潍坊市犬奇异变形杆菌分离鉴定及耐药性检测

奇异变形杆菌为人兽共患病原菌,多为继发感染.本研究从潍坊地区宠物医院的犬瘟热患病犬眼鼻分泌物和犬细小病毒感染患病犬直肠粪便中,共采集样品39份,进行奇异变形杆菌分离鉴定和耐药性检测.结果显示:分离鉴定出11株奇异变形杆菌,分离率为28.20％,其中犬细小病毒感染犬的奇异变形杆菌分离率为47.37％;16S rRNA序列...     

广东珠三角地区犬细小病毒分离与鉴定

为了解珠三角地区犬细小病毒(CPV)的流行情况及研制有效的疫苗,本研究开展了CPV流行病学调查,并将32份疑似CPV感染犬的粪便样品处理后接种F81细胞进行病毒分离,并对分离株进行鉴定。鉴定结果显示:32份样品中有19份样品提取液在F81细胞上可以产生明显的细胞病变;HA效价可达到1∶256。回归动物试验显示分离株可以导致犬出现明显的CPV感染症状,PCR鉴定也进一步确定所分离的病毒为CPV。通过VP2基因同源性分析显示分离株与国内主要的流行基因亚型CPV-2a的同源性达98%以上。     

凌源县犬病毒病的调查

在凌源地区五个品种的犬中,德国黑背犬的发病率最高.达65.3%;2～3月龄幼犬发病率(82.6%)高于其它年龄组的犬.抽样检查的11份样品,有10份血清为犬细小病毒(CPV)血凝抑制抗体阳性;10份粪便的CPV血凝阳性或疑似阳性,经电镜观察见有典型的细小病毒和冠状病毒颗粒,1份脏器样品见有典型犬瘟热病毒。从2份粪便样品中分离出CPV.     

犬细小病毒性肠炎的诊断研究——犬细小病毒血凝和血凝抑制试验

本文改进了犬细小病毒血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验,即采取病犬的粪便和血清样品,经过2—ME处理后,同时测定粪便和血清样品的IgM性HI抗体和粪便样品的HA效价,三项试验互相补充,只要有一项为阳性,即诊断为犬细小病毒性肠炎。应用上述方法,76份阳性粪便、16份阳性血清全部正确检出;120份健康犬粪和130份健康犬血清全部为阴性。对方法改进的依据在讨论中作了阐述。     

湖南娄底市犬弓首蛔虫流行状况及线粒体cox1和nad4序列变异分析

为了解湖南省娄底市犬弓首蛔虫流行状况及虫株遗传变异情况，本试验于2021年3—9月对该地区368份犬粪便和104份环境(土壤和水源)样品的犬弓首蛔虫污染情况进行调查；对9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox1和nad4序列进行扩增、测序与分析。结果显示：被调查的犬粪便和环境样品的犬弓首蛔虫虫卵检出率分别为13.59%(50/368)和18.27%(19/104);其中宠物犬(11.74%)较流浪犬(17.36%)来源粪便样品检出率低，公园来源土壤样品(9.09%)较小区来源样品(3.92%)检出率高；9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox1和nad4序列长度分别为424 bp和1 197 bp,核苷酸序列同源性为99.4%～100.0%和98.7%～100.0%,与其他具有代表性蛔虫分离株对应序列同源性均低于90%;9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox1和nad4序列核苷酸多样性分别为0.007±0.002和0.006±0.003。结果表明湖南娄底市犬弓首蛔虫分离株遗传变异较低，但虫卵流行状况严重，且存在于公共环境中，对人类健康造成潜在威胁。     

犬细小病毒黑龙江流行株的分离鉴定及其VP2基因的遗传进化分析

为了解黑龙江省犬细小病毒(CPV)的流行情况,本研究从黑龙江省哈尔滨市、双城市、鹤岗市和大庆市的宠物医院共收集了 10份经胶体金拭子检测为CPV阳性的犬粪便样品,利用F81细胞进行病毒的分离,并对分离的病毒进行PCR、血凝性试验、病毒分型鉴定和VP2基因的遗传进化分析.结果显示,有8份处理后的病料样品接种猫肾细胞F81...     

