鸡γ-干扰素cDNA的克隆和在大肠杆菌中的温度诱导型表达

克隆了鸡(Gallus gallus)的γ-干扰素cDNA，并用大肠杆菌(Escherichia coli)进行了温度诱导型表达。用PCR方法扩增了鸡γ-干扰素基因组基因，将其克隆到载体pGEM-T上。对重组载体的插入片段进行酶切分析和部分序列测定：证明了基因的正确性；克隆的鸡γ-干扰素基因的编码序列中存在一个点突变(G→A)，这一突变导致一个三联体密码子GAA变为AAA，编码的氨基酸由谷氨酸(Glu)变为赖氨酸(Lys)。用鸡γ-干扰素基因组基因构建了真核表达载体pCI-ChIFN。将这一真核表达载体转染兔成纤维细胞的细胞系中进行表达实验：提取转染后细胞裂解物中的RNA，再以此为模板进行RT—PCR，获得了完整的鸡γ-干扰素cDNA基因，同时证明鸡γ-干扰素基因组基因能在兔成纤维细胞系中表达。用鸡γ-干扰素cDNA构建了温度诱导型原核表达载体pBVcDNA，并将其转导到大肠杆菌DH5α中，经细菌发酵和温度诱导，表达了一个18kD的特异蛋白，其表达量占细菌总蛋白的8．75％。     

中国人白细胞介素-12 (hIL-12)cDNA克隆及序列分析

根据已发表的IL-12两个亚基P35 cDNA序列（NM-000882）与P40 cDNA序列（NM-002187）设计2对引物。以LPS刺激的人脐血淋巴细胞为材料，采用RT-PCR技术从总RNA扩增hIL-12基因，包括完整的前体蛋白编码序列。所得到的序列与GenBank中发表的一致，但与CLMF和NKSF序列有所差异。P35同CLMF相比，244aa密码子GAC（Asp）→GAT（Asp）、247aa密码子ACG（Thr）→ATG（Met）；与NKSF比较，44aa密码子GTC（Val）→GTG（Val）。P40同NKSF比较239aa密码子AAC（Asn）→AAG（Lys），291aa密码子ACC（Thr）→ACG（Thr）；P40同CLMF相比较，氨基酸与核苷酸序列完全一致。通过与不同物种氨基酸及核苷酸序列比较分析，P40亚基与其它动物的同源性80％以上，P35亚基与其它动物同源性在70％。     

鉴别H5亚型两种分支禽流感病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

为准确区分H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支的毒株,通过对GenBank和GISAID数据库中发表的以及本实验室保存的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行比对,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H5亚型禽流感病毒不同分支毒株的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法的反应体系和反应参数进行了优化,同时开展了特异性和敏感性试验,以及临床应用检测。结果显示:该方法具有良好的特异性,与其他亚型禽流感病毒及常见禽病病毒无交叉反应;对H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支毒株的检测灵敏度分别为495.0 copies/μL和22.3 copies/μL;100份临床家禽拭子禽流感病毒检测结果与常规RT-PCR和病毒分离检测结果一致,符合率为100%。结果表明,该方法特异、敏感、准确、耗时少,同时还可区分不同分支,可应用于H5亚型禽流感病毒的准确、快速检测。     

牛卵巢中Ghrelin mRNA的表达

为了确定牛卵巢上生长激素释放多肽(Ghrelin)的表达情况,试验采用RT-PCR方法检测牛卵巢上Ghrelin的表达情况。结果表明:Ghrelin mRNA在牛卵巢(卵母细胞、颗粒细胞和黄体)上有表达,特别是在卵母细胞中。     

种公猪精液中的猪瘟病毒RT-PCR快速检测

为了研究猪瘟病毒在种公猪精液、精子中的分布情况,试验对7份种公猪精液中的精子和3份精液上清液进行了猪瘟病毒特异基因片段的RT-PCR扩增。结果表明:在种公猪的精子及精液上清液中均存在猪瘟病毒。说明猪瘟病毒可以通过精液和精子传播。     

鸭病毒性肝炎的研究现状

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒（Duck Hepatitis Virus，DHV）引起的一种高度致死性、高度传播性的传染病。症状为雏鸭精神萎靡，食欲不振，而后出现神经症状，运动多呈共济失调，两腿痉挛，死亡雏鸭呈特征性的角弓反张姿势。     

神经肽S及其受体在猪免疫器官中的表达及分布

本研究采用半定量RT-PCR方法,对神经肽S(NPS)及其受体(NPSR)mRNA在猪免疫器官中的表达水平进行检测。结果表明,NPSmRNA在胸腺、脾、空肠淋巴结和软腭扁桃体中均有表达,且在脾和胸腺中的表达水平较高;NPSR mRNA在脾脏的表达水平最高。进一步利用免疫组织化学法对NPS在猪免疫器官中的分布定位进行了研究,在猪脾脏和空肠淋巴结均有NPS免疫阳性细胞分布,但在软腭扁桃体和胸腺中未见NPS免疫阳性细胞。再进行免疫接种猪传染性胃肠炎疫苗,运用半定量RT-PCR技术检测免疫接种后不同时间(3、7、14 d)NPS及其受体mRNA在猪免疫器官中表达水平的变化规律。结果表明,NPS mRNA和NPSR mRNA在胸腺、脾、淋巴结和扁桃体中均有表达,且在一定时间范围内呈现先升高后下降的变化规律,但对照组无明显的升高和下降现象。上述结果提示,猪NPS可能参与免疫功能的调节。     

鸡传染性支气管炎病毒的分离与鉴定

鸡传染性支气管炎对全球养鸡业带来巨大损失，虽已有商品化疫苗用于临床预防该疾病，免疫鸡群高发病率、高死亡率现象仍然常见。本试验旨在为重庆地区的传支流行毒株进行调查。通过病毒的分离培养和高变区部分序列测序，发现流行于重庆地区的鸡传染性支气管炎毒株与现有的疫苗毒株存在较大差异。某些位点的基因突变与病毒特性的改变之间是否存在联系还需要进一步的研究。     

RT-PCR技术在BVDV检测中的应用研究进展

<正>牛病毒性腹泻/黏膜病,简称牛病毒性腹泻病。1946年在纽约州病牛中首先发现并报道为牛病毒性腹泻病(BVD),1953年Ransey与Chiver发现了牛黏膜病(MD),后     

SPF雏鸡感染REV后IL-6和IFN-γ mRNA表达的动态变化

建立并利用鸡白细胞介素6和γ干扰素荧光定量RT-PCR方法,对于禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendo-theliosis virus,REV)感染SPF鸡后主要免疫器官的鸡白细胞介素6和γ干扰素基因转录水平进行了初步研究.结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和腔上囊中IL-6和IFN-γ的分泌水平在所有时间点均显著升高(P＜0.05)或极显著升高(P＜0.01).本试验为探讨REV感染的免疫抑制机理打下了一定基础.