| 鸡γ-干扰素cDNA的克隆和在大肠杆菌中的温度诱导型表达 |
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| 引用本文： | 高山,杨国庆,郭英,陈永福,张沅,张勤.鸡γ-干扰素cDNA的克隆和在大肠杆菌中的温度诱导型表达[J].农业生物技术学报,2003,11(4):394-398. |
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| 作者姓名： | 高山 杨国庆 郭英 陈永福 张沅 张勤 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京,100094
2. 中国农业大学动物科技学院,北京,100094 |
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| 摘 要： | 克隆了鸡(Gallus gallus)的γ-干扰素cDNA，并用大肠杆菌(Escherichia coli)进行了温度诱导型表达。用PCR方法扩增了鸡γ-干扰素基因组基因，将其克隆到载体pGEM-T上。对重组载体的插入片段进行酶切分析和部分序列测定：证明了基因的正确性；克隆的鸡γ-干扰素基因的编码序列中存在一个点突变(G→A)，这一突变导致一个三联体密码子GAA变为AAA，编码的氨基酸由谷氨酸(Glu)变为赖氨酸(Lys)。用鸡γ-干扰素基因组基因构建了真核表达载体pCI-ChIFN。将这一真核表达载体转染兔成纤维细胞的细胞系中进行表达实验：提取转染后细胞裂解物中的RNA，再以此为模板进行RT—PCR，获得了完整的鸡γ-干扰素cDNA基因，同时证明鸡γ-干扰素基因组基因能在兔成纤维细胞系中表达。用鸡γ-干扰素cDNA构建了温度诱导型原核表达载体pBVcDNA，并将其转导到大肠杆菌DH5α中，经细菌发酵和温度诱导，表达了一个18kD的特异蛋白，其表达量占细菌总蛋白的8．75％。
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| 关 键 词： | 鸡γ-干扰素 cDNA 克隆 大肠杆菌 温度诱导 真核表达 RT-PCR 原核表达 |
| 修稿时间： | 2002年6月7日 |
Cloning of Chicken Interferon-γcDNA and Its Temperature-induced Expression in Escherichia coli |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PCR RT-PCR |
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