犬用细小病毒自然弱毒株的分离、鉴定和免疫研究

应用猫肾传代细胞F81系,以同步接毒和带毒传代的方法。先后从50份犬、15份狐、75份貉和8份狮、虎、豹病料中分碍15株犬细小病毒(cpv)、3株貉细小病毒和6株猫泛白细胞减少症病毒,未分到狐细小病毒。通过人工感染试验,从中挑选到1株对犬和本动物无致病性、但具有良好免疫原性的细小病毒——貉细小病毒CR86106株。经核酸型、形态学、理化学、生物学特性试验以及与CPV核酸酶切图比较试验等系统鉴定,CR86106株病毒为1株与CPV特性基本相同,但也存在有一定差别的小DNA病毒。免疫试验和田间试验证明,CR86106株病毒遗传性稳定;对母源抗体干扰具有较强的抵抗力;免疫接种犬虽可随粪便排出少量原接种病毒,但不会使同居犬感染发病;试验犬经两次疫苗接种后攻毒,可获得完全保护,且不会随粪便排出强毒。累计免疫军、警犬3320只,全部安全,保护率达99.28％。     

犬细小病毒VP2基因序列分析及BJ-1株的分离鉴定

为分离犬细小病毒毒株,对临床经胶体金试纸条检测CPV阳性的8份犬粪便样品进行VP2全长编码片段扩增与测序。VP2片段序列分析结果显示,8株临床样品的VP2基因全长均为1 755 bp,氨基酸的同源性为98.5%～100%。遗传进化分析显示,所有分离的毒株均与所参考的中国分离株在一个分支上。其中1株属于New CPV-2b,其余7株均为New CPV-2a。在序列分析基础上,选择北京地区的1份犬粪便样品,接种F81细胞进行病毒分离。粪便样品接种F81细胞盲传5代后出现典型的病变。对该毒株进行电镜观察、免疫荧光试验以及蛋白电泳鉴定。电镜观察显示病毒粒子的外形结构为圆形或六边形,直径约25 nm,可见实心和空心病毒粒子。间接免疫荧光结果显示,接种病毒液的细胞出现特异性亮绿色荧光信号,对照细胞无荧光信号。纯化后的病毒蛋白电泳显示两条清晰的条带分别为VP1(76 ku)、VP2(64 ku)。结果表明,成功分离到1株New CPV-2a亚型毒株,并将其命名为CPV BJ-1株。     

广西地区牛库布病毒RT-PCR检测及其遗传进化分析

为了了解广西地区奶牛、肉牛的牛库布病毒(bovine Kobuvirus, BKV)感染情况及分子特征，试验采用RT-PCR的方法对从广西地区采集的奶牛粪便177份、肉牛粪便27份(共204份粪便，其中腹泻牛粪便82份，健康牛粪便122份)进行BKV和其他肠道病毒的检测，分析BKV与其他肠道病毒的共感染情况，以及不同地点和不同季节BKV的感染情况，同时对广西地区BKV的3D基因与国内外30株库布病毒的3D基因进行核苷酸序列同源性分析和遗传进化分析。结果表明：广西地区BKV的感染率为2.94%(6/204),均从腹泻牛粪便中检出，其中奶牛和肉牛的感染率分别为2.26%(4/177)、7.41%(2/27),将6株毒株分别命名为BKV-GXGG01(贵港株)、BKV-GXHC01(河池株)、BKV-GXHC02(河池株)、BKV-GXNN01(南宁株)、BKV-GXNN02(南宁株)和BKV-GXNN03(南宁株);BKV与牛病毒性腹泻病毒、牛肠道病毒和牛星状病毒存在混合感染，感染率为66.67%(4/6),而单一感染率为33.33%(2/6);6株广西地区BKV毒株的3D基因间的核苷酸序...     

