胞增殖的抑制作用、细胞各周期时相的百分率、胸苷激酶(TK)的活性以及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的阳性率。结果表明:给药3 d后,各浓度TFP对MDCK细胞生长均具有明显抑制作用;G0/G1期的细胞比率均显著增加(P<0.05),而S期、G2/M期细胞的比率则有所下降,其中高浓度TFP组显著下降(P<0.05);细胞内TK的活性和PCNA的表达显著降低,呈明显的时间剂量效应关系。说明TFP可通过阻断钙调素信号通路,影响DNA合成和细胞周期而抑制MDCK细胞的增殖。     

牛布鲁菌荧光标记免疫层析试纸条快速检测方法的建立

为建立一种快速诊断牛布鲁菌病的方法,以原核表达、纯化的外膜蛋白OMP22作为抗原,以带荧光标记的IgG抗体作为标记物制备免疫层析试纸条,建立一种布鲁菌病快速检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行验证。结果显示,制备的试纸条最低可检出1∶100稀释的牛布鲁菌标准阳性血清,且与牛结核、牛蓝舌病、牛病毒性腹泻、牛口蹄疫、牛巴氏杆菌病、牛白血病的血清无交叉反应;试纸条检测结果与商品化ELISA检测试剂盒(IDEXX)的符合率为93.5%。以上结果表明,建立的荧光标记免疫层析试纸条方法能快速检出牛血清中的布鲁菌抗体,具有良好的敏感性和特异性,是一种适合现场初筛的检测方法。     

钙通道阻断剂维拉帕米对耐恩诺沙星大肠杆菌的体外增敏试验

为评价钙通道阻断剂维拉帕米对耐抗菌药物恩诺沙星鸡源大肠杆菌体外增敏作用,采用试管倍比稀释法测定恩诺沙星、维拉帕米对临床分离的耐恩诺沙星、非耐恩诺沙星、标准大肠杆菌O2和O78共96株菌的最小抑菌质量浓度;恩诺沙星与维拉帕米联合药敏试验采用试管棋盘法,用部分抑菌浓度指数判断增敏效果。结果表明:维拉帕米单独使用对96株菌的最小抑菌质量浓度值均大于640μg/mL;维拉帕米与恩诺沙星联用后对77株耐恩诺沙星大肠杆菌中20株表现为协同作用,46株表现为相加作用;对其余11株临床耐药菌、17株临床敏感菌和2株标准敏感菌表现为无关作用,拮抗作用的为零。说明维拉帕米本身无抗菌活性,但对耐恩诺沙星鸡源大肠杆菌的耐药性具有一定程度的增敏作用。