山东潍坊地区犬冠状病毒的分离鉴定

收集2009年10月—2010年2月共4个月山东潍坊地区犬粪便样品42份,其中家庭单养犬的腹泻粪便样品20份,潍坊地区某养犬基地犬的健康犬粪便22份。对粪便进行常规处理后,用犬肾传代细胞系(MDCK)分离病毒,共得到3株病毒,分别命名为CCV-WF1,CCV-WF2,CCV-WF3。经电镜观察、病毒理化特性、动物回归试验及RT-PCR检测证明为犬冠状病毒(CCV)。血清交叉中和试验表明,3株病毒之间存在一定的抗原交叉性。     

猪瘟病毒RT-PCR检测方法的研究

为建立一种能够快速、确切诊断猪瘟（CSF）的方法,根据GenBank上已发表的猪瘟病毒（CSFV）核酸序列设计并合成了一对能特异性扩增CSFV基因片段的引物,经过条件优化后,建立了检测CSFV的RT-PCR方法,扩增病毒核酸片段长508bp。试验证明,该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,简便、快速、高效,为CSFV的快速准确诊断及进一步的CSF流行病学研究提供了重要的技术手段。     

一例猪繁殖与呼吸综合征醮实验室诊断

2011年10月,四川邛崃某猪场发生了一种以经产母猪流产、死产、产木乃伊胎、死胎及弱仔为主要特征的疾病。为确定病原,剖解2头病死仔猪,采集肺脏、脾脏组织,混合研磨提取组织总RNA,以实验室建立猪蓝耳病病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）核酸检测方法进行这2种病原的RT-PCR检测;采集小脑组织以酚氯仿法提取组织总D...     

木质素合成酶基因F5H的RT-PCR引物筛选

据EMBL核酸序列库中发表的白杨杂种F5H的cDNA序列,利用Primer 5.0软件设计3组扩增引物。通过PCR及RT-PCR扩增反应,筛选出一组比较合适的引物,确定该引物对的最适反应体系和程序参数。利用该引物对,从正在分化的2年生欧美杨107茎的次生木质部提取的mRNA中RT-PCR扩增出一个867bp的木质素合成特异表达的f5h基因片段。将其克隆到pGM-T载体上,构建了f5h在大肠杆菌中的表达载体,并对引物筛选进行讨论。     

紫花苜蓿GDP解离抑制蛋白基因cDNA的克隆、分析及烟草转化

采用RT-PCR方法,克隆得到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)GDP解离抑制蛋白基因cDNA核心区域序列,命名为MsGDI1。序列分析结果表明,该cDNA核心区域全长1575 bp,包含一个1332 bp的最大开放阅读框,编码444个氨基酸。半定量RT-PCR分析结果表明,在盐胁迫和铝胁迫条件下,MsGDI1基因的表达随着胁迫时间的增加而上升,该基因可能与紫花苜蓿抗盐耐铝机理有关。借助于新构建的该基因超表达载体,用农杆菌介导方法转化烟草(Nicotiana tabacum L.)。转基因烟草植株PCR检测的结果表明,MsGDI1基因已经成功插入到烟草基因组中,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。     

流感病毒核酸检测方法研究进展

流感病毒可以引起人和动物高度接触性传染性疾病,对公共卫生和畜禽养殖业均造成极大的威胁.因此,准确而又快速的诊断方法对流感的防控起着非常重要的作用.近年来,流感病毒的核酸诊断技术发展较快,主要有RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、基因芯片、逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)等.论文对这些诊断技术的基本原理和应用现...     

中国3种旧大陆猴TRIMCyp嵌合基因的存在状况及基因特性研究

本研究应用PCR方法检测了中国3种旧大陆猴(恒河猴、食蟹猴及藏酋猴)的TRIMCyp嵌合基因型个体的存在状况,并首次发现携带TRIMCyp嵌合基因中国品系恒河猴。同时本实验应用建立RT-PCR方法在mRNA水平上进一步检测了恒河猴和食蟹猴的TRIMCyp嵌合基因序列和特性。其编码的融合蛋白TRIMCyp丧失了对HIV-1复制的限制功能,推测具有该基因型旧大陆猴对HIV-1更易感,可用于建立新型的艾滋病非人灵长类动物模型。本研究结果将促进逆转录病毒跨种间传播的研究和建立HIV-1易感非人灵长类动物模型。     

藏鸡NSTN基因克隆与mRNA组织表达谱分析

肌肉生长抑制素(MSTN)是骨骼肌发育的负性调控因子,本研究用RT-PCR方法克隆藏鸡MSTN编码基因,用半定量RT-PCR方法检测MSTN mRNA在藏鸡腿肌等10个组织的表达情况.结果显示,藏鸡MSTN DNA长1128 bp,编码375个氨基酸.藏鸡与原鸡氨基酸序列一致率为99.7％,有6个同义突变和1个非同义突变的氨基酸差异.MSTN mRNA在腿肌、胸肌、心脏、肾脏、睾丸、卵巢、胃中均检测到表达,脂肪、肝脏、肺中未检测到MSTN mRNA表达.MSTN mRNA表达水平由高到低的顺序为:腿肌、胸肌、心脏、肾脏、睾丸、卵巢和胃.     

蜜蜂残翼病RT-PCR快速检测方法的建立

为了建立蜜蜂残翼病病毒(Deformed wing virus,DWV)RT-PCR快速检测方法,试验采用GenBank公布的蜜蜂残翼病病毒全基因序列设计1对特异性引物,对所提取的RNA进行反转录合成cDNA后,进行聚合酶链式反应,并对这种快速检测方法的特异性和敏感性进行研究。结果表明:在约702 bp处出现目的条带,其他病原无目的条带出现,灵敏性可达1×104的模板稀释度。     

三种鉴别诊断PRRSV美洲型经典毒株和变异株的方法比较

我国流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）包括美洲型经典毒株和变异株。本研究应用RT—PCR、直接免疫荧光（ direct immunofluorescence asay, DFA ）及病毒分离3种检测方法对99份不同类型的猪繁殖与呼吸综合征临床疑似病料和人工感染病料进行检测。结果显示,RT—PCR检测试剂盒敏感性最高,DFA鉴别诊断试剂盒次之,病毒分离最差。DFA与病毒分离、RT—PCR的总符合率分别为92％和85．5％。RT—PCR灵敏性高,可作为PRRSV鉴别诊断的首选方法;DFA鉴别诊断法所需时间较短、特异性好,但需要一定的操作经验;病毒分离敏感性低、操作繁琐,阳性分离需要其它方法验证,不适合于PRRSV的鉴别诊断。