华中地区犬细小病毒流行病学调查及其VP2基因序列分析

为了解华中地区犬细小病毒2型(CPV-2)的流行趋势以及变异情况，本研究于2020年9月至2022年1月间采集华中地区的418份疑似感染犬细小病毒的粪便样品，通过PCR方法检测，利用F81细胞进行病毒分离、间接免疫荧光试验，并对分离病毒的VP2基因进行氨基酸序列及其同源性和遗传进化分析。结果显示，358份病料检测出CPV-2,阳性率为85.65%。病料接种F81细胞后，有23份阳性样品出现明显细胞病变，间接免疫荧光试验观察到明显荧光。VP2基因序列分析结果表明，分离毒株中有New-CPV-2a型12株、New-CPV-2b型5株、CPV-2c型6株。核苷酸同源性为97.9%～99.8%,氨基酸同源性为95.9%～100.0%。遗传进化分析结果显示，分离毒株与国内分离株、伊朗、巴西分离株亲缘关系较近，与意大利、日本、阿根廷分离株亲缘关系较远。本研究为华中地区犬细小病毒防控及研制高效疫苗奠定了基础。     

犬细小病毒四川株的分离与鉴定

为更好地了解我国细小病毒流行情况,笔者从四川农大动物医院采集5份患出血性肠炎犬的粪便,通过猫肾细胞(F81)传代培养后,成功分离到两株犬细小病毒。对两株病毒进行病毒形态学、理化学、血凝试验、PCR鉴定与分子生物学系统鉴定后,证实分离株是犬细小病毒,通过VP2结构蛋白测序分析表明,新分离到的两株细小病毒抗原型分别属于CPV-2a和CPV-2b。     

南京地区犬细小病毒基因型鉴定

为调查南京地区犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)基因型分布情况,采集南京市某宠物医院2012—2019年犬细小病毒病患犬粪便43份作为检测病料,通过PCR扩增犬细小病毒VP2基因片段,并将扩增产物测序,分析CPV基因型。结果显示,43份病料皆扩增出目的片段,经测序后使用MegAlign软件与GenBank中犬细小病毒已知基因型对比分析,其中New-CPV-2a基因型为26株,占60.5%;New-CPV-2b基因型为9株,占20.9%;CPV-2c基因型为8株,占18.6%。研究结果表明,南京地区近年来犬细小病毒基因型发生了很大的变异,以New-CPV-2a为优势基因型,同时存在New-CPV-2b和CPV-2c基因型。本研究为南京地区预防和治疗犬细小病毒病提供理论依据。     

四川部分地区犬圆环病毒的病原检测及基因组特征

为调查犬圆环病毒(CanineCV)在四川部分地区的流行情况及基因组特征,本研究采用荧光定量PCR方法检测了2015年～2017年采集自四川6家宠物医院的208份腹泻犬粪便样品。结果显示CanineCV的平均阳性率为15.4%(32/208),3年间的检出率无明显变化;并且阳性样品均与一种或多种病原共感染。获得了6条完整的CanineCV Rep基因序列及1株CanineCV (CD17/2016)全基因组序列,进化分析显示CanineCV四川株(CD17/2016)与GenBank中的国内另外2株CanineCV遗传距离较远。本研究首次对国内腹泻犬进行了CanineCV感染的调查,证明CanineCV在四川部分地区宠物犬中已流行,建议把CanineCV作为犬腹泻病原诊断的一个检测内容,同时对其分子特征的研究结果将有助于进一步了解国内CanineCV的遗传多样性。     

犬细小病毒四川株的分离与鉴定

采集5份患出血性肠炎犬的粪便,通过猫肾细胞(F81)传代培养后,成功分离到2株病毒。对2株病毒进行病毒形态学、理化学、血凝试验、PCR鉴定与分子生物学系统鉴定后,证实分离株是犬细小病毒,通过VP2结构蛋白测序分析表明,新分离到的2株细小病毒抗原型分别属于CPV-2a和CPV-2b。     

犬细小病毒宁夏株的分离与鉴定

本试验采集宁夏地区疑似犬细小病毒感染病犬的粪便拭子,经过预处理后同步接种胎猫肾细胞(FK81),盲传3代后发现FK81细胞出现明显的细胞毒性改变(CPE)。冻融收获病毒后,对分离出来的病毒进行电镜观察、间接免疫荧光试验(IFA)检测、特异性PCR鉴定及VP2全基因序列扩增分析,成功分离培养出1株犬细小病毒(CPV)。     

犬细小病毒敦化株的分离与鉴定

为了丰富我国延边地区犬细小病毒流行病学研究资料,为进一步研究有效的疫苗及诊断试剂做前期基础工作。采集延边州敦化市地区疑似犬细小病毒感染病犬的粪便样品,经过预处理后同步接种猫肾细胞(F81),盲传至细胞出现明显病变,经形态学、分子生物学、免疫学等方法进行分析鉴定。结果:分离到的病毒可使F81细胞出现特异性病变、电镜下可见清晰的病毒粒子、其培养物可使红细胞发生凝集且能被特异性阳性血清所抑制、用特异性引物进行PCR检测结果呈阳性、免疫荧光试验可见培养物出现特异性绿色荧光,针对其VP2序列建立的进化树显示其与new CPV-2b型犬细小病毒有较高的同源性。结论:通过上述试验确定分离出1株犬细小病毒,分离的病毒为new CPV-2b型,命名CPV-DH-3株。     

犬的病料中检测到猪圆环病毒3型

为进一步弄清我国犬是否感染猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3),本试验对山东省青岛市某宠物医院采集发病犬的48份样品进行PCV3荧光PCR检测,发现7份病料呈现明显阳性,对这7株阳性样品继续用普通PCR扩增,有3份可以扩增出228 bp的特异性条带。这些条带测序后与圆环病毒的其他参考序列进行同源性分析,结果显示这3份样品的病毒序列与其他PCV3参考序列处于同一个进化分支,与PCV3的同源性为93.3%～99.5%,表明我国犬确实存在PCV3感染。     

上海等4省市动物冠状病毒的流行病学调查

对上海、浙江、安徽和湖北4个地区感染鸡、鸭、猪、牛和犬的5种冠状病毒,即禽传染性支气管炎病毒(IBV)、猪传染性胃肠炎病毒(TEGV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、牛冠状病毒(BCV)和犬冠状病毒(CCV)进行病原学和血清学抽查,共完成测试样品2 368份,包括566份拭子样品和1 802份血清样品。检出IBV抗原阳性4份。在血清学调查中,发现IBV抗体的阳性率为86.4%(鸡)和0.7%(鸭);猪TGEV阳性率为6.8%,PRCV阳性率为18.7%;牛BCV阳性率为5.4%;犬冠状病毒的阳性率为50%。     

犬支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定

犬传染性支气管炎又称犬窝咳,是由犬支气管败血波氏杆菌(Bb)、犬腺病毒2型(CAV-2)、犬瘟热病毒(CDV)和犬副流感病毒(CPiV)中的一种或几种病原混合感染引起的。为研究Bb在窝咳犬中的阳性检出率和分离株的生物学特性,2006年10月到2008年1月,从南京和北京两地共采集了164份患有窝咳的犬鼻腔拭子,对其进行Bb的分离培养,通过形态学、生化试验、血清学及PCR鉴定,证实最终分离到了16株Bb,分离阳性率为9.8%,药敏试验结果显示16株细菌生物学特性和对多种抗生素敏感性基本相同。此外,对16份Bb阳性病料样品分别进行CAV-2、CDV、CPiV检测,结果表明:由单纯Bb引发犬窝咳病例占19%,与犬瘟热混合感染的机率最高(43%),其次为与CPiV(31%)和CAV-2(25%)混合感染。2种病原混合感染引起窝咳的比率最高,为56%;3种病原混合感染的几率为19%;4种病原混合感染的几率为6%。     

南京地区流浪犬钩虫感染情况调查

犬钩虫病是一种常见的危害较大的犬类寄生虫病。本试验采集南京某流浪犬收容基地的71份犬粪便,用饱和食盐水法专项检测犬钩虫虫卵,对其感染情况进行统计。结果显示,在采集的71份样品中,39份样品钩虫检验呈阳性,犬钩虫感染率为54.93%,平均感染强度(EPG)为2.63×103。本次试验结果有助于了解南京地区流浪犬钩虫病感染情况,也为进一步研究犬钩虫病的发生、感染、传播与防治提供了理论依